目的:觀察microRNA-7過表達對小鼠胸腺CD8⁺SP細胞發(fā)育的影響并初步探討其分子機制。方法:1.利用分子生物學技術構建miR-7（microRNA-7,miR-7）真核表達載體;利用顯微胚胎注射技術成功構建miR-7過表達（miR-7 overexpression,miR-7 OE）小鼠。常規(guī)剪取7只F0代miR-7 OE小鼠尾巴（0.5-1cm）,按照小鼠基因型鑒定試劑盒抽提DNA,同時,剪取一只野生型（wild-type,WT）小鼠尾巴作為陰性對照。利用特異性引物,采用PCR技術擴增目的基因片段。2.提取WT和miR-7 OE小鼠的心臟、肝臟以及脾臟等11個不同組織器官的總RNA,用miR-7特異性引物逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,利用Real-time PCR莖環(huán)法檢測各組織器官中miR-7成熟體的表達水平。3.觀測并記錄WT和miR-7 OE小鼠從2周齡到9周齡的體重變化;HE染色觀察8周齡WT和miR-7 OE小鼠心臟、肺臟以及肝臟等重要臟器的組織學結(jié)構改變。4.分別檢測4周齡和8周齡WT和miR-7 OE小鼠胸腺大小、重量以及細胞總數(shù)的變化;HE染色觀察各... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學貴州省

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖0-1.胸腺T細胞的發(fā)育過程

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文胡琳12圖0-2.不同的miRNA分子在CD8+T細胞發(fā)育過程中的作用Fig0-2.miRNA-mediatedregulationofCD8+Tcelldevelopment.(YanLiang,etal.JLeukocBiol.2015)總之，這些研究顯示胸腺細胞及其亞群中特定miRNAs的表達對于其發(fā)育具有重要的調(diào)控作用。鑒于miRNAs家族的龐大性以及T細胞發(fā)育的復雜性，因此，深入研究新的特定miRNA分子在胸腺細胞特別是CD8+T細胞發(fā)育中的調(diào)控作用，無疑為后續(xù)進一步深入探討miRNA分子在免疫細胞亞群發(fā)育和功能中的生物學作用，以及后續(xù)相關臨床疾病的免疫生物治療新策略開發(fā)均具有積極意義。3.微小RNA-7及其生物學功能微小RNA-7（microRNA-7，miR-7）是2001年由Loags-Quintana首先發(fā)現(xiàn)的miRNA家族成員，其成熟體由23個核苷酸組成[25]。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)分別在人和鼠類的9，15，19號染色體上存在的不同DNA序列可以轉(zhuǎn)錄加工成為相同的成熟miR-7序列[26]。miR-7高表達于腦、小腸、胸腺、脾臟、肺臟等多種組織器官[27]（圖0-3），參與了機體組織器官的發(fā)育[28,29]和多種細胞的生物學功能[30,31]。如：Doxakis等研究發(fā)現(xiàn)[32]，miR-7在帕金森患者的大腦中表達水平顯著增高，且與神經(jīng)元的發(fā)展密切相關；Pollock等研究發(fā)現(xiàn)[33]，miR-7可通過調(diào)控P53信號途徑，進而抑制大腦皮層的發(fā)育過程；Oldenburger等研究亦發(fā)現(xiàn)[34]，miR-7對氣管道平滑肌細胞的生長發(fā)育發(fā)揮重要的調(diào)控作用。現(xiàn)今miR-7的相關研究主要集中在其參與調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展（圖0-4）。我們在前期研究中也發(fā)現(xiàn)，miR-7在臨床肺癌組織中低表達，且miR-7模擬物（mimics）可顯著抑制人肺癌細胞的體外生長和侵襲[35-37]；此外，我們利用miR-7過表達載體進行研究發(fā)現(xiàn)，

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文胡琳13無論是在體內(nèi)還是體外，miR-7均可抑制人肺癌細胞的生長和侵襲[38-40]。這些相關研究顯示miR-7可能在肺癌發(fā)生發(fā)展中起重要調(diào)控作用，是肺癌基因治療潛在新靶標[41]。圖0-3.不同組織器官中miR-7的表達水平[30]Fig0-3.TheexpressionlevelofmiR-7indifferentorgansandtissues.圖0-4.miR-7參與調(diào)控不同組織器官的生理和病理過程的概述Fig0-4.AnoverviewofmiR-7involvementinhealthanddiseaseofvariousorgans.(Horshametal.IntJBiochemCellBiol.2015)然而，目前關于miR-7與機體免疫細胞發(fā)育和功能的相關研究才剛開展。例如，Stumpfova等[42]研究顯示miR-7高表達于活化的DC細胞上，提示miR-7對DC細胞的免疫學功能有重要的調(diào)節(jié)作用。我們新近研究發(fā)現(xiàn)miR-7敲減后可顯著改善LPS誘導的ALI模型小鼠的肺損傷[43]；并且，miR-7參與了ConA誘導的小鼠肝臟炎癥變

【參考文獻】：
期刊論文
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