【摘要】：心力衰竭是指由各種心血管疾病導致的心功能不全的一種綜合征,心肌梗死后心力衰竭是臨床心力衰竭中最常見的類型,其發(fā)病機制主要包括心室重構(gòu)、神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂、細胞炎癥因子激活及心肌能量代謝障礙等。心肌梗死后由于缺血及再灌注造成的微循環(huán)功能障礙,血管內(nèi)皮細胞合成的NO減少而ET-1增多,導致血管舒張功能障礙;血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)活性升高,激活腎素-血管緊張素系統(tǒng),加重心室重構(gòu),是促進心力衰竭發(fā)展的重要因素。近年來由于我國人口老齡化加重及心肌梗死患者生存率的提高,心力衰竭的患病率在逐年升高,盡管外科手術及介入技術可使急性心肌梗死患者早期得到再灌注治療,心力衰竭診斷和治療的指南不斷更新,但心肌梗死后心力衰竭的防治仍然是一大挑戰(zhàn)。芪藶強心膠囊是由黃芪、附子、人參、丹參、葶藶子、紅花等11味中草藥組成的通絡藥物,具有抑制心肌纖維化、抑制心肌細胞凋亡、改善心肌能量代謝、調(diào)節(jié)炎癥因子等心臟保護功能。我們前期研究發(fā)現(xiàn)芪藶強心可抑制缺氧誘導的心肌微血管內(nèi)皮細胞和心肌細胞凋亡,刺激HIF-1α和VEGF的表達,并可通過NRG-1/ErbB-PI3K/AKT信號通路促進缺氧條件下心肌微血管內(nèi)皮細胞的血管新生功能。此外,我們還研究了芪藶強心對microRNA(miRNA,miR)的調(diào)控作用及信號通路分析�；诖�,我們以缺氧心肌微血管內(nèi)皮細胞為研究重點,以miRNA為研究靶點,探索miRNA在芪藶強心保護缺氧刺激的心肌微血管內(nèi)皮細胞過程中發(fā)揮的作用,為研究芪藶強心治療心力衰竭的機制提供新的方向。第一部分芪藶強心通過上調(diào)microRNA-21的表達減少缺氧條件下大鼠心肌微血管內(nèi)皮細胞的凋亡目的探索microRNA在芪藶強心減少缺氧導致的心肌微血管內(nèi)皮細胞凋亡過程中發(fā)揮的作用。方法植塊法培養(yǎng)心肌微血管內(nèi)皮細胞,傳代細胞選擇第二代(P2)進行后續(xù)實驗。采用三氣培養(yǎng)箱(1%02,5%CO2,94%N2,37℃)模擬缺氧環(huán)境。qRT-PCR方法檢測microRNA的表達水平變化,篩選出在缺氧心肌微血管內(nèi)皮細胞中表達發(fā)生變化的microRNA,并用芪藶強心干預,以進行microRNA的功能檢測。細胞轉(zhuǎn)染antagomir以抑制microRNA在細胞中的表達。采用原位末端標記法(TUNEL)檢測細胞凋亡情況,采用Western Blot方法檢測caspase-3和cleaved caspase-3表達變化。結(jié)果與對照組相比,缺氧組miR-221、miR-222、miR-214、miR-155表達無變化;miR-23b表達先升高,缺氧12小時后降低,加入芪藶強心干預后,miR-23b表達無變化(P0.01);而miR-21表達隨缺氧時間延長而增加(P0.01),加入芪藶強心干預后,miR-21表達進一步增加(P0.01)。與芪藶強心干預組相比,miR-21表達抑制組細胞凋亡數(shù)量顯著增加(P0.01),凋亡蛋白cleaved caspase-3/caspase-3 比值增高(P0.01)。結(jié)論芪藶強心可通過上調(diào)miR-21的表達,減少缺氧導致的心肌微血管內(nèi)皮細胞凋亡。第二部分芪藶強心通過上調(diào)microRNA-21的表達促進缺氧條件下大鼠心肌微血管內(nèi)皮細胞血管新生目的探索芪藶強心在缺氧條件下是否可以通過調(diào)節(jié)miR-21的表達發(fā)揮促進心肌微血管內(nèi)皮細胞血管新生的功能及其相關機制研究。方法植塊法培養(yǎng)心肌微血管內(nèi)皮細胞,傳代細胞至第二代進行分組干預。芪藶強心干預濃度為0.5mg/ml。采用三氣培養(yǎng)箱(1%02,5%C02,94%N2,37°C)模擬缺氧環(huán)境。轉(zhuǎn)染miR-21模擬物和抑制劑以促進和抑制miR-21在細胞的表達水平。將細胞隨機分為7組進行干預:對照組,缺氧組,缺氧+antagomir組、缺氧+mimics組、缺氧+芪藶強心組,缺氧+antagomir+芪藶強心組,缺氧+mimics+芪藶強心組。采用細胞遷移實驗、細胞增殖實驗、成管實驗檢測心肌微血管內(nèi)皮細胞的血管新生功能,qRT-PCR方法檢測miR-21,HIF-1α和VEGF的mRNA表達水平。結(jié)果與缺氧+芪藶強心組相比,抑制miR-21的表達后,芪藶強心促進血管新生的功能減弱,表現(xiàn)在細胞遷移和增殖減慢,成管數(shù)和成環(huán)數(shù)減少,HIF-1α和VEGF的mRNA表達水平降低(P0.05或P0.01);而過表達miR-21,細胞遷移和增殖加快,成管數(shù)和成環(huán)數(shù)增加,HIF-1α和VEGF的表達水平增加(P0.05或P0.01),芪藶強心促進血管新生的作用進一步增強。結(jié)論在缺氧條件下,芪藶強心可通過促進miR-21的表達發(fā)揮保護心肌微血管內(nèi)皮細胞血管新生的功能。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 覃玉桃;劉艷麗;伍偉鋒;;小鼠microRNA-21慢病毒抑制載體的構(gòu)建及鑒定[J];當代醫(yī)學;2013年15期

2 黃圓圓;楊瓊;謝德榮;楊麗輝;;一種新的肝細胞癌生物標志物——血漿microRNA-21[J];循證醫(yī)學;2012年02期

3 張繼新;呂曉濤;高穎;崔力方;張程燕;昌紅;李保玉;;microRNA-21在彌漫大B細胞淋巴瘤中的表達及意義[J];臨床與實驗病理學雜志;2010年02期

4 喬永紅;張霞;徐光;鞠少卿;王躍國;王惠民;王旭東;;多發(fā)性骨髓瘤患者循環(huán)microRNA-21的表達與意義[J];臨床檢驗雜志;2011年09期

5 楊農(nóng);;血清microRNA-21在人食管鱗狀細胞癌中表達水平及臨床意義[J];中國老年學雜志;2013年15期

6 王俊;宋奎;;老年淋巴瘤患者microRNA-21的表達及臨床意義分析[J];中外醫(yī)療;2013年01期

7 郝清亞;王以浪;姚登福;繆亞軍;印滇;;肝癌患者血清microRNA-21水平變化[J];實用肝臟病雜志;2014年01期

8 王飛;呂梅;王媛媛;于慶功;舒敏;;血清microRNA-21在食管鱗狀細胞癌中表達的臨床意義[J];疑難病雜志;2013年11期

9 唐艷;王夢洪;;microRNA-21轉(zhuǎn)染的心肌細胞移植對低溫條件下心力衰竭大鼠的影響[J];中國病理生理雜志;2013年01期

10 王麗娟;王靜;;木犀草素抑制microRNA-21的表達誘導乳腺癌細胞凋亡[J];重慶醫(yī)學;2013年12期

相關博士學位論文 前2條

1 黃曉帆;microRNA-21缺失在胸主動脈瘤中的作用及其機制研究[D];華中科技大學;2016年

2 楊冰;MicroRNA-21表達與前列腺癌臨床病理特征及預后相關性的臨床和機制研究[D];山東大學;2017年

相關碩士學位論文 前8條

1 雷學智;單側(cè)輸尿管梗阻大鼠間質(zhì)纖維化腎臟組織和血漿中microRNA-21的表達及意義[D];南方醫(yī)科大學;2015年

2 閆克峰;microRNA-21在腎細胞癌的表達及意義[D];鄭州大學;2016年

3 張敬敬;芪藶強心通過調(diào)節(jié)microRNA-21保護缺氧心肌微血管內(nèi)皮細胞的功能機制研究[D];山東大學;2017年

4 江唯;MicroRNA-21對腎缺血再灌注損傷的調(diào)控作用及其機制的研究[D];南昌大學;2014年

5 唐艷;microRNA-21對乳鼠心肌細胞凋亡及PTEN/AKT/FOXO3a信號轉(zhuǎn)導通路的影響[D];南昌大學;2012年

6 吉娜;自發(fā)性高血壓大鼠肥厚心肌和纖維化腎臟組織中microRNA-21的表達[D];中國醫(yī)科大學;2010年

7 彭興;豬肌肉發(fā)育相關microRNA-21靶標基因TSC1和SMAD7的鑒定[D];湖南農(nóng)業(yè)大學;2013年

8 湯雅玲;胃癌組織microRNA-21和PTEN的表達及臨床病理意義[D];福建醫(yī)科大學;2010年

，

本文編號：2703209