發(fā)布時間：2020-12-06 00:25

　　背景:創(chuàng)面愈合是一復雜且有序的生理學過程,包含多種類型細胞的遷移和增殖,其中表皮細胞遷移是關系到創(chuàng)面是否能夠完全愈合的關鍵。創(chuàng)面生物電場在創(chuàng)面形成即刻產生,創(chuàng)緣為正極,創(chuàng)面中心為負極,其強度緩慢升高后逐漸降低,一直持續(xù)到再上皮化完成后消失。電場對創(chuàng)面的愈合起著關鍵的作用,體內研究表明電場能夠促進表皮細胞方向性遷移,但其機制尚不明確。CD9是一種膜蛋白,與其他跨膜分子或蛋白結合后影響細胞的移行、分化、信號轉導等。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)CD9在正常皮膚高表達,在創(chuàng)面愈合早、中期表達顯著降低促進表皮細胞遷移,創(chuàng)面愈合后期恢復至正常水平。結合創(chuàng)面生物電場與CD9在創(chuàng)面愈合中的強弱對應關系,我們猜測電場可能是通過調節(jié)表皮細胞內CD9的表達來調控細胞遷移。AMPK是一種AMP依賴性蛋白激酶,是調節(jié)生物能量代謝的關鍵分子,也與細胞遷移密切相關。有研究發(fā)現(xiàn)抑制AMPK的活性可以提高表皮細胞的運動能力,并且AMPK是四跨膜蛋白家族的上游信號分子。我們猜想AMPK可能參與了電場對CD9的調控。本研究提出生物電場通過AMPK調節(jié)CD9表達促進表皮細胞遷移這一科學假設,通過外源性電場模擬創(chuàng)面電場,檢測電場條件下C... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

U型管Figure1-1U-tubesize.

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文15以保證一組實驗的實驗環(huán)境一致。玻璃板使用504膠固定粘貼，注意粘貼過程膠水用量不宜過多，否則易堵住小室使小爬片無法順利進入縫隙。粘貼后盡量倒置，待膠水風干后測試其密封性。此模型可反復使用，使用前用75%酒精浸泡并與紫外燈下照射30min。圖1-2電場小室改造Figure1-2electricfieldchamber1.1.4.9.大玻璃片（大爬片）將24mm×50mm的蓋玻片嚴格泡酸處理，按1.1.4.7中的方法處理爬片后在鼓風干燥箱子存放。1.1.4.10.電場室（適用于大爬片）用玻璃刀將1mm厚的玻璃板裁成20.6cm×14.9cm的長方形，同1.1.4.8中制作的電場小室一樣，橫向分為四行，縱向分為五行。圖紙如下圖1-3所示。完成后可形成四個大小一致、左右對稱的電場室，可以保證一組實驗的實驗環(huán)境一致。玻璃板使用504膠固定粘貼，注意粘貼過程膠水用量不宜過多，否則易堵住小室使小爬片無法順利進入縫隙。粘貼后盡量倒置，待膠水風干后測試其密封性。此模型可反復使用，使用前用75%酒精浸泡并與紫外燈下照射30min。

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文16圖1-3電場室Figure1-3Electricdeviceforbigslide1.1.4.11.銀絲電極將銀絲剪斷后用鑷子將其彎曲，使之能很好地固定在電線及裝置上。1.2實驗方法及操作步驟1.2.1HaCaT細胞培養(yǎng)（1）從-80℃液氮罐中取出一支凍存的HaCaT細胞，迅速置于37℃溫水中，并快速攪拌使其盡快融化。（2）待其徹底融化后，在超凈臺下用玻璃滴管吸凈凍存管中的細胞懸液至無菌培養(yǎng)皿中，再往其中加入含有10%FBS、1%雙抗的1640培養(yǎng)液，充分混勻后，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（3）次日，在超凈臺下倒出培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液，用復溫后的無菌PBS沖洗培養(yǎng)皿2-3次，加入復溫好的含有10%FBS的1640培養(yǎng)液，置于37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。（4）細胞融合至80%-90%后，在超凈臺下倒盡培養(yǎng)皿中的液體，加入0.25%胰酶2mL，放入培養(yǎng)箱中消化4min。（5）拿出后用力拍打培養(yǎng)皿，顯微鏡下觀察到細胞變圓漂浮后，加入2mL


本文編號：2900362