【摘要】：藤梨根為獼猴桃屬植物中華獼猴桃(Actindia chinensis Planch)的干燥根,其味苦,性寒,具有清熱利濕、解毒消腫、散瘀通絡(luò)等作用。臨床上主要用于肝炎、濕熱黃疸、痢疾、風濕性關(guān)節(jié)炎、消化道腫瘤等。本課題對藤梨根進行了系統(tǒng)的化學成分研究,并對所獲得的三萜類成分進行了抗腫瘤活性研究。采用硅膠柱色譜、C18反相柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜以及HPLC等方法,從藤梨根乙醇浸提物的乙酸乙酯部位共分離并鑒定了 18個化合物,其結(jié)構(gòu)分別為:ursolic acid(1);2α,3α,24-trihydroxyolean-12-en-28-oic acid(2);corosolic acid(3);cleomiscosin A(4);isolariciresinal(5);7,8-trans-3,5'-dimethoxy-4',7-epoxy-8,3'-neolignane-5,9,9'-triol(6);7R,8R-threo-4,7,9,9'-tetrahydroxy-3,3'-dimethoxy-8-O-4'-neolignan(7);7S,,8S,-threo-4,7,9,9'-tetrahydroxy-3,3'-dimethoxy-8-0-4'-neolignan(8);quercetin(9);3,5,7,3',5'-pentahydroxyflavan(10);fraxetin(11);scopoletin(12);β-sitosterol(13);daucosterol(14);vanillic acid(15);methyl caffeate(16);2,6-dihydroxy-1,4-benzenedicarboxy lic acid dimethyl ester(17);2,3-dihydroxypropyl stearate(18)。其中,化合物 4,5,6,7,8,10,11,12,16,17,18為首次從該植物中分離得到。三萜類為藤梨根中主要的抗癌活性成分。采用MTT法對所獲得三萜類成分1,2和3進行抗肺癌細胞增殖活性篩選。結(jié)果表明,化合物2和3對肺癌NCI-H292細胞有增殖抑制作用,其IC50值分別為29.28 μ和12.20 μM;同時,化合物3對肺癌A549細胞也有一定的增殖抑制作用,其IC50值為33.83 μM。我們選取藤梨根中含量較大,對肺癌NCI-H292細胞有一定增殖抑制作用,對人臍靜脈內(nèi)皮EA.hy926細胞無毒性作用的化合物2(TLG-2)做進一步研究。MTT實驗和細胞實時生長檢測(RTCA)實驗表明TLG-2能夠劑量依賴性和時間依賴性的抑制肺癌NCI-H292細胞增殖;PI單染實驗結(jié)果表明TLG-2并不能引起肺癌細胞周期的改變;DAPI染色實驗和Annexin V/PI雙染實驗結(jié)果表明TLG-2能夠誘導肺癌NCI-H292細胞凋亡。進一步的研究發(fā)現(xiàn),TLG-2能夠誘導細胞內(nèi)ROS累積、線粒體膜電勢(MMP)降低。Western blot結(jié)果表明TLG-2能誘導促凋亡蛋白Bax表達增加,抑凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL表達減少,細胞色素c(Cytochromec)釋放,進一步激活caspase級聯(lián)反應,導致細胞凋亡。Western blot結(jié)果和免疫熒光結(jié)果顯示,TLG-2能促使凋亡誘導因子AIF入核,使核內(nèi)的DNA斷裂,引發(fā)凋亡。綜上所述,TLG-2能夠通過線粒體途徑誘導細胞凋亡。去氫鴉膽苦醇B(DHB)是從鴉膽子中分離得到的苦木素類化合物,前期的研究表明DHB能夠誘導肺癌A549和NCI-H292細胞凋亡。本課題主要研究DHB在低濃度下能夠促進順鉑(CDDP)誘導的肺癌A549細胞凋亡。RTCA結(jié)果表明,DHB能夠增強CDDP誘導的細胞增殖抑制作用;DAPI染色及Annexin V/PI雙染的結(jié)果表明DHB能夠促進CDDP誘導的細胞凋亡;DHB與CDDP聯(lián)用,能夠?qū)е录毎鸐MP降低,細胞色素c釋放以及AIF入核;進一步研究表明,DHB與CDDP聯(lián)用能使凋亡相關(guān)蛋白的表達發(fā)生改變,如:促凋亡蛋白Bax表達增加,抑凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL表達減少;同時還能使活化的caspase-9、caspase-3以及PARP蛋白表達增加。這說明DHB能夠通過線粒體介導的凋亡途徑增強CDDP誘導的細胞凋亡。腫瘤細胞中的Nrf2高表達能夠?qū)е履[瘤細胞對化療藥物的耐藥性。我們檢測到DHB能夠時間依賴性和劑量依賴性的降低A549細胞內(nèi)Nrf2的表達,同時也能劑量依賴性的降低Nrf2下游蛋白的表達。RT-PCR結(jié)果顯示,DHB能劑量依賴性的抑制Nrf2及其下游基因的表達,這可能使得細胞內(nèi)的ROS累積,最終導致ROS誘導的線粒體凋亡。這些結(jié)果表明,DHB與CDDP聯(lián)合使用具有協(xié)同抗肺癌的作用。
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【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R284;R285

【參考文獻】

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本文編號：2448026