研究背景:骨骼肌挫傷是運(yùn)動(dòng)性骨骼肌損傷的常見(jiàn)形式,并且伴隨著多種免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)。巨噬細(xì)胞的M1/M2極化對(duì)挫傷骨骼肌修復(fù)具有重要作用,而Treg細(xì)胞可調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞M1/M2極化,同時(shí)促進(jìn)損傷骨骼肌修復(fù)。但Treg細(xì)胞在損傷骨骼肌中聚集,從而調(diào)控巨噬細(xì)胞極化,參與骨骼肌修復(fù)再生的具體機(jī)制尚未闡明。另有研究表明,PD-1可調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞M1/M2極化;而Treg細(xì)胞也表達(dá)PD-1,PD-1可促進(jìn)外周組織中Treg細(xì)胞的產(chǎn)生,對(duì)維持Treg細(xì)胞的正常功能有著重要作用。因此,本研究的目的是探索PD-1在損傷骨骼肌修復(fù)再生過(guò)程中的作用,闡明PD-1對(duì)Treg細(xì)胞生成以及巨噬細(xì)胞M1/M2極化的調(diào)控,這將加深我們對(duì)免疫系統(tǒng)與骨骼肌再生關(guān)系的認(rèn)識(shí)。研究方法:40只雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為損傷后1天、3天、7天、14天以及未損傷組(WT1、WT 3、WT 7、WT 14、WT _con,n=8);30只雄性PD-1敲除C57BL/6小鼠隨機(jī)分為損傷后1天、3天、7天、14天以及未損傷組(P1、P3、P7、P14、P_con,n=6)。骨骼肌挫傷后1天、3天、... 

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【部分圖文】：

骨骼肌挫傷后各時(shí)間點(diǎn)WT組PD-1表達(dá)情況

PD-1通過(guò)調(diào)控Treg細(xì)胞和巨噬細(xì)胞促進(jìn)挫傷骨骼肌修復(fù)再生19圖2:WT組和PD-1-/-組小鼠骨骼肌挫傷修復(fù)的形態(tài)學(xué)表現(xiàn)WT:野生型小鼠；PD-1-/-:PD-1敲除小鼠。a：HE染色結(jié)果；b：傷后14天再生肌纖維直徑對(duì)比。數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差,*與WT14相比，P<0.05。4.3PD-1敲除對(duì)挫傷骨骼肌纖維化程度的影響Masson染色結(jié)果顯示，WT14組(圖3a)與P14(圖3b)組骨骼肌均出現(xiàn)藍(lán)色膠原纖維，表明挫傷骨骼肌出現(xiàn)纖維化修復(fù)。但WT14組與P14組藍(lán)色膠原纖維面積大小無(wú)顯著性差異(P>0.05)(圖3a、b、c)。此外，WT組與PD-1-/-組Col1a1、Col3a1mRNA水平在損傷后1、3、7、14天都顯著高于未損傷組(P<0.05)。但PD-1-/-組與WT組相比仍然沒(méi)有顯著差異(P>0.05)(圖3d、e)。這些結(jié)果表明，雖然在挫傷骨骼肌修復(fù)過(guò)程中出現(xiàn)了纖維化修復(fù)，但PD-1敲除并不影響挫傷骨骼肌纖維化水平。

PD-1通過(guò)調(diào)控Treg細(xì)胞和巨噬細(xì)胞促進(jìn)挫傷骨骼肌修復(fù)再生20圖3：WT組和PD-1-/-組骨骼肌挫傷后纖維化情況WT:野生型小鼠；PD-1-/-:PD-1敲除小鼠。a:WT組以及PD-1-/-組Masson染色結(jié)果，紅色部分為肌細(xì)胞質(zhì)，藍(lán)色部分為膠原纖維；b:WT組以及PD-1-/-組藍(lán)色膠原纖維面積與總面積之比；c:骨骼肌挫傷后各時(shí)間點(diǎn)Col1a1mRNA表達(dá)水平；d:骨骼肌挫傷后各時(shí)間點(diǎn)Col3a1mRNA表達(dá)水平。數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差,n(WT)=8，n(PD-1-/-)=6。a與WTcon組相比，P<0.05；b與Pcon組相比，P<0.05。4.4PD-1敲除對(duì)挫傷骨骼肌Treg細(xì)胞的影響Treg細(xì)胞標(biāo)志物Foxp3[100]的免疫熒光結(jié)果顯示(圖4a)，在骨骼肌挫傷后1天，WT組與PD-1-/-組骨骼肌出現(xiàn)少量Treg細(xì)胞浸潤(rùn)，并且此時(shí)WT組與PD-1-/-組Treg細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯差距。在骨骼肌挫傷后3天，WT組出現(xiàn)大量Treg細(xì)胞浸潤(rùn)，而PD-1-/-組Treg細(xì)胞數(shù)量少量增多，并且PD-1-/-組Treg細(xì)胞數(shù)量少于WT組。在骨骼肌挫傷后7天，WT組Treg細(xì)胞數(shù)量大量減少，而PD-1-/-組Treg細(xì)胞數(shù)量變化不大，但PD-1-/-組Treg細(xì)胞數(shù)量依舊少于WT組。在骨骼肌挫傷后14天，WT組Treg細(xì)胞數(shù)量進(jìn)一步減少，接近正常水平，而PD-1-/-組Treg細(xì)胞數(shù)量仍然變化不大，維持一個(gè)中等水平，但此時(shí)PD-1-/-組Treg細(xì)胞數(shù)量多于WT組。說(shuō)明此時(shí)挫傷骨骼肌仍未完全修復(fù)，PD-1-/-小鼠挫傷骨骼肌修復(fù)受損。WT組AREGmRNA水平在損傷后1、3、7天顯著高于WTcon組(P<0.05)；PD-1-/-組AREGmRNA水平在損傷后1、3、7、14天與Pcon組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)。此外，在損傷后1、3、7天PD-1-/-組AREGmRNA水平都顯著低于WT組(P<0.05)(圖4b)。這些結(jié)果表明，與正常挫傷骨骼肌相比，PD-1敲除的挫傷骨骼肌Treg細(xì)胞生成減少，并且功能受損，挫傷骨骼肌修復(fù)受損。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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