【摘要】：目的探究補(bǔ)腎生血解毒方調(diào)控T細(xì)胞自身免疫應(yīng)答相關(guān)因子表達(dá)、恢復(fù)T細(xì)胞免疫應(yīng)答網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)的動態(tài)平衡、恢復(fù)和重建骨髓造血機(jī)能的作用機(jī)制。方法60Coγ射線照射復(fù)合免疫介導(dǎo)制作小鼠骨髓抑制再生障礙性貧血(AA)動物模型,補(bǔ)腎生血解毒方干預(yù),以環(huán)孢素(CsA)免疫抑制治療為陽性對照藥物,通過血液學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)檢測,觀察中藥復(fù)方對AA小鼠血液學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)的影響;免疫熒光標(biāo)記,利用激光共聚焦掃描顯微鏡觀察T淋巴細(xì)胞中T-bet的表達(dá)和分布以及淋巴細(xì)胞刺激因子相關(guān)蛋白(SAP)與淋巴細(xì)胞刺激因子(SLAM)結(jié)合情況的改變;流式細(xì)胞儀檢測外周血和脾臟中T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)量的變化,以及T輔助細(xì)胞1(Thelpercell,Th)、Th2、Th17及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell,Treg)亞群比率的改變;流式細(xì)胞儀檢測骨髓中造血干細(xì)胞的凋亡率。結(jié)果(1)藥物干預(yù)7天、14天后,模型組與各治療組血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞計數(shù)(RBC)計數(shù)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);21天、28天后中藥治療組和陽性對照組HGB、RBC計數(shù)均高于模型組(P0.01)。藥物干預(yù)7天后,模型組與各治療組血小板總數(shù)(PLT)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);14天、21天、28天后,中藥治療組和陽性對照組PLT均高于模型組(P0.01)。造模結(jié)束后,正常組白細(xì)胞數(shù)(WBC)明顯高于各造模組(P0.01),藥物干預(yù)21天后,各治療組WBC高于模型組(P0.01)。藥物干預(yù)后,紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)、紅細(xì)胞平均體積(MCV)、細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCHC)等貧血形態(tài)學(xué)分類指標(biāo),組間差異在特定時間段有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),但缺乏規(guī)律。PDW、MPV、HCT等指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)(2)免疫熒光結(jié)果顯示,模型組和正常組比較T淋巴細(xì)胞中T-bet表達(dá)量顯著升高(P0.01),陽性對照組和中藥治療組T淋巴細(xì)胞中T-bet表達(dá)量低于模型組(P0.01);模型組和正常組比較SAP和SLAM結(jié)合比率明顯降低(P0.01),陽性對照組較模型組明顯升高(P0.01),中藥治療組較模型升高(P0.05)。(3)流式細(xì)胞儀檢測外周血結(jié)果顯示:模型組與正常組比較,T淋巴細(xì)胞在外周血中的比率降低(P0.01);陽性對照組、中藥治療組T淋巴細(xì)胞比率比模型組均顯著降低(P0.01)。模型組和正常組比較,B淋巴細(xì)胞差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),NK細(xì)胞比率明顯升高(P0.01);各治療組和模型組比B細(xì)胞、NK細(xì)胞比率明顯下降(P0.01)。Th2、Th17比率變化各組間無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。模型組和正常組比,Th1和Treg比率上調(diào)(P0.01);中藥組和陽性對照組Th1、Treg比率較模型組明顯下調(diào)(P0.01)。流式細(xì)胞儀檢測脾組織細(xì)胞懸液結(jié)果顯示:脾臟中T細(xì)胞比率,模型組和正常組比有下降趨勢(P0.01);中藥組和陽性對照組較模型組顯著下降(P0.01)。B細(xì)胞、NK細(xì)胞比率變化趨勢和外周血檢測結(jié)果較為一致。Th1細(xì)胞比率,模型組較正常組顯著升高(P0.01);中藥組較模型組降低(P0.01)。Th2細(xì)胞比率,各造模組較正常組比率下降(P0.01),各治療組和模型組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Treg細(xì)胞比率,模型組較正常組降低,中藥組較模型組有上升趨勢但無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。Th17細(xì)胞比率,正常組和模型組無統(tǒng)計學(xué)差異,各治療組較模型組顯著降低(P0.01)。流式細(xì)胞檢測骨髓結(jié)果顯示:模型組骨髓細(xì)胞凋亡率明顯高于正常組(P0.01),陽性對照組、中藥治療組均低于模型組(P0.01)。結(jié)論補(bǔ)腎生血解毒方可以通過調(diào)控T細(xì)胞的免疫應(yīng)答網(wǎng)絡(luò),恢復(fù)骨髓造血微環(huán)境中T細(xì)胞免疫應(yīng)答網(wǎng)絡(luò)的動態(tài)平衡和HSCs的增殖和分化,從而達(dá)到治療AA的目的。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2527723