發(fā)布時(shí)間：2020-12-06 00:25

　　背景:創(chuàng)面愈合是一復(fù)雜且有序的生理學(xué)過(guò)程,包含多種類型細(xì)胞的遷移和增殖,其中表皮細(xì)胞遷移是關(guān)系到創(chuàng)面是否能夠完全愈合的關(guān)鍵。創(chuàng)面生物電場(chǎng)在創(chuàng)面形成即刻產(chǎn)生,創(chuàng)緣為正極,創(chuàng)面中心為負(fù)極,其強(qiáng)度緩慢升高后逐漸降低,一直持續(xù)到再上皮化完成后消失。電場(chǎng)對(duì)創(chuàng)面的愈合起著關(guān)鍵的作用,體內(nèi)研究表明電場(chǎng)能夠促進(jìn)表皮細(xì)胞方向性遷移,但其機(jī)制尚不明確。CD9是一種膜蛋白,與其他跨膜分子或蛋白結(jié)合后影響細(xì)胞的移行、分化、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)CD9在正常皮膚高表達(dá),在創(chuàng)面愈合早、中期表達(dá)顯著降低促進(jìn)表皮細(xì)胞遷移,創(chuàng)面愈合后期恢復(fù)至正常水平。結(jié)合創(chuàng)面生物電場(chǎng)與CD9在創(chuàng)面愈合中的強(qiáng)弱對(duì)應(yīng)關(guān)系,我們猜測(cè)電場(chǎng)可能是通過(guò)調(diào)節(jié)表皮細(xì)胞內(nèi)CD9的表達(dá)來(lái)調(diào)控細(xì)胞遷移。AMPK是一種AMP依賴性蛋白激酶,是調(diào)節(jié)生物能量代謝的關(guān)鍵分子,也與細(xì)胞遷移密切相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)抑制AMPK的活性可以提高表皮細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力,并且AMPK是四跨膜蛋白家族的上游信號(hào)分子。我們猜想AMPK可能參與了電場(chǎng)對(duì)CD9的調(diào)控。本研究提出生物電場(chǎng)通過(guò)AMPK調(diào)節(jié)CD9表達(dá)促進(jìn)表皮細(xì)胞遷移這一科學(xué)假設(shè),通過(guò)外源性電場(chǎng)模擬創(chuàng)面電場(chǎng),檢測(cè)電場(chǎng)條件下C... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

U型管Figure1-1U-tubesize.

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文15以保證一組實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境一致。玻璃板使用504膠固定粘貼，注意粘貼過(guò)程膠水用量不宜過(guò)多，否則易堵住小室使小爬片無(wú)法順利進(jìn)入縫隙。粘貼后盡量倒置，待膠水風(fēng)干后測(cè)試其密封性。此模型可反復(fù)使用，使用前用75%酒精浸泡并與紫外燈下照射30min。圖1-2電場(chǎng)小室改造Figure1-2electricfieldchamber1.1.4.9.大玻璃片（大爬片）將24mm×50mm的蓋玻片嚴(yán)格泡酸處理，按1.1.4.7中的方法處理爬片后在鼓風(fēng)干燥箱子存放。1.1.4.10.電場(chǎng)室（適用于大爬片）用玻璃刀將1mm厚的玻璃板裁成20.6cm×14.9cm的長(zhǎng)方形，同1.1.4.8中制作的電場(chǎng)小室一樣，橫向分為四行，縱向分為五行。圖紙如下圖1-3所示。完成后可形成四個(gè)大小一致、左右對(duì)稱的電場(chǎng)室，可以保證一組實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境一致。玻璃板使用504膠固定粘貼，注意粘貼過(guò)程膠水用量不宜過(guò)多，否則易堵住小室使小爬片無(wú)法順利進(jìn)入縫隙。粘貼后盡量倒置，待膠水風(fēng)干后測(cè)試其密封性。此模型可反復(fù)使用，使用前用75%酒精浸泡并與紫外燈下照射30min。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文16圖1-3電場(chǎng)室Figure1-3Electricdeviceforbigslide1.1.4.11.銀絲電極將銀絲剪斷后用鑷子將其彎曲，使之能很好地固定在電線及裝置上。1.2實(shí)驗(yàn)方法及操作步驟1.2.1HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)（1）從-80℃液氮罐中取出一支凍存的HaCaT細(xì)胞，迅速置于37℃溫水中，并快速攪拌使其盡快融化。（2）待其徹底融化后，在超凈臺(tái)下用玻璃滴管吸凈凍存管中的細(xì)胞懸液至無(wú)菌培養(yǎng)皿中，再往其中加入含有10%FBS、1%雙抗的1640培養(yǎng)液，充分混勻后，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（3）次日，在超凈臺(tái)下倒出培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液，用復(fù)溫后的無(wú)菌PBS沖洗培養(yǎng)皿2-3次，加入復(fù)溫好的含有10%FBS的1640培養(yǎng)液，置于37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。（4）細(xì)胞融合至80%-90%后，在超凈臺(tái)下倒盡培養(yǎng)皿中的液體，加入0.25%胰酶2mL，放入培養(yǎng)箱中消化4min。（5）拿出后用力拍打培養(yǎng)皿，顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓漂浮后，加入2mL


本文編號(hào)：2900362