【摘要】：研究目的阿爾茨海默病(Alzheimer`s disease,AD)是一種復(fù)雜的神經(jīng)退行性疾病,其主要病理特征是腦中β-淀粉樣蛋白(β-amyloid protein,Aβ)斑塊沉積、神經(jīng)原纖維纏結(jié)和神經(jīng)元丟失。目前臨床上并無(wú)理想的治療AD的藥物。六味地黃湯(Liuwei Dihuang Decoction,LW)是中醫(yī)滋補(bǔ)腎陰的經(jīng)典代表名方,臨床和藥理學(xué)研究表明,LW具有防治AD的作用。六味地黃苷糖(LW-AFC)是來(lái)源于LW的中藥五類新藥,由LWD-b(糖苷部位)、LWB-B(多糖部位)和CA-30(寡糖部位)三個(gè)活性部位組成。本室前期研究結(jié)果表明,LW-AFC能夠通過(guò)調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌免疫調(diào)節(jié)(Neuroendocrine immunomodulation,NIM)網(wǎng)絡(luò)平衡來(lái)改善AD模型小鼠的認(rèn)知功能。為進(jìn)一步明確LW中發(fā)揮上述藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用原理,本研究研究了組成LW-AFC的三個(gè)活性部位及其中的部分活性成分對(duì)AD模型動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力的作用及可能的作用環(huán)節(jié)或機(jī)制,并與LW原方(LW)及LW活性部位復(fù)方(LW-AFC)進(jìn)行了比較。研究方法選擇快速老化小鼠(Senescence-accelerated mouse prone 8 strain,SAMP8)作為散發(fā)型AD(Sporadic Alzheimer`s disease,SAD)模型小鼠,選擇Pr P-h AβPPswe/PS1d E9(APP/PS1)轉(zhuǎn)基因小鼠作為家族型AD(Familial Alzheimer`s disease,FAD)模型小鼠,分別灌胃給予三個(gè)活性部位(LWD-b、LWB-B或CA-30),并設(shè)置LW、LW-AFC、美金剛及多奈哌齊組作為具有不同作用機(jī)制的藥物對(duì)照組。分別灌胃給予7月齡SAMP8小鼠LW、LW-AFC、LWD-b、LWB-B或CA-30三個(gè)月,灌胃給予10月齡APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠LW、LW-AFC、CA-30(0.48、0.96、1.92g/kg)或水蘇糖(STA)三個(gè)月,通過(guò)老化度評(píng)分以及筑巢實(shí)驗(yàn)觀察它們對(duì)動(dòng)物老化狀態(tài)的影響;通過(guò)腦體比考察對(duì)腦萎縮程度的影響;通過(guò)自主活動(dòng)性、新異物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)和穿梭箱實(shí)驗(yàn),考察對(duì)學(xué)習(xí)記憶能力等行為學(xué)的影響;采用Alpha LISA技術(shù),檢測(cè)對(duì)APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠海馬及外周血中Aβ1-42含量的影響。為探討LW活性部位及活性成分的作用環(huán)節(jié)或機(jī)制,采用放射免疫法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)對(duì)模型小鼠下丘腦-垂體-腎上腺軸(Hypothalamic-pituitary-adrenal,HPA)和下丘腦-垂體-性腺軸(Hypothalamic-pituitary-gonadal,HPG)中相關(guān)激素水平的影響,并采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾和外周血淋巴細(xì)胞亞型、采用液相蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)血漿中細(xì)胞因子的含量。研究結(jié)果第一章六味地黃活性部位對(duì)學(xué)習(xí)記憶能力的作用研究一、LW活性部位對(duì)SAMP8小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的作用研究與SAMR1比較,SAMP8小鼠老化評(píng)分略有增高、腦重/體重比值及海馬/體重比值明顯下降,自主活動(dòng)能力、筑巢能力和主動(dòng)回避反應(yīng)能力不同程度降低。三個(gè)活性部位中,除LWD-b外,LWB-B和CA-30均對(duì)上述指標(biāo)的變化具有不同程度地改善作用,其中,CA-30對(duì)SAMP8小鼠的老化度、筑巢能力、自主活動(dòng)性、主動(dòng)回避反應(yīng)能力和空間學(xué)習(xí)記憶能力有明顯改善作用,LWB-B對(duì)腦萎縮、自主活動(dòng)性和主動(dòng)回避反應(yīng)能力具有明顯改善作用。對(duì)照藥LW和LW-AFC可顯著降低SAMP8小鼠老化度、改善腦萎縮及提高筑巢能力,而美金剛和多奈哌齊除可提高SAMP8小鼠的自主活動(dòng)度和主動(dòng)回避反應(yīng)能力外,對(duì)其它老化相關(guān)指標(biāo)及學(xué)習(xí)記憶相關(guān)指標(biāo)均無(wú)明顯改善作用。以上研究結(jié)果表明,CA-30在LW三個(gè)活性部位中對(duì)SAMP8老化及學(xué)習(xí)記憶能力的改善作用最為突出,值得進(jìn)一步進(jìn)行深入研究。二、CA-30及其活性成分STA對(duì)APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的作用研究選用APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠,深入研究了CA-30改善學(xué)習(xí)記憶能力的量效關(guān)系,并與組成CA-30的主要活性成分STA(0.45g/kg)的作用進(jìn)行了比較。結(jié)果表明,與野生型小鼠相比,APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠筑巢能力、短期物體記憶能力、主動(dòng)回避反應(yīng)能力和空間學(xué)習(xí)記憶能力均明顯降低。三個(gè)劑量的CA-30(0.48、0.96和1.92g/kg)以及STA對(duì)上述指標(biāo)的改變具有不同程度的改善作用,但未表現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系,CA-30的主要活性成分STA在0.45g/kg劑量時(shí)對(duì)APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的作用強(qiáng)度與中劑量CA-30(0.96g/kg)相當(dāng)。綜合上述結(jié)果可以看出,在LW活性部位中,LWB-B、CA-30及活性成分STA能不同程度地改善SAMP8小鼠或APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的老化狀態(tài)及學(xué)習(xí)記憶能力,但CA-30可能是LW發(fā)揮改善學(xué)習(xí)記憶能力作用的主要藥效組分,LWB-B與CA-30發(fā)揮作用的側(cè)重不同,可能起輔助作用,LW對(duì)AD模型小鼠老化程度和學(xué)習(xí)記憶能力的改善作用可能主要是CA-30和LWB-B共同作用的結(jié)果。第二章六味地黃活性部位改善學(xué)習(xí)記憶能力的作用機(jī)制研究一、LW活性部位對(duì)NIM網(wǎng)絡(luò)的調(diào)節(jié)作用研究大量研究表明,SAMP8小鼠隨X椓潯硐治鈾倮匣脫凹且涔δ苷習(xí)，

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