目的:目前發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmic reticulum,ER)感應(yīng)蛋白有3種,分別是抑制物阻抗性激酶1(Type 1 ER tansmembrane protein kinase,IRE1)、雙鏈RNA依賴的蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(PER-like ER kinase,PERK)和活化轉(zhuǎn)錄因子6(Activating transcription factor 6,ATF6)。ER感應(yīng)蛋白是參與未折疊蛋白反應(yīng)(unfolded protein response,UPR)的標志性分子,可用來提示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的發(fā)生。而海馬是大腦邊緣組織的一部分,與學習和記憶密切相關(guān)。本研究旨在觀察ER感應(yīng)蛋白在2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠海馬組織中的表達,探討ERS與T2DM的關(guān)系;并通過Morris水迷宮(Morris water maze,MWM)實驗評估大鼠認知功能,觀察二甲雙胍對認知功能的作用與ERS的作用關(guān)系。方法:選用自發(fā)性2型糖尿病模型(Goto-Kakizaki,GK)大鼠,將隨機血糖≥11.1mmol/l的GK雄性大鼠隨機分為糖尿病組(DM組,n=10)、二甲雙胍干預組(MF組,n=10)。選取Wistar雄性大鼠作為正常對照組(NC組,n=10)。二甲雙胍劑量為85mg/kg/d,NC組和DM組均給予同等劑量的生理鹽水。持續(xù)灌胃給藥8周后,進行口服糖耐量實驗(oral glucose tolerance test,OGTT),計算OGTT各個時間點血糖曲線下的面積(area under curve,AUC),檢測空腹C肽(C-Peptide,C-P),計算大鼠的終末期胰島素抵抗指數(shù)(homeostasis model assessment-insulin resistance,HOMA-IR)。通過MWM實驗的定位航行實驗和空間探索實驗評估大鼠的學習記憶能力后,分別采用免疫組化法和免疫印跡法分析ATF6、IRE1和PERK蛋白在大鼠海馬組織的表達。所有數(shù)據(jù)均用(sx?)表示,采用SPSS 21.0軟件進行單因素方差分析,組間比較采用LSD或Dunnett’s T3的方法,檢驗水準α=0.05。結(jié)果:1二甲雙胍干預8周后大鼠體重、空腹血糖的變化:與NC組比較,dm組和mf組的體重均較低,差異具有統(tǒng)計學意義(均p0.01),但dm組和mf組的體重差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。與nc組相比,dm組和mf組的空腹血糖顯著升高(p0.01);與dm組相比,mf組空腹血糖顯著降低(p0.01)(見表1和圖1)。2二甲雙胍干預8周后大鼠ogtt、auc的結(jié)果:與nc組相比,dm組在各個時間點的血糖值均顯著增高,auc顯著增大(均p0.01);與dm組相比,mf組在各個時間點的血糖值均顯著降低,auc顯著減小,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05,p0.01)(見表2和圖2)。3二甲雙胍干預8周后大鼠空腹c-p、homa-ir的結(jié)果:與nc組相比,dm組的c-p水平明顯降低(p0.05),homa-ir顯著升高(p0.01);與dm組相比,mf組的c-p水平明顯升高(p0.05),homa-ir顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(p0.01)(見表3和圖3)。4二甲雙胍對大鼠的空間學習和空間記憶能力的影響:與nc組相比,dm組的大鼠出現(xiàn)明顯的學習記憶障礙,定位航行實驗中逃避潛伏期顯著延長;空間搜索實驗中,在平臺所在象限停留時間顯著降低(均p0.01)。與dm組相比,mf組的大鼠的學習記憶能力得到改善,定位航行實驗中逃避潛伏期顯著縮短;空間搜索實驗中,在平臺所在象限停留時間顯著增長(均p0.01)(見表4和圖4)。5免疫組化結(jié)果:atf6、ire1和perk的免疫組化陽性產(chǎn)物主要定位于細胞質(zhì),呈棕黃色顆粒狀,染色深度不等(見圖5-7)。與nc組相比,dm組和mf組atf6蛋白的相對含量顯著增多;與dm組相比,mf組atf6蛋白的相對含量顯著降低(均p0.01)。與nc組相比,dm組和mf組ire1和perk蛋白的相對含量顯著升高(均p0.01);與dm組相比,mf組ire1和perk蛋白的相對含量差異均無統(tǒng)計學意義(均p0.05)(見圖8)。6免疫印跡結(jié)果:對目的蛋白進行積分光密度值(integralofopticaldensity,iod)分析,分別計算出其與內(nèi)參照β-actin的iod值的比值,作為目的蛋白的相對表達量,進行統(tǒng)計分析。與nc組相比,dm組和mf組atf6蛋白的表達顯著增多;與dm組相比,mf組atf6蛋白的表達顯著減少(均p0.01)。與nc組相比,dm組和mf組ire1和perk蛋白的表達顯著增多(均p0.01);與dm組相比,mf組ire1和perk蛋白的表達差異無統(tǒng)計學意義(均P0.05)(見圖9、10)。結(jié)論:1 T2DM大鼠海馬組織內(nèi)存在ERS。2 T2DM大鼠可出現(xiàn)胰島素抵抗和認知功能下降。3二甲雙胍可以改善胰島素抵抗,對T2DM引起的認知功能下降具有保護作用。4二甲雙胍可能通過降低ATF6蛋白的表達,抑制海馬組織中的過度ERS,從而減輕對認知功能的損害。
【學位單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：R587.1

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

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2 Liping Yang;Lemeng Wu;Dongmei Wang;Ying Li;Hongliang Dou;Mark O.M.Tso;Zhizhong Ma;;Role of endoplasmic reticulum stress in the loss of retinal ganglion cells in diabetic retinopathy[J];Neural Regeneration Research;2013年33期

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本文編號：2820101