【摘要】：肝移植是目前解決終末期肝病的唯一有效手段。受者術(shù)后需常規(guī)服用他克莫司等免疫抑制劑來(lái)預(yù)防排斥反應(yīng)。他克莫司為新型鈣調(diào)磷酸酶抑制劑,因免疫抑制作用強(qiáng)大、不良反應(yīng)較少而成為指南推薦的一線用藥。他克莫司治療窗窄,口服生物利用度個(gè)體差異大,需常規(guī)進(jìn)行血藥濃度監(jiān)測(cè)。護(hù)肝片由柴胡、茵陳、板藍(lán)根、五味子、豬膽粉、綠豆六味中藥材組成,具有保肝、疏肝理氣、健脾消食、降低轉(zhuǎn)氨酶的作用。肝移植受者常合并服用護(hù)肝片,在進(jìn)行他克莫司血藥濃度監(jiān)測(cè)及隨訪時(shí)我們發(fā)現(xiàn),加服護(hù)肝片后肝移植受者他克莫司穩(wěn)態(tài)谷濃度明顯升高。那么,護(hù)肝片與他克莫司是否存在藥物相互作用呢?由于肝移植受者用藥種類(lèi)繁多,直接對(duì)肝移植受者進(jìn)行研究存在其它成份的干擾以及倫理等方面的限制,因此本課題擬在比格犬體內(nèi)研究護(hù)肝片對(duì)他克莫司藥動(dòng)學(xué)的影響,同時(shí)建立護(hù)肝片中多種成分同時(shí)測(cè)定方法,為進(jìn)一步研究他克莫司對(duì)護(hù)肝片藥動(dòng)學(xué)影響提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),為臨床合理用藥提供參考。第一部分護(hù)肝片對(duì)比格犬體內(nèi)他克莫司藥動(dòng)學(xué)的影響目的:研究合用護(hù)肝片對(duì)比格犬體內(nèi)他克莫司藥動(dòng)學(xué)的影響,初步觀察兩藥是否存在藥物相互作用。方法:試驗(yàn)分兩組,對(duì)照組(n=6):單服他克莫司,試驗(yàn)組(n=6):他克莫司合用護(hù)肝片。采用自身前后對(duì)照試驗(yàn),每只比格犬口服給予1粒他克莫司,一周后同時(shí)給予1粒他克莫司和2片護(hù)肝片。給藥前禁食12 h,期間自由飲水。于給藥前(0 h)及給藥后0.167,0.333,0.5,0.667,0.833,1,1.5,2,3,4,6,8,12,24 h于后肢小隱靜脈取血1 m L,置于2 m L EDTA K2抗凝管中,待測(cè)。采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法測(cè)定他克莫司全血濃度。將不同采血點(diǎn)血藥濃度數(shù)據(jù),采用DAS(2.1.1版)軟件進(jìn)行處理,計(jì)算他克莫司的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù):藥-時(shí)曲線下面積AUC0-t和AUC0-∞、消除半衰期t1/2、達(dá)峰時(shí)間T max、達(dá)峰濃度C max、表觀分布容積V/F、清除率CL/F。應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件處理兩組間他克莫司血藥濃度及藥動(dòng)學(xué)參數(shù)數(shù)據(jù),計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn),P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:合用護(hù)肝片前后他克莫司的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù):AUC0-24h分別為(54.23±33.95)和(74.54±32.85);t1/2分別為(13.84±9.05)和(8.71±4.49)h;T max分別為(0.72±0.40)和(0.86±0.37)h;C max分別為(17.17±7.80)和(22.93±8.10)μg·L-1;CL/F分別為(2.22±1.67)和(1.42±0.67)L·h-1;V/F分別為(37.54±24.77)和(17.50±11.82)L。與單服他克莫司相比,合用護(hù)肝片后他克莫司的AUC0-24h和C max分別增加37.5%和34%,CL/F和V/F分別降低36%和53%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。t1/2變短,T max延遲,差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:護(hù)肝片能提高比格犬體內(nèi)他克莫司全血血藥濃度和生物利用度,降低藥物清除率和表觀分布容積。第二部分高效液相色譜波長(zhǎng)切換法同時(shí)測(cè)定護(hù)肝片中綠原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量目的:建立同時(shí)測(cè)定護(hù)肝片中綠原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素含量的高效液相色譜法,以期為進(jìn)一步研究他克莫司對(duì)護(hù)肝片藥動(dòng)學(xué)影響提供基礎(chǔ)研究依據(jù)。方法:護(hù)肝片除去包衣,研細(xì),置具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇25 m L,超聲提取30 min,過(guò)濾,注入色譜系統(tǒng)。采用ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以0.2%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)為流動(dòng)相,梯度洗脫(0~5 min,B為13%;5~15 min,B為13%~55%;15~23 min,B為55%~62%;23~25 min,B為62%~70%;25~29 min,B為70%~75%;29~35 min,B為75%;35~35.10 min,B為75%~13%;35.10~45min,B為13%),流速為1.0 m L·min-1,柱溫:35℃,檢測(cè)波長(zhǎng):0~6 min為327 nm;6~16 min為380 nm;16~45 min為250 nm,進(jìn)樣量:10μL。結(jié)果:建立高效液相色譜波長(zhǎng)切換法同時(shí)測(cè)定護(hù)肝片中綠原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量測(cè)定方法,綠原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素與其他成分分離良好,雜質(zhì)干擾少,分離度均大于1.5。保留時(shí)間分別為4.02 min(4.35 min)、18.29 min、29.32 min和31.29 min。綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=28.26330X+24.9888,r=0.99939(n=5),線性范圍為4~100μg·m L-1;五味子醇甲標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=21.21935X-8.43444,r=0.99994(n=5),線性范圍為4~100μg·m L-1;五味子甲素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=20.07794X-2.83327,r=0.99993(n=5),線性范圍為1~25μg·m L-1;五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=17.76046X-2.51254,r=0.99992(n=5),線性范圍為2~50μg·m L-1。綠原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的精密度試驗(yàn)RSD值(n=6)分別為0.32%,0.58%,0.14%,0.12%;重復(fù)性試驗(yàn)RSD值(n=6)分別為1.03%,0.82%,0.91%,0.53%;穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD值(n=6)分別為0.94%,0.31%,0.77%,0.21%;平均加樣回收率分別為103.24%,101.21%,101.01%,98.77%,RSD值(n=6)分別為2.09%,1.66%,1.77%,1.48%。結(jié)論:建立了高效液相色譜波長(zhǎng)切換法同時(shí)測(cè)定護(hù)肝片中綠原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量測(cè)定方法,該方法準(zhǔn)確、快捷、可靠,為進(jìn)一步研究他克莫司對(duì)護(hù)肝片藥動(dòng)學(xué)影響打下實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2472959