目的:1、觀察模擬高原低壓低氧環(huán)境對Wistar雄性大鼠睪丸器官指數(shù)、精子質(zhì)量檢測、睪丸組織形態(tài)、氧化損傷和血清性激素水平的影響;2、觀察不同濃度左卡尼汀對模擬高原低壓低氧環(huán)境Wistar雄性大鼠生殖能力的保護效果;方法:1、將36只12周的雄性Wistar大鼠隨機分為四組,A組空白組,B組模型組,C組左卡尼汀低劑量組,D組左卡尼汀高劑量組。A組在低壓氧艙外飼養(yǎng)(當?shù)睾０?436m),B組、C組、D組均于模擬海拔6500m氧艙內(nèi)飼養(yǎng);A組空白組和B組模型組,均腹腔注射與C組左卡尼汀低劑量組相同容積的生理鹽水,C組艙內(nèi)左卡尼汀低劑量組采用腹腔注射50mg/kg·d,D組艙內(nèi)左卡尼汀高劑量組則注射100mg/kg·d。干預28天后,將各組大鼠腹腔注射麻醉后稱重,腹主動脈采血,離心取血清。2、取大鼠雙側睪丸組織稱重計算睪丸組織器官指數(shù);雙側附睪尾制成精子懸液,在顯微鏡下觀察檢測精子活動率、精子畸形率、精子計數(shù)和精子前向運動。3、取各組大鼠的睪丸組織,左側睪丸組織進行蘇木素-伊紅染色(Hematoxylin-Eosin Sainingt,HE)后觀察光鏡下Wistar大鼠睪丸組織的形態(tài)改變,取材右側睪丸組織在透射電鏡(Transmission Eectronl Microscope,TEM)下觀察Wistar大鼠睪丸組織中精原細胞、支持細胞等立體超微結構。取剩余右側睪丸組織制備均漿液,使用試劑盒檢測脂質(zhì)過氧化代謝產(chǎn)物丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dsmutase,SODi)和谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-PX)。4、使用Elisa分析試劑盒檢測血清中睪酮(Testosterone,T)、黃體生成素(Luteinizing Hormones,LH)、促卵泡激素(Follicle Stimulating Hormone,FSH)等性激素水平。結果:1、在模擬高原低壓低氧環(huán)境下,雄性Wistar大鼠睪丸器官指數(shù)與A組空白組相比較,B組模型組、C組左卡尼汀低劑量組和D組左卡尼汀高劑量組器官指數(shù)均下降(P0.01);與B組模型組相比較,C組左卡尼汀低劑量組和D組左卡尼汀高劑量組器官指數(shù)均升高(P0.01);與C組左卡尼汀低劑量組相比較,D組左卡尼汀高劑量組器官指數(shù)升高(P0.05)。2、模擬高原環(huán)境下,雄性Wistar大鼠精液參數(shù)比較:與A組空白組相比較,B組模型組、C組左卡尼汀低劑量組和D組左卡尼汀高劑量組精子活動率、前向運動下降,精子畸形率升高(P0.01),而B組模型組精子計數(shù)下降(P0.01);與B組模型組相比較,C組左卡尼汀低劑量組、D組左卡尼汀高劑量組精子活率、精子計數(shù)均明顯升高,精子畸形率明顯降低(P0.01),C組左卡尼汀低劑量組精子前向運動升高(P0.05),D組左卡尼汀高劑量組前向運動明顯升高(P0.01);與C組左卡尼汀低劑量組相比較,D組左卡尼汀高劑量組精子畸形率增加(P0.05)。3、HE染色觀察A組空白組,大鼠睪丸組織生精小管基膜完整,可見精子發(fā)生全過程,管腔內(nèi)精子數(shù)量較多,精子無明顯受損,細胞排列整齊,細胞極性規(guī)則,Johnsen評分(9.40±0.38)。與A組空白組相比較,B組模型組大鼠的睪丸組織生精小管基膜萎縮、變薄,褶皺、分層明顯,可見明顯空泡,精子數(shù)量極少,可見少數(shù)早期生精細胞,細胞排列極紊亂,層數(shù)減少,細胞極性消失,B組模型組Johnsen評分(5.83±0.64);而C組左卡尼汀低劑量組和D組左卡尼汀高劑量組的大鼠睪丸組織生精小管基膜有輕微的褶皺、萎縮、分層,精子數(shù)量增加,精子發(fā)生受損不明顯,成熟生精細胞缺乏,細胞排列有少許的紊亂、稀疏,層數(shù)3-5層,細胞極性可見,但病理改變?nèi)员華組空白組明顯,C組左卡尼汀低劑量組Johnsen評分(8.39±0.49),D組左卡尼汀高劑量組Johnsen評分(8.29±0.64)。TEM觀察各組大鼠睪丸組織中的精原細胞和支持細胞等,A組空白組可見正常的精原細胞、支持細胞等結構清晰,基膜完整,細胞見少量脂滴,線粒體無腫脹,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無擴張。B組模型組支持細胞胞漿內(nèi)形成大量空泡,細胞器水腫空化明顯,線粒體斷裂腫脹,脂質(zhì)異常增多;間質(zhì)細胞核膜破裂,線粒體水腫,胞漿局部缺如、空化,細胞核異染色質(zhì)增多,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張;精原細胞膜周圍可見少量空泡,細胞膜破損明顯;初級精母細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕微腫脹,細胞膜模糊,細胞核異染色質(zhì)增多;次級精母細胞周圍大空泡形成。C組左卡尼汀低劑量組支持細胞與生精上皮輕微脫離,細胞膜及核膜結構尚清晰,線粒體輕微腫脹;間質(zhì)細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴張,精原細胞核膜結構清晰,線粒體較正常。D組左卡尼汀高劑量組,支持細胞結構尚清晰,胞漿內(nèi)可見少量空泡,線粒體輕微腫脹;間質(zhì)細胞、精原細胞、初級精母細胞結構清晰,基膜完整,線粒體無腫脹,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無腫脹。4、MDA:與A組空白組相比較,B組模型組、C組左卡尼汀低劑量組和D組左卡尼汀高劑量組均升高(P0.01);與B組模型組相比較,C組左卡尼汀低劑量組、D組左卡尼汀高劑量組降低(P0.01)。SOD:與A組空白組相比較,B組模型組(P0.01)、C組左卡尼汀低劑量組(P0.01)和D組左卡尼汀高劑量組(P0.05)均降低;與B組模型組相比較,C組左卡尼汀低劑量組、D組左卡尼汀高劑量組升高(P0.01)。GSH-PX:與A組空白組相比較,B組模型組、C組左卡尼汀低劑量組和D組左卡尼汀高劑量組均降低(P0.01);與B組模型組相比較,C組左卡尼汀低劑量組、D組左卡尼汀高劑量組升高(P0.01)。5、睪酮T:與A組空白組相比較,B組模型組、C組左卡尼汀低劑量組和D組左卡尼汀高劑量組均降低(P0.01);黃體生成素LH:各組間并無差異;促卵泡激素FSH:B組模型組(P0.05)、C組左卡尼汀低劑量組(P0.05)和D組左卡尼汀高劑量組(P0.01)均降低。結論:1、模擬高原低壓低氧環(huán)境可降低Wistar雄性大鼠睪丸器官指數(shù);降低精子活率、前向運動、精子計數(shù),提高畸形率;造成睪丸組織形態(tài)損傷、氧化損傷和血清性激素水平改變;2、左卡尼汀對模擬高原低壓低氧環(huán)境Wistar雄性大鼠生殖能力具有一定保護作用以100mg/kg,1/日時效果較佳。
【學位單位】：甘肅中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2020
【中圖分類】：R965
【部分圖文】：

左卡尼汀對模擬高原環(huán)境雄性大鼠生殖功能損傷的防護研究-21-圖1各組大鼠睪丸器官指數(shù)2.4.2各組大鼠精子質(zhì)量檢測結果各組大鼠精子質(zhì)量檢測結果見表2、圖2。與A組空白組相比較，B組模型組、C組左卡尼汀低劑量組和D組左卡尼汀高劑量組精子活動率、前向運動下降，精子畸形率升高，差異有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01），而B組模型組精子計數(shù)下降，差異有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；與B組模型組相比較，C組左卡尼汀低劑量組、D組左卡尼汀高劑量組精子活動率、精子計數(shù)均明顯升高，精子畸形率明顯降低，差異有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；C組左卡尼汀低劑量組精子前向運動升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），D組左卡尼汀高劑量組前向運動明顯升高（P＜0.01），差異有顯著統(tǒng)計學意義；與C組左卡尼汀低劑量組相比較，D組左卡尼汀高劑量組精子畸形率增加，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。表2各組大鼠精子質(zhì)量檢測結果（，n等于9）組別n精子活動率(%)精子畸形率(%)精子計數(shù)(×106/ml)精子前向運動(%)A組空白組B組模型組9930.13±3.3715.44±2.81a1.51±0.033.78±0.14a31.54±2.2320.29±2.75a13.87±2.375.91±2.02a

左卡尼汀對模擬高原環(huán)境雄性大鼠生殖功能損傷的防護研究-22-注：與A組空白組比較，a：P＜0.01，b：P＜0.05；與B組模型組比較，c：P＜0.01，d：P＜0.05；與C左卡尼汀低劑量組相比較，e：P＜0.01，f：P＜0.05圖2各組大鼠精子質(zhì)量檢測結果2.4.3睪丸組織形態(tài)各組睪丸組織形態(tài)，見下圖3-5，光鏡下觀察A組空白組，大鼠睪丸組織生精小管基膜完整，可見精子發(fā)生全過程，管腔內(nèi)精子數(shù)量較多，精子受損不明顯，細胞排列整齊，約5-7層，細胞極性規(guī)則，Johnsen評分（9.40±0.38）。與A組空白組相比較，B組模型組，大鼠的睪丸組織生精小管基膜萎縮、變雹褶皺、分層明顯，可見明顯空泡，精子數(shù)量極少，可見少數(shù)早期生精細胞，細胞排列極紊亂，層數(shù)減少，細胞極性消失，A組空白組與B組模型組Johnsen評分【（9.40±0.38）vs（5.83±0.64)】，差異有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；而C組左卡尼汀低劑量組和D組左卡尼汀高劑量組的大鼠睪丸組織生精小管基膜有輕微的褶皺、萎縮、分層，精子數(shù)量增加，精子發(fā)生受損不明顯，成熟生精細胞缺乏，細胞排列有少許的紊亂、稀疏，層數(shù)3-5層，細胞極性可見，但病理改變?nèi)员華組空白組明顯，A組空白組與C組左卡尼汀低劑量組Johnsen評分【（9.40±0.38）vs（8.39±0.49)】，A組空白組與D組左卡尼汀高劑量組Johnsen評分【（9.40±0.38）vs（8.29±0.64)】，P＜0.01，差異有明顯的統(tǒng)計學意義。B組模型組與C組左卡尼汀低劑量組Johnsen評分【（5.83±0.64）vs（8.39±0.49)】，B組模型組與D組左卡尼汀高劑量組Johnsen評分【（5.83±0.64）vs（8.29±0.64)】，P＜C組左卡尼汀低劑量組D組左卡尼汀高劑量組9920.25±2.67ac21.47±4.09ac2.23±0.13ac2.34±0.15acf30.35±2.00c29.80±2.16c8.37±2.54ad9

左卡尼汀對模擬高原環(huán)境雄性大鼠生殖功能損傷的防護研究0.01，差 異 有 明 顯 的 統(tǒng) 計 學 意 義 。C組 左 卡 尼 汀 低 劑 量 組 與 D組 左 卡 尼 汀高 劑 量 組 比 較 ， P＞ 0.05， 差 異 無 統(tǒng) 計 學 意 義 。
【參考文獻】

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