目的:新輔助放化療后的療效判斷對于局部晚期直腸癌的綜合治療策略非常有意義。新輔助放化療后達到臨床完全緩解（cCR）的患者可采用“觀察等待”策略,避免手術(shù)保留直腸器官。當前挑戰(zhàn)在于如何評價cCR的時機和標準,以及缺乏更精確的判斷和預測cCR的方法。目前的影像學等常規(guī)方法無法準確識別cCR。循環(huán)腫瘤細胞（CTCs）是腫瘤生物標志物的實時來源。CTCs的分離和分型將有助于識別cCR患者,CTCs動態(tài)觀察可監(jiān)測直腸癌新輔助放化療治療的療效。方法:本研究采集了 2017-01至2019-11在安徽省立醫(yī)院診斷為直腸癌的48例患者外周血樣本,進行本項目研究。第一次血樣采樣在患者新輔助放化療前,第二次血液采樣在手術(shù)前。所有血液樣本均在采集后4 h內(nèi)處理。為避免產(chǎn)生偏見,收集樣本,收集和/或分析數(shù)據(jù)或評估CTCs亞型的醫(yī)師和患者均不知臨床分期。本研究使用CanPatrol CTCs富集技術(shù),外周血標本中CTCs計數(shù)>3個CTCs/7.5 ml則被認為陽性結(jié)果。采用磁共振進行臨床分期和療效判斷。分析臨床病理參數(shù)與不同EMT表型的CTCs在局部晚期直腸癌患者中的臨床意義。結(jié)果:本研究納入了 48例符... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１：循環(huán)腫瘤細胞形成遠處轉(zhuǎn)移不意圖（Ｍａｓｓａｇｕ６，Ｊ，Ｎａｔｕｒｅ，２０１６）??ＣＴＣｓ是液體活檢重要的組成部分［２］

?山東大學碩士學位論文???糸籲參?ｃ＿？ｒ？＾一?＿?？??？?Ｗ〇〇４?＜？？？?ＭＩＭ?Ｐ＊ｒｖ？ｃｎ？?Ｃ??—二一??：??（ｄ，??圖２：膜孔大小及過濾裝置示意圖（Ｙｏｏｎ?Ｙ，?Ｓｃｉ?Ｒ印，２０１６）??該裝置設計了包括１２個直徑為８ｐｍ圓柱形的孔，可直接過濾１０?ｍｌ?１：１０稀釋的??樣品�？梢栽诓黄茐哪[瘤細胞的情況下富集到腫瘤細胞，但其特異性低阻礙了其??實用性。與ＩＳＥＴ？相似，ＳｃｒｅｅｎＣｅｌｌ？過濾裝置使用圓形的過濾膜，具有６．５ｐｍ和??７．５?ｐｍ的濾孔，分別用于分離流動細胞和吸附固定細胞。該設備包括三種不同的??類型：ＳｃｒｅｅｎＣｅｌｌ１＊?ｃｅｌｌ分離固定相細胞用于細胞學研宄；ＳｃｒｅｅｎＣｅｌ廣ＣＣ和??ＳｃｒｅｅｎＣｅｌｌ？ＭＢ分離流動相細胞，用于細胞分子生物學。與ＩＳＥＴ？相比，??ＳｃｒｅｅｎＣｅｌｌ？具有可富集不固定活動細胞的優(yōu)勢。然而，由于白細胞的污染，特異??性仍有待提高。此外，ＣｅｌｌＳｉｅｖｅ？（Ｃｒｅａｔｖ?ＭｉｃｒｏＴｅｃｈ）包含１６０，０００個直徑為７?ｆｘｍ??濾孔，均勻分布在直徑９ｍｍ的過濾區(qū)域。該設計分別將液相和固相的捕獲效率??分別提高了?２５％和３５％。此外，過濾器污染從４７８４０個減少到３９２０個白細胞，??減少了十倍以上。如何進一步優(yōu)化過濾裝置是微孔過濾分離富集ＣＴＣｓ的核心。??采用ＲＩＥ技術(shù)來刻蝕聚對二甲苯膜，可以精確控制過濾器中膜孔大小，幾何形??狀和密度。可以在ｌｃｍ２的聚對二甲苯膜上刻出ｌＯｐｎ直徑的圓形膜孔。使ＣＴＣｓ??的回收率＞９０％。然而，由于ＣＴＣｓ和白細胞之間的大小重疊，基于過濾器的分??離富集ＣＴ

?山東大學碩士學位論文???（ａ）?７ｂ）＂＂??ＢＴＩｆｌｆ漏＝纖二纖??ｒＺｇ＾Ｂｇ??ｐｉ邊＿??，分？－〇「］?Ｍ?＊?—？…一??７－＾ｌｉｍｍ?Ｓ？：：：：Ｓ??Ｖｅｌｏｃｉｔｙ?Ｖａｌｌｅｙ?Ｍａｇｎｅｔｉｃ?Ｒａｎｋｉｎｇ??圖３：基于抗體的代表性ＣＴＣ富集技術(shù)原理ａ?：?ＣＴＣ芯片。ｂ：?３ＤＰＤＭＳ??支架芯片。Ｃ：微流體分型技術(shù)（ＰｏｕｄｉｎｅｈＭ，?ＮａｔＮａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１７）??人字形（ＨＢ）芯片的工作原理與ＣＴＣ芯片相同，只不過它是由ＰＤＭＳ制成。??ＨＢ芯片的設計旨在通過人字形增強ＣＴＣ捕獲效率，該人字形通過誘導微渦旋破??壞層流，從而增加了?ＣＴＣ與設備中功能化表面的相互作用。ＨＢ芯片在相同流速??下提高了?ＣＴＣｓ的捕獲效率。ＮａｎｏＶｅｌｃｒｏ?ＣＴＣ芯片采用納米柱涂層，可最大程??度地提高ＣＴＣｓ和抗ＥｐＣＡＭ抗體之間的接觸頻率，從而提高ＣＴＣ的捕獲率。??２．?１．３第三類：雜交分離富集技術(shù)??第一類和第二類技術(shù)都有其優(yōu)勢和局限性，因此將它們組合在同一設備中可??以減少每種技術(shù)各自面臨的弊端，并為ＣＴＣｓ富集提供更高的靈敏度和特異性??［２４］。在ＣＴＣ－ｉＣｈｉｐ分離富集系統(tǒng)中。將基于細胞大小過濾，磁珠抗體分選組合??在一個設備中［２５］。在陰性選擇模式下，將全血樣品與ＣＤ１５和ＣＤ４５免疫磁珠預??混合用以標記白細胞。然后在預先標記有抗ＥｐＣＡＭ偶聯(lián)的免疫磁珠進行陽性選??擇。在分離富集時體積較小的紅細胞和血小板在過濾階段首先被清除，而有核細??胞（白細胞和ＣＴＣｓ）則進入下一階段。白細胞和ＣＴＣｓ通過蛇形通道時，聚焦??為單細胞排列。最后，


本文編號：2900741