【摘要】：背景和目的肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一,已經(jīng)成為腫瘤死亡的主要原因,非小細胞肺癌(NSCLC)約占肺癌中發(fā)病率的85%,由于缺乏早期肺癌診斷技術(shù),多數(shù)患者在診斷時已處于中晚期,失去手術(shù)治療的最佳機會。晚期肺癌治療一般采取多學科綜合治療,其中化療是其主要的治療手段。在臨床治療中,以鉑類為基礎(chǔ)聯(lián)合第三代化療新藥的方案成為晚期NSCLC治療的標準化療方案,但其化療的有效率僅為30%~40%,絕大數(shù)患者仍難免于腫瘤局部復發(fā)及遠端轉(zhuǎn)移,5年總生存率僅為16.1%。腫瘤細胞對化療藥物產(chǎn)生抗性是影響化療療效的主要原因。早期研究發(fā)現(xiàn)導致順鉑耐藥的機制包括腫瘤細胞內(nèi)藥物濃度降低,藥物在細胞內(nèi)被降解代謝及DNA損傷修復增強,凋亡信號轉(zhuǎn)導通路的改變等。近年來,腫瘤微環(huán)境越來越受到研究者的重視,研究發(fā)現(xiàn)腫瘤微環(huán)境中多種細胞因子或趨化因子與腫瘤細胞化療耐藥相關(guān)。單核細胞趨化因子(MCP-1,也稱CCL2)是腫瘤微環(huán)境中存在比較廣泛的一類趨化因子,主要招募單核/巨噬細胞到腫瘤部位,與多種腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移以及不良預后密切相關(guān),但其在腫瘤細胞耐藥中的作用及其機制尚不清楚。因此,本研究的主要任務是探究CCL2在NSCLC順鉑耐藥中的作用及其可能的調(diào)控機制,為逆轉(zhuǎn)NSCLC耐藥提供理論依據(jù),為NSCLC耐藥的治療提供新的靶點。方法收集接受順鉑治療的非小細胞肺癌患者血清,其中順鉑敏感及順鉑耐藥的患者各15例。多因子試劑盒和ELISA篩選出差異明顯的趨化因子;收取2013年至2015年間在鄭州大學第一附屬醫(yī)院就診的非小細胞肺癌患者手術(shù)切除標本81例,熒光定量PCR檢測NSCLC癌組織、A549細胞、A549順鉑耐藥(A549/Cis)細胞中CCL2基因表達水平以及沉默CCL2表達后A549/Cis細胞干性相關(guān)基因Bim-1、c-Myc、Sox2、Oct-4表達水平;細胞毒性實驗(CCK-8)和細胞成球?qū)嶒灆z測抑制CCL2表達后,A549/Cis細胞干性以及耐藥性的改變;密度梯度離心法獲得的健康人外周血單個核細胞,采用磁珠分選技術(shù)純化出CD14+單核細胞,用A549細胞及A549/Cis細胞培養(yǎng)上清處理CD14+單核細胞,流式細胞技術(shù)檢測CD163+M2巨噬細胞的比例;Transwell實驗、血管形成實驗和CCK-8實驗分別檢測M2巨噬細胞對A549遷移、血管生成以及順鉑耐藥性的影響;PCR Array篩選出調(diào)控CCL2表達的轉(zhuǎn)錄因子,小干擾RNA驗證其對CCL2的調(diào)控作用以及對A549/Cis順鉑耐藥性的影響。結(jié)果1.與順鉑治療敏感患者相比,耐藥患者血清中CCL2分泌水平較高。2.A549/Cis細胞中CCL2表達水平高于A549細胞;NSCLC癌組織中CCL2的表達水平與患者分期呈正相關(guān),與預后呈負相關(guān);沉默CCL2表達后A549/Cis細胞干性相關(guān)基因Bim-1、c-Myc、Sox2、Oct-4表達水平降低。3.CCL2能夠增強NSCLC干性,增強NSCLC對順鉑耐受性。4.與A549細胞培養(yǎng)上清處理后的CD14+單核細胞相比,A549/Cis細胞培養(yǎng)上清處理后,CD163+M2巨噬細胞的比例明顯升高。5.A549/Cis極化的CD163+M2巨噬細胞能夠促進A549細胞的遷移及血管形成,增強A549細胞對順鉑的耐受性。6.與A549細胞相比,A549/Cis細胞中FOS、EGR1、STAT5A表達水平升高,MYF5、HAND2、HNF4A表達水平下降。7.沉默c-Fos后,A549/Cis細胞中CCL2基因表達水平降低,順鉑對A549/Cis細胞的殺傷能力增強。結(jié)論趨化因子CCL2通過促進腫瘤細胞干性獲得以及CD14+單核細胞到腫瘤部位的招募和極化,增強NSCLC對順鉑治療的耐受性。NSCLC中c-Fos調(diào)控CCL2的轉(zhuǎn)錄及表達,沉默c-Fos表達后降低CCL2 m RNA表達水平及蛋白分泌水平能夠逆轉(zhuǎn)NSCLC對順鉑產(chǎn)生的抗性,靶向c-Fos降低CCL2的表達可能為逆轉(zhuǎn)NSCLC順鉑耐藥提供新的治療手段。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

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