【目的】近年來,非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholic Steatohepatitis,NASH)患病率增長迅速,其中有20%的NASH患者會發(fā)展為肝硬化。研究表明NLRP3炎癥小體(NLRP3 Inflammasome)激活后通過釋放炎癥因子參與炎癥并可誘發(fā)NASH。去脂軟肝方為云南省榮譽名中醫(yī)肝病專家蘇漣教授經(jīng)驗有效方,前期臨床及實驗研究表明該方具有降脂及防治NASH的作用,然而去脂軟肝方防治NASH的作用機制是否與抑制NLRP3炎癥小體及相關(guān)因子有關(guān)尚不清楚。本研究旨在從NLRP3炎癥小體的角度觀察去脂軟肝方防治NASH的作用及可能機制,為該方的臨床應用提供理論依據(jù),豐富中醫(yī)藥治療NASH的科學內(nèi)涵�！痉椒ā�1.根據(jù)隨機數(shù)字表法,將SPF級SD雄性大鼠隨機分為六組,分別為正常組,模型組、去脂軟肝方低劑量組、去脂軟肝方中劑量組、去脂軟肝方高劑量組、辛伐他汀組。復制非酒精性脂肪性肝炎的大鼠模型,在第一天造模的同時給予藥物干預,去脂軟肝方低、中、高劑量組給藥量分別為7.11g/kg/d,14.22g/kg/d,28.44g/kg/d,辛伐他汀組給藥量為1.8mg/kg/d,正常組與模型組予2ml生理鹽水灌胃,分別在第8周末和第14周末取材,以備指標檢測。2.觀察去脂軟肝方對NASH的防治作用。在第8周末及第14周末兩個時間點,采用HE染色和油紅O染色觀察各組大鼠肝臟病理形態(tài)學的變化情況;采用比色法檢測大鼠血清肝功能指標(ALT、AST)的變化情況;采用酶法檢測血清中血脂(TC、TG、LDL-C、HDL-C)的變化情況;采用GPO-PAP法檢測大鼠肝脂(TC、TG)的變化情況。3.觀察去脂軟肝方對NLRP3炎癥小體及相關(guān)因子表達的影響。在14周末采用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)法檢測各組大鼠肝臟中NLRP3mRNA、ASCmRNA、Caspase-1 mRNA的表達;采用免疫組化二步法檢測各組大鼠肝臟NLRP3、Caspase-1蛋白的表達;采用酶聯(lián)免疫吸附法(Elisa)檢測肝臟炎性因子IL-1β和IL-18的含量�！窘Y(jié)果】1.去脂軟肝方可減輕NAFL進展為NASH模型大鼠病理形態(tài)學改變。HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn),與正常組相比,第8周末時,模型組大鼠肝細胞排列紊亂,肝索分辨不清,出現(xiàn)大量脂肪空泡或伴有輕度的胞漿疏松化改變,表明NAFL模型復制成功;到14周末時,模型組大鼠肝臟脂質(zhì)沉積面積增大,脂質(zhì)空泡增多、明顯胞漿疏松化、氣球樣變及少量炎性細胞浸潤,表明NASH模型成功復制,而去脂軟肝方各劑量組與辛伐他汀組脂肪空泡均有所減少,胞漿疏松化、氣球樣變及炎性細胞浸潤均減輕,其中去脂軟肝方高劑量組和辛伐他汀組較為顯著。油紅O結(jié)果顯示第8周末和第14周末模型組大鼠肝臟均出現(xiàn)大量圓形橙紅色脂滴空泡,去脂軟肝方各劑量組與辛伐他汀組橙紅色脂滴均減少。2.去脂軟肝方可降低NAFL進展為NASH模型大鼠肝指數(shù)、血脂、肝脂及改善肝功能。第8周末和第14周末,與正常組對比,模型組大鼠肝指數(shù)、血脂指標(TC、TG、LDL-C)、肝脂(TC、TG)、肝功能指標(ALT、AST)持續(xù)升高,差異顯著(P0.05)。與模型組相比,去脂軟肝方中、高劑量組及辛伐他汀組均降低,差異顯著(P0.05),去脂軟肝方低劑量組血脂及肝脂TG呈下降趨勢,差異不顯著(P0.05),去脂軟肝方各劑量組與辛伐他汀組HDL-C均升高,差異顯著(P0.05)。3.去脂軟肝方可降低NASH大鼠肝臟NLRP3mRNA、ASC mRNA、Caspase-1 mRNA的表達水平。在第14周末,與正常組相比,模型組大鼠肝臟NLRP3mRNA、ASC mRNA、Caspase-1 mRNA相對表達量均升高,差異顯著(P0.05)。與模型組相比,去脂軟肝方各劑量組與辛伐他汀組NLRP3mRNA相對表達量均降低,差異顯著(P0.01),去脂軟肝方中、高劑量組ASCmRNA、Caspase-1 mRNA相對表達量均降低,差異顯著(P0.01),去脂軟肝方低劑量、辛伐他汀組ASCmRNA、Caspase-1 mRNA相對表達量呈下降趨勢,差異不顯著(P0.05)。4.去脂軟肝方可降低NASH大鼠肝臟NLRP3、Caspase-1蛋白的表達水平。在第14周末,與正常組相比,模型組大鼠肝細胞胞漿可見NLRP3蛋白、Caspase-1蛋白的陽性表達增多,其IOD/AREA值也明顯增高,差異顯著(P0.05)。與模型組相比,去脂軟肝方各劑量組與辛伐他汀組肝細胞內(nèi)NLRP3蛋白的陽性表達明顯減少,其IOD/AREA值也明顯降低,差異顯著(P0.01);去脂軟肝方中、高劑量組肝細胞內(nèi)Caspase-1蛋白的陽性表達明顯減少,其IOD/AREA值也明顯降低,差異顯著(P0.05),去脂軟肝方低劑量組與辛伐他汀組Caspase-1蛋白的陽性表達具有下降趨勢,差異不顯著(P0.05)。5.去脂軟肝方可降低NASH大鼠肝臟IL-1β和IL-18的表達。在第14周末,與正常組相比,模型組大鼠肝臟IL-1β、IL-18的相對表達量均升高,差異顯著(P0.01)。與模型組相比,去脂軟肝方中、高劑量組與辛伐他汀組IL-1β相對表達量均降低,差異顯著(P0.01),去脂軟肝方低劑量IL-1β相對表達量呈下降趨勢,差異不顯著(P0.05);去脂軟肝方中、高劑量組IL-18相對表達量均降低,差異顯著(P0.01),去脂軟肝方低劑量、辛伐他汀組IL-18相對表達量呈下降趨勢,差異不顯著(P0.05)�！窘Y(jié)論】1.從NAFL進展為NASH的病程中,NLRP3炎癥小體及相關(guān)因子表達升高。2.去脂軟肝方可降低NASH模型大鼠NLRP3炎癥小體及相關(guān)因子的表達,減輕脂肪變性和炎性病變。
【學位單位】：云南中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2020
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

第8周末各組大鼠HE染色結(jié)果（10×40）

第14周末各組大鼠HE染色結(jié)果（10×40）

第8周末各組大鼠油紅O染色結(jié)果（10×40）
【參考文獻】

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本文編號：2861918