本文關鍵詞：PRP對兔脂肪間充質干細胞AnxA1基因和PPARγ基因表達的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:自從Zuk提取并報道脂肪間充質干細胞(adipose-derived stem cells,ADSC S)后,人們逐漸發(fā)現ADSCs取材容易,來源豐富、自我更新能力強、活力持久并具有多向分化的功能。后續(xù)一系列實驗又發(fā)現,ADSCs是具有促進增殖、組織修復能力的干細胞。其可以通過離體培養(yǎng)和誘導分化成脂肪細胞,并普遍存在于脂肪細胞周圍,具有促進脂肪細胞的更新及恢復能力。由于自體脂肪移植技術可以改善面部缺損、小乳癥等臨床常見問題,因此受到整形外科醫(yī)生的關注,并廣泛于臨床應用。在臨床實際應用過程中,臨床醫(yī)生發(fā)現移植后脂肪細胞成活率很低、脂肪細胞易發(fā)生感染、患者對移植后外形不滿意等一系列問題,使其在臨床的應用受到限制,這也成為整形外科領域中迫切需要解決的難題。富血小板血漿(platelet-rich plasma,PRP)主要是抽吸新鮮動脈血液,經過離心后,最后獲得含有高濃度血小板的血漿。然而關于PRP制備的方法,國內外說法不一,但主要都是通過離心方法獲取。我們發(fā)現在一定時間內,PRP可以促進移植后脂肪存活,然而如何促進增殖的作用機制還不十分清楚,有待進一步研究。研究發(fā)現Anx A1基因與PPARγ基因可以影響干細胞增殖,并促進移植后受區(qū)脂肪細胞的成活,因此在一定時間內,通過向ADSCs中加入PRP的實驗,檢測這兩種基因的具體表達情況,有助于探討PRP的作用機制。目的:研究通過向兔脂肪間充質干細胞(ADSCs)中加入富血小板血漿(platelet-rich plasma,PRP)的實驗,檢測對這兩種基因的表達存在顯著的作用。方法:取材于純種新西蘭大白兔附睪,剝離外面包膜,取出脂肪墊,胰酶消化后,采用倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及鑒定,將脂肪間充質干細胞置于孵箱中培養(yǎng)、進行傳代培養(yǎng)至第四代,提取兔心臟動脈血20毫升,通過傳統(tǒng)二次離心法制備富血小板血漿PRP(platelet-rich plasma)和貧血小板血漿PPP(platelet-poor plasma),實驗分三組,即PRP組(實驗組)、PPP組(陽性對照組)及空白完全培養(yǎng)基組(空白對照組),將純化的第四代脂肪間充質干細胞置入其中,并加入5%的全培,孵箱中分別培養(yǎng)24h、48h、72h后,獲取總RNA后,通過反轉錄PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)檢測目的基因Anx A1基因和PPARγ基因表達量的變化。結果:1.倒置相差顯微鏡下觀察,原代兔脂肪間充質干細胞部分漂浮在培養(yǎng)液中,部分呈貼壁狀態(tài),早期形狀為橢圓形,繼續(xù)培養(yǎng)24h后可見原代細胞在25cm2培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),形狀呈“梭形”,且約70%貼壁生長,繼續(xù)培養(yǎng)48h后,觀察呈“梭形”、“短棒狀”;經過3-4次換液、培養(yǎng)傳代后,倒置相差顯微鏡下觀察,細胞得到純化,符合干細胞形態(tài)學特征。2.脂肪間充質干細胞分別通過油紅O染色和茜素紅染色進行誘導分化,2周后倒置相差顯微鏡下觀察見紅色脂滴和片狀鈣化結節(jié),結果均為陽性,表明培養(yǎng)的細胞是脂肪間充質干細胞,并證明其具有多向誘導分化功能。3.通過反轉錄PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)數據顯示PRP組Anx A1基因和PPARγ基因表達量比其他兩組顯著增多。結論:通過提取、體外純化、培養(yǎng)所得的脂肪間充質干細胞,采用倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及鑒定后,確定為兔脂肪間充質干細胞。PRP可促進兔脂肪間充質干細胞增殖,并對提高Anx A1基因與PPARγ基因的表達存在顯著作用。
【關鍵詞】：AnxA1基因 PPARγ基因 脂肪間充質干細胞 PRP
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R622
【目錄】：

• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 材料和方法15-23
• 1.實驗動物15
• 2.儀器及試劑15-16
• 3.實驗方法16-23
• 3.1 干細胞的提取16-17
• 3.2 細胞培養(yǎng)及傳代17-18
• 3.3 干細胞鑒定18
• 3.4 PRP及PPP的制備18-19
• 3.5 實驗分組19
• 3.6 細胞收集19-20
• 3.7 RT-PCR20-23
• 結果23-27
• 1.脂肪間充質干細胞的形態(tài)學及組織學染色鑒定23-24
• 2. 各組間脂肪間充質干細胞AnxA1基因和PPARγ基因RT-PCR結果24-26
• 3.不同時間AnxA1基因和PPARγ基因啟動情況26-27
• 討論27-30
• 結論30-31
• 參考文獻31-35
• 綜述35-45
• 參考文獻41-45
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況45-46
• 致謝46-47

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本文編號：260830