本文關(guān)鍵詞：兩種海蟶多糖的提取、分離和結(jié)構(gòu)分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：我國具有豐富的海洋貝類資源,貝類多糖是海洋貝類體內(nèi)重要的生物活性物質(zhì)。因海洋貝類生存于特殊的海水環(huán)境中,貝類多糖具有獨(dú)特而復(fù)雜的結(jié)構(gòu),并在抗腫瘤、抗病毒和增強(qiáng)免疫等方面具有良好的應(yīng)用前景,有關(guān)貝類多糖結(jié)構(gòu)和生物活性的研究受到了國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注�？O蟶和細(xì)長竹蟶均屬海洋軟體動物門,雙殼綱,竹蟶屬,不僅含有蛋白質(zhì)、糖類、及鈣、鐵和多種維生素,具有很高的營養(yǎng)價值；而且具有清熱解毒、補(bǔ)陰除煩、治痢、通乳、消炎、明目等活性,具有潛在的藥用價值。本文以采自青島紅島海域的縊蟶和細(xì)長竹蟶為原料,采取不同的提取和分離純化方法,得到了4種縊蟶多糖組分和8種細(xì)長竹蟶多糖組分；對多糖組分的基本理化性質(zhì)進(jìn)行了分析,并對部分多糖組分的結(jié)構(gòu)和抗乙肝病毒、免疫活性進(jìn)行了研究。主要研究結(jié)果如下：1.對縊蟶依次采用沸水和0.1 mol/L氫氧化鈉溶液提取,得到了2種粗多糖組分(YC-S和YC-J),得率分別為7.2%和8.9%。對2種縊蟶粗多糖的理化性質(zhì)進(jìn)行分析,結(jié)果表明：YC-S的總糖含量和蛋白含量分別為55.4%和29.5%；YC-J的總糖含量和蛋白含量分別為38.1%和25.8%；兩者的單糖組成較簡單,均只含有葡萄糖(Glc),且不含硫酸根。YC-S和YC-J經(jīng)Q Sepharose Fast Flow(QFF)強(qiáng)陰離子交換柱層析,共獲得4種水溶性多糖組分(YC-S1、YC-S2、YC-J1和YC-J2)。對其中含量較多的YC-S2組分,進(jìn)一步采用Sephacryl S-300凝膠滲透色譜柱進(jìn)行純化,得到的YC-S2純化組分的總糖含量和蛋白含量分別為90.9%和8.7%；采用高效凝膠滲透色譜(HPGPC)法測得其重均相對分子質(zhì)量為482 kD,且為單一對稱峰,純度較高。采用紅外光譜、核磁共振波譜、甲基化和氣質(zhì)聯(lián)用等技術(shù),推測了YC-S2純化組分的結(jié)構(gòu)：以a-(1→,4)Glc為主鏈,含有少量β-(1→3,4)和β-(1--*4)分支的D-毗喃型葡聚糖。2.對細(xì)長竹蟶依次采用沸水提取和堿提取2種方法,分別得到了2種粗多糖組分(ZC-S和ZC-J),得率分別為12.9%和3.5%。進(jìn)一步采用陰離子交換分離純化,共得到8種水溶性多糖組分�；纠砘再|(zhì)分析結(jié)果表明：ZC-S的總糖含量和蛋白含量分別為14.2%和59.3%；ZC-J的總糖含量和蛋白含量分別為12.5%和76.3%。ZC-S和ZC-J均為雜多糖,ZC-S單糖組成為Glc:GlcN:Gal:GalN:Fuc: Man=16.1:2.9:2.1:1.9:1.7:1; ZC-J的單糖組成為Glc:GlcN: Gal:Man:GlcN:Fuc=9.1:2.1:1.5:1.1:1.1:1.對于這2種單糖組成復(fù)雜的多糖,本文采用了多級酸水解的策略對其主鏈和支鏈結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析,采用低濃度的三氟乙酸(TFA)將側(cè)鏈進(jìn)行水解分析表明,ZC-S和ZC-J的側(cè)鏈分別含有巖藻糖、半乳糖醛酸和鼠李糖,除此之外,ZC-J的側(cè)鏈還含有少量的葡萄糖醛酸和木糖：主鏈部分經(jīng)甲基化和氣質(zhì)聯(lián)用可知：ZC-S主鏈含有→4)Glc(1→, →3,4)Man(1→,→2,4)Glc(1→和→4,6)Gal(1→共4種連接方式：ZC-J主鏈含有→4)Glc(1→,→3,4)Man(1→和→4,6)Gal(1→+共3種連接方式。3.對分離純化獲得的部分多糖組分進(jìn)行了初步的免疫活性和抗乙肝病毒活性評價。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,細(xì)長竹蟶多糖組分中低劑量(50 μg/mL)的ZC-S2、中劑量(100 μg/mL)的ZC-S3-ZC-S4及中、高劑量(200 μg/mL)的ZC-J2-ZC-J4,均可顯著增強(qiáng)Raw264.7細(xì)胞的吞噬指數(shù),表明細(xì)長竹蟶多糖具有顯著增強(qiáng)小鼠免疫活性的作用；但縊蟶YC-S2多糖組分免疫活性較弱。細(xì)長竹蟶多糖組分ZC-S2和ZC-S3具有較好的抗乙肝病毒活性,當(dāng)ZC-S3濃度為200 ug/mL時,其對HBeAg和HBsAg的抑制率分別為38%和35%。關(guān)于縊蟶及細(xì)長竹蟶多糖的研究,目前報(bào)道的主要是有關(guān)其提起方法和生物活性方面的研究,未見有關(guān)其分離純化、結(jié)構(gòu)分析方面的系統(tǒng)研究和免疫活性、抗乙肝病毒活性方面的報(bào)道。本文相關(guān)的研究結(jié)果對縊蟶及細(xì)長竹蟶多糖的生物活性與結(jié)構(gòu)的深入研究和潛在的藥用開發(fā)提供了基礎(chǔ),也為縊蟶、細(xì)長竹蟶等海洋貝類資源的高值化利用提供了參考。
【關(guān)鍵詞】：縊蟶 細(xì)長竹蟶 多糖 結(jié)構(gòu)分析 生物活性
【學(xué)位授予單位】：中國海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R284
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-14
• 第一章 前言14-31
• 1. 多糖的研究概括15-22
• 1.1 多糖的提取15-17
• 1.1.1 水提法15-16
• 1.1.2 酸提法16
• 1.1.3 堿提法16
• 1.1.4 酶提法16-17
• 1.2 多糖的分離純化17-19
• 1.2.1 膜分離法17-18
• 1.2.2 分級沉淀法18
• 1.2.3 季銨鹽沉淀法18
• 1.2.4 凝膠過濾色譜法18-19
• 1.2.5 離子色譜法19
• 1.3 多糖的結(jié)構(gòu)分析19-22
• 1.3.1 單糖組成分析19-20
• 1.3.2 紅外光譜分析20-21
• 1.3.3 甲基化分析21
• 1.3.4 多級酸水解21
• 1.3.5 質(zhì)譜分析21-22
• 1.3.6 核磁共振法分析22
• 2. 海洋軟體動物多糖22-26
• 2.1 抗氧化活性23
• 2.2 免疫調(diào)節(jié)活性23-24
• 2.3 抗腫瘤活性24-25
• 2.4 抗凝血活性25
• 2.5 抗病毒活性25
• 2.6 抗菌活性25-26
• 2.7 保肝活性26
• 3 海蟶的研究26-29
• 3.1 形態(tài)與生態(tài)特征26-27
• 3.2 海蟶的生活習(xí)性27
• 3.3 海蟶活性物質(zhì)的研究27-29
• 3.3.1 海蟶活性肽的研究27-28
• 3.3.2 海蟶多糖的研究28-29
• 4. 本課題的立題背景和研究思路29-31
• 第二章 縊蟶多糖的提取、分離和結(jié)構(gòu)分析31-62
• 1 引言31
• 2 材料與儀器31-33
• 2.1 材料31-32
• 2.2 儀器32-33
• 3 實(shí)驗(yàn)方法33-40
• 3.1 樣品的前處理33
• 3.2 縊蟶多糖的提取33-34
• 3.2.1 熱水提取33-34
• 3.2.2 堿提取34
• 3.3 酶法脫蛋白34
• 3.4 縊蟶多糖的分離純化34-35
• 3.4.1 離子交換柱層析34-35
• 3.4.2 凝膠滲透柱層析35
• 3.5 縊蟶多糖的理化性質(zhì)分析35-37
• 3.5.1 總糖含量的測定35
• 3.5.2 蛋白含量的測定35-36
• 3.5.3 硫酸根含量的測定36-37
• 3.6 相對分子質(zhì)量測定及純度分析37
• 3.7 單糖組成分析37-38
• 3.8 紅外光譜分析38
• 3.9 甲基化分析38-39
• 3.9.1 試劑預(yù)處理38
• 3.9.2 甲基化反應(yīng)38-39
• 3.9.3 甲基化多糖的全水解39
• 3.9.4 全水解產(chǎn)物的還原39
• 3.9.5 乙�；磻�(yīng)39
• 3.9.6 GC-MS分析39
• 3.10 核磁分析39-40
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-60
• 4.1 縊蟶前處理結(jié)果40
• 4.2 縊蟶粗多糖提取結(jié)果40
• 4.3 縊蟶粗多糖除蛋白結(jié)果40-41
• 4.4 縊蟶多糖的分離純化41-43
• 4.4.1 縊蟶多糖的分離41-42
• 4.4.2 縊蟶多糖的純化42-43
• 4.5 縊蟶多糖的理化性質(zhì)測定結(jié)果43-46
• 4.5.1 總糖含量測定結(jié)果43-44
• 4.5.2 蛋白含量測定結(jié)果44-45
• 4.5.3 硫酸根含量測定結(jié)果45-46
• 4.6 樣品相對分子質(zhì)量測定及純度分析結(jié)果46-48
• 4.7 單糖組成分析結(jié)果48-50
• 4.8 紅外光譜分析結(jié)果50-51
• 4.9 甲基化分析結(jié)果51-54
• 4.10 核磁共振分析結(jié)果54-60
• 5 本章小結(jié)60-62
• 第三章 細(xì)長竹蟶多糖的提取、分離和結(jié)構(gòu)分析62-84
• 1 引言62
• 2 材料與儀器62-63
• 2.1 材料62-63
• 2.2 儀器63
• 3 實(shí)驗(yàn)方法63-67
• 3.1 樣品的前處理63
• 3.2 細(xì)長竹蟶多糖的提取63
• 3.2.1 熱水提取63
• 3.2.2 堿提取63
• 3.3 酶法脫蛋白63-64
• 3.4 細(xì)長竹蟶多糖的分離純化64
• 3.5 細(xì)長竹蟶多糖理化性質(zhì)的測定64-65
• 3.5.1 總糖含量的測定64
• 3.5.2 蛋白含量的測定64
• 3.5.3 硫酸根含量測定64
• 3.5.4 氨基糖含量的測定64-65
• 3.5.5 糖醛酸含量的測定65
• 3.6 單糖組成分析65-66
• 3.7 寡糖分析66
• 3.7.1 部分酸水解條件的摸索66
• 3.7.2 降解液的TLC分析66
• 3.7.3 寡糖的制備66
• 3.7.4 負(fù)離子質(zhì)譜66
• 3.8 多級酸水解分析66-67
• 3.8.1 不同濃度的酸水解多糖66-67
• 3.8.2 單糖組成分析67
• 3.9 甲基化分析67
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果67-82
• 4.1 細(xì)長竹蟶前處理結(jié)果67-68
• 4.2 細(xì)長竹蟶多糖提取結(jié)果68
• 4.3 細(xì)長竹蟶多糖除蛋白結(jié)果68
• 4.4 細(xì)長竹蟶多糖的分離純化68-70
• 4.5 細(xì)長竹蟶多糖的理化性質(zhì)測定結(jié)果70-72
• 4.6 單糖組成分析結(jié)果72-75
• 4.7 寡糖分析結(jié)果75-79
• 4.7.1 降解條件摸索的結(jié)果75-76
• 4.7.2 部分酸降解液的Bio-Gel P2凝膠柱層析結(jié)果76-77
• 4.7.3 寡糖分析結(jié)果77-79
• 4.8 多級酸水解結(jié)果79-82
• 5 實(shí)驗(yàn)小結(jié)82-84
• 第四章 兩種海蟶多糖的生物活性評價84-91
• 1 引言84-85
• 2 材料與儀器85-86
• 2.1 材料85
• 2.2 儀器85-86
• 3 實(shí)驗(yàn)方法86-87
• 3.1 免疫活性的測定86-87
• 3.1.1 小鼠Raw 264.7巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)86
• 3.1.2 Raw264.7細(xì)胞吞噬中性紅實(shí)驗(yàn)86-87
• 3.2 抗乙肝病毒的測定87
• 3.2.1 HepG2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)87
• 3.2.2 HBeAg和HBsAg的檢測87
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果87-90
• 4.1 免疫活性測定結(jié)果87-89
• 4.2 抗乙肝病毒活性的測定結(jié)果89-90
• 5 本章小結(jié)90-91
• 結(jié)語91-93
• 創(chuàng)新點(diǎn)93-94
• 參考文獻(xiàn)94-105
• 致謝105-106
• 個人簡歷106
• 參與發(fā)表的文章106

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 欒曉紅;兩種海蟶多糖的提取、分離和結(jié)構(gòu)分析[D];中國海洋大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：兩種海蟶多糖的提取、分離和結(jié)構(gòu)分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：264342