【摘要】：研究背景與目的:肺纖維化是一種長(zhǎng)期的、漸進(jìn)性的、致死性的肺病。是由多種原因引起的肺泡炎癥,肺泡持續(xù)性損傷并過(guò)度修復(fù),致使肺間質(zhì)纖維過(guò)度沉積形成局域性的瘢痕組織。這種過(guò)程是不可逆的并且進(jìn)展迅速,可由環(huán)境粉塵、藥物等致病,尚有一些自發(fā)性肺纖維化患者發(fā)病機(jī)制不明確。肺纖維化的治療手段有限,除肺移植外沒(méi)有根治的方法。從確診到死亡的生存中位數(shù)僅僅3-5年。作為孤兒藥物的吡非尼酮是唯一在說(shuō)明書(shū)上標(biāo)明肺纖維化適應(yīng)癥的藥品。但吡非尼酮存在較多的消化系統(tǒng)和神經(jīng)精神系統(tǒng)的不良反應(yīng)使其臨床使用受限。目前缺少肺纖維化治療藥物從另一方面說(shuō)明其藥物作用靶點(diǎn)尚未發(fā)現(xiàn),因此,發(fā)現(xiàn)療效更好,安全性更高的肺纖維化治療藥物和可能的藥物治療靶點(diǎn)一直以來(lái)是藥學(xué)科研人員的努力方向之一。肺纖維化以咳嗽咯痰,后期出現(xiàn)進(jìn)行性加重的呼吸困難等為主要臨床表現(xiàn),同時(shí)又具有慢性經(jīng)過(guò)或反復(fù)發(fā)作等特點(diǎn),故中醫(yī)學(xué)將其列入"肺痿"、"肺痹"等病癥中。現(xiàn)代中醫(yī)通過(guò)長(zhǎng)期研究認(rèn)為:痰熱血瘀,阻滯肺絡(luò),致肺失清肅,氣機(jī)閉塞為肺纖維化的主要病機(jī)。臨床治療采用清熱解毒、活血化瘀等法治療對(duì)肺纖維化有一定的預(yù)防和治療作用。中藥虎杖有著悠久的藥用歷史,《藥性論》、《本草拾遺》等中藥學(xué)經(jīng)典著作中都有其在藥學(xué)應(yīng)用方面的記載�；⒄�,為寥科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥根和根莖。味微苦,性微寒。歸肝、膽、肺經(jīng)。具有利濕退黃,清熱解毒,散瘀止痛,止咳化痰的功效。現(xiàn)代研究顯示虎杖具有抗肺纖維化作用�；⒄溶帐腔⒄劝l(fā)揮抗肺纖維化作用的主要成分之一。為進(jìn)一步明確虎杖苷抗肺纖維化的作用以及探討其可能的作用機(jī)制,發(fā)現(xiàn)潛在的藥物作用靶點(diǎn),本實(shí)驗(yàn)復(fù)制博來(lái)霉素誘導(dǎo)肺纖維化的小鼠模型,從動(dòng)物整體水平觀察虎杖苷的治療作用,觀察其對(duì)肺組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factors,TGF-β)的干預(yù)作用,從而為虎杖苷治療肺纖維化的應(yīng)用提供更多的證據(jù)。方法:1.復(fù)制博來(lái)霉素誘導(dǎo)肺纖維化的小鼠模型對(duì)比氣管內(nèi)滴注和腹腔注射博來(lái)霉素(B1eomycin,BLM)兩種制備肺纖維化模型的優(yōu)劣,確定最佳造模方式。健康雄性C57BL/6小鼠,7周齡,常規(guī)飼養(yǎng)7天,按體重隨機(jī)分成11組,每組5只。氣管內(nèi)滴注給藥方式6組,分別為3天組、7天組、14天組、21天組、28天組和空白對(duì)照組,氣管內(nèi)滴注博來(lái)霉素生理鹽水溶液,劑量相當(dāng)于博來(lái)霉素效價(jià)2 mg/kg體重,以實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之日為第0天,于給藥后第3天、第7天、第14天、第21天、第28天摘眼球采血后處死動(dòng)物,收集血清、肺泡灌洗液、全部肺組織�？瞻捉M同法滴注等體積生理鹽水。腹腔注射給藥方式5組,即7天組、14天組、21天組、28天組和空白對(duì)照組。以實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之日為第0天,腹腔注射0.1 mg/mL博來(lái)霉素生理鹽水溶液,劑量相當(dāng)于博來(lái)霉素效價(jià)1.5 mg/kg體重。隔天一次,持續(xù)兩周,共計(jì)8次,7天組共注射4次。分別于第7天、第14天、第21天、第28天處死動(dòng)物,摘眼球采血后處死動(dòng)物,收集血清、肺泡灌洗液、全部肺組織�？瞻讓�(duì)照組腹腔注射等體積生理鹽水。以肺組織病理學(xué)特征確定最佳造模條件。2.虎杖苷抗肺纖維化的作用根據(jù)上一步實(shí)驗(yàn)結(jié)論,采用氣管內(nèi)滴注博來(lái)霉素生理鹽水的方法復(fù)制小鼠肺纖維化模型。健康雄性C57BL/6小鼠,7-8周齡,適應(yīng)性飼養(yǎng)7天,按體重隨機(jī)分為5組,正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥吡非尼酮組、虎杖苷預(yù)防組、虎杖苷治療組,每組5只。正常對(duì)照組氣管內(nèi)滴注滅菌生理鹽水,其他組按2 mg/kg體重劑量氣管內(nèi)滴注無(wú)菌博來(lái)霉素生理鹽水溶液。.陽(yáng)性藥對(duì)照組、虎杖苷預(yù)防組(171 mg/kg體重)造模后第2天開(kāi)始灌胃給藥至第28天,虎杖苷治療組(171 mg/kg體重)造模第7天開(kāi)始灌胃給藥,空白對(duì)照組和模型組造模后第2天開(kāi)始灌胃等體積純水至第28天。以Masson染色法改變程度判斷虎杖苷對(duì)肺纖維化的保護(hù)作用;以羥脯氨酸含量指示在肺纖維化過(guò)程中膠原的變化;肺泡灌洗液中炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)推測(cè)肺纖維化過(guò)程中炎性反應(yīng)的變化;用小鼠TGF-β蛋白芯片檢測(cè)小鼠肺組織中TGF-β1/2/3的含量。結(jié)果:1.Masson染色顯示,博來(lái)霉素氣管內(nèi)滴注法在造模后第7d即出現(xiàn)炎性細(xì)胞增多,散發(fā)性膠原纖維增多;第14天出現(xiàn)小面積膠原纖維沉積灶;第21天出現(xiàn)多處斑塊狀膠原纖維沉積灶,面積較大;第28天的纖維化程度與第21天接近,略有加重;從第7天致第28天可見(jiàn)明顯的肺纖維化漸進(jìn)過(guò)程、腹腔注射組造模后第7天散發(fā)性出現(xiàn)巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞增多;第14天肺間質(zhì)出現(xiàn)纖維膠原增多跡象;第21天肺間質(zhì)散發(fā)性出現(xiàn)少量膠原纖維增多;第28天與第21天相似,未見(jiàn)斑塊狀膠原纖維沉積灶。2.與空白對(duì)照組的肺組織相比,模型對(duì)照組的肺組織結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重,呈嚴(yán)重肺纖維化病理表現(xiàn)。虎杖苷預(yù)防組肺纖維化程度明顯減輕,表現(xiàn)為散發(fā)性小面積膠原纖維沉積。與預(yù)防組相比虎杖苷治療組的肺纖維化改善程度弱于預(yù)防組,纖維化面積大于預(yù)防組,與模型對(duì)照組比較具有改善作用。陽(yáng)性對(duì)照藥物吡非尼酮減輕了肺纖維化程度,改善作用與虎杖苷治療組無(wú)明顯差別。3.羥脯氨酸含量測(cè)定和肺泡灌洗液巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果均顯示該項(xiàng)結(jié)果與肺纖維化程度無(wú)相關(guān)性(P0.05)。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)表明博來(lái)霉素氣管內(nèi)滴注可誘發(fā)明顯的肺纖維化,且與臨床肺纖維化發(fā)病特征相似。虎杖苷能明顯減輕小鼠肺纖維化的程度,對(duì)肺纖維化具有潛在的治療作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中央民族大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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4 楊s，

本文編號(hào)：2301971