【摘要】：心力衰竭是指由各種心血管疾病導(dǎo)致的心功能不全的一種綜合征,心肌梗死后心力衰竭是臨床心力衰竭中最常見的類型,其發(fā)病機(jī)制主要包括心室重構(gòu)、神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂、細(xì)胞炎癥因子激活及心肌能量代謝障礙等。心肌梗死后由于缺血及再灌注造成的微循環(huán)功能障礙,血管內(nèi)皮細(xì)胞合成的NO減少而ET-1增多,導(dǎo)致血管舒張功能障礙;血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)活性升高,激活腎素-血管緊張素系統(tǒng),加重心室重構(gòu),是促進(jìn)心力衰竭發(fā)展的重要因素。近年來由于我國人口老齡化加重及心肌梗死患者生存率的提高,心力衰竭的患病率在逐年升高,盡管外科手術(shù)及介入技術(shù)可使急性心肌梗死患者早期得到再灌注治療,心力衰竭診斷和治療的指南不斷更新,但心肌梗死后心力衰竭的防治仍然是一大挑戰(zhàn)。芪藶強(qiáng)心膠囊是由黃芪、附子、人參、丹參、葶藶子、紅花等11味中草藥組成的通絡(luò)藥物,具有抑制心肌纖維化、抑制心肌細(xì)胞凋亡、改善心肌能量代謝、調(diào)節(jié)炎癥因子等心臟保護(hù)功能。我們前期研究發(fā)現(xiàn)芪藶強(qiáng)心可抑制缺氧誘導(dǎo)的心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞凋亡,刺激HIF-1α和VEGF的表達(dá),并可通過NRG-1/ErbB-PI3K/AKT信號通路促進(jìn)缺氧條件下心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的血管新生功能。此外,我們還研究了芪藶強(qiáng)心對microRNA(miRNA,miR)的調(diào)控作用及信號通路分析�；诖�,我們以缺氧心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞為研究重點(diǎn),以miRNA為研究靶點(diǎn),探索miRNA在芪藶強(qiáng)心保護(hù)缺氧刺激的心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞過程中發(fā)揮的作用,為研究芪藶強(qiáng)心治療心力衰竭的機(jī)制提供新的方向。第一部分芪藶強(qiáng)心通過上調(diào)microRNA-21的表達(dá)減少缺氧條件下大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡目的探索microRNA在芪藶強(qiáng)心減少缺氧導(dǎo)致的心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮的作用。方法植塊法培養(yǎng)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞,傳代細(xì)胞選擇第二代(P2)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。采用三氣培養(yǎng)箱(1%02,5%CO2,94%N2,37℃)模擬缺氧環(huán)境。qRT-PCR方法檢測microRNA的表達(dá)水平變化,篩選出在缺氧心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)發(fā)生變化的microRNA,并用芪藶強(qiáng)心干預(yù),以進(jìn)行microRNA的功能檢測。細(xì)胞轉(zhuǎn)染antagomir以抑制microRNA在細(xì)胞中的表達(dá)。采用原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測細(xì)胞凋亡情況,采用Western Blot方法檢測caspase-3和cleaved caspase-3表達(dá)變化。結(jié)果與對照組相比,缺氧組miR-221、miR-222、miR-214、miR-155表達(dá)無變化;miR-23b表達(dá)先升高,缺氧12小時(shí)后降低,加入芪藶強(qiáng)心干預(yù)后,miR-23b表達(dá)無變化(P0.01);而miR-21表達(dá)隨缺氧時(shí)間延長而增加(P0.01),加入芪藶強(qiáng)心干預(yù)后,miR-21表達(dá)進(jìn)一步增加(P0.01)。與芪藶強(qiáng)心干預(yù)組相比,miR-21表達(dá)抑制組細(xì)胞凋亡數(shù)量顯著增加(P0.01),凋亡蛋白cleaved caspase-3/caspase-3 比值增高(P0.01)。結(jié)論芪藶強(qiáng)心可通過上調(diào)miR-21的表達(dá),減少缺氧導(dǎo)致的心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。第二部分芪藶強(qiáng)心通過上調(diào)microRNA-21的表達(dá)促進(jìn)缺氧條件下大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞血管新生目的探索芪藶強(qiáng)心在缺氧條件下是否可以通過調(diào)節(jié)miR-21的表達(dá)發(fā)揮促進(jìn)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞血管新生的功能及其相關(guān)機(jī)制研究。方法植塊法培養(yǎng)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞,傳代細(xì)胞至第二代進(jìn)行分組干預(yù)。芪藶強(qiáng)心干預(yù)濃度為0.5mg/ml。采用三氣培養(yǎng)箱(1%02,5%C02,94%N2,37°C)模擬缺氧環(huán)境。轉(zhuǎn)染miR-21模擬物和抑制劑以促進(jìn)和抑制miR-21在細(xì)胞的表達(dá)水平。將細(xì)胞隨機(jī)分為7組進(jìn)行干預(yù):對照組,缺氧組,缺氧+antagomir組、缺氧+mimics組、缺氧+芪藶強(qiáng)心組,缺氧+antagomir+芪藶強(qiáng)心組,缺氧+mimics+芪藶強(qiáng)心組。采用細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、成管實(shí)驗(yàn)檢測心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的血管新生功能,qRT-PCR方法檢測miR-21,HIF-1α和VEGF的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果與缺氧+芪藶強(qiáng)心組相比,抑制miR-21的表達(dá)后,芪藶強(qiáng)心促進(jìn)血管新生的功能減弱,表現(xiàn)在細(xì)胞遷移和增殖減慢,成管數(shù)和成環(huán)數(shù)減少,HIF-1α和VEGF的mRNA表達(dá)水平降低(P0.05或P0.01);而過表達(dá)miR-21,細(xì)胞遷移和增殖加快,成管數(shù)和成環(huán)數(shù)增加,HIF-1α和VEGF的表達(dá)水平增加(P0.05或P0.01),芪藶強(qiáng)心促進(jìn)血管新生的作用進(jìn)一步增強(qiáng)。結(jié)論在缺氧條件下,芪藶強(qiáng)心可通過促進(jìn)miR-21的表達(dá)發(fā)揮保護(hù)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞血管新生的功能。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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本文編號：2703209