【摘要】：目的:肺癌(Lung cancer)是對(duì)人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一,近50年來其發(fā)病率和死亡率均明顯增高,我國(guó)是世界上肺癌高發(fā)地區(qū)之一。盡管如此其發(fā)病機(jī)制尚不完全明確,目前認(rèn)為其病因大概可分為:煙草暴露、職業(yè)環(huán)境因素、大氣污染,遺傳因素等。隨著對(duì)這一疾病的逐步深入了解,基于基因分子水平的研究越來越受到人們重視。一些非小細(xì)胞肺癌預(yù)后相關(guān)基因采用基因芯片技術(shù)高通量篩選,來預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者的總生存期,為非小細(xì)胞肺癌個(gè)體化治療提供依據(jù),因此基因的相關(guān)性檢測(cè)逐漸被重視起來。相關(guān)研究表明,在眾多肺癌相關(guān)性基因中NF1,HMMR在非小細(xì)胞肺癌患者機(jī)體中有著不同的表達(dá),本文擬通過實(shí)驗(yàn)室HRM實(shí)驗(yàn)操作來檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者血液標(biāo)本微量核酸提取物和組織切片標(biāo)本中核酸提取物質(zhì)中NF1基因和HMMR基因的表達(dá),探討通過該實(shí)驗(yàn)方法對(duì)于在非小細(xì)胞肺癌患者血液標(biāo)本中與其肺癌組織蠟塊中定性檢測(cè)NF1、HMMR兩種基因的可行性。方法:1在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院胸一科2010年9月至2015年9月在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院胸外科住院手術(shù)治療的204例非小細(xì)胞肺癌患者中隨機(jī)抽取30例肺癌患者血液標(biāo)本作為血液標(biāo)本組及18例患者術(shù)后肺癌組織蠟塊標(biāo)本作為組織蠟塊組,所有患者術(shù)前均未經(jīng)化療或放射治療,除外其它癌癥患者及合并某些和血管增生相關(guān)的疾病如子宮內(nèi)膜異位癥;呼吸窘迫綜合征;慢性心衰;慢性呼吸衰竭,糖尿病等。均為漢族以排除種族間可能存在的基因差異。且無明確致癌因素長(zhǎng)期接觸史。腫瘤的病理類型均經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院手術(shù)切除標(biāo)本的病理報(bào)告確認(rèn)樣本。2采用實(shí)驗(yàn)室人血MINI BLOOD DNA技術(shù)提取標(biāo)本血液中微量核酸物質(zhì)作為PCR反應(yīng)模板并通過HRM實(shí)驗(yàn)操作步驟檢測(cè)其中的產(chǎn)物的表達(dá),通過PCR擴(kuò)增技術(shù)定性分析其產(chǎn)物的表達(dá)結(jié)果,以已知的兩種基因序列做比對(duì),分析患者血液標(biāo)本組檢測(cè)結(jié)果。3非小細(xì)胞肺癌組織切片組中同樣采用hmr實(shí)驗(yàn)室操作以組織中的核酸提取物作為模板,檢測(cè)其反應(yīng)產(chǎn)物中表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果,比對(duì)已知的兩種基因序列,判斷結(jié)果中nf1基因和hmmr基因的表達(dá)。4兩組的產(chǎn)物表達(dá)結(jié)果采用spss19.0軟件并用fisher確切概率法分析探討用該種實(shí)驗(yàn)方法從非小細(xì)胞肺癌患者血液與癌組織中提取微量核酸物質(zhì)檢測(cè)兩種基因表達(dá)的可靠性。結(jié)果:1實(shí)驗(yàn)室方法檢測(cè)nf1基因與hmmr基因在非小細(xì)胞肺癌患者血液中的表達(dá),由于從血液標(biāo)本中獲取的純化dna轉(zhuǎn)錄到rna做表達(dá),rna質(zhì)量較差,結(jié)果無意義。無一例檢測(cè)結(jié)果陽性,建議保存組織dna或組織蠟塊;2實(shí)驗(yàn)室方法檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌蠟塊組織切片標(biāo)本中nf1和hmmr基因的表達(dá)具有可行性,組織蠟塊中檢測(cè)基因表達(dá)陽性率為44.4%。其中nf1基因表達(dá)陽性率33.3%(6/18),hmmr基因陽性表達(dá)率38.9%(7/18)。通過實(shí)驗(yàn)方法對(duì)血液標(biāo)本與組織蠟塊標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果比較,二者有顯著差異(p0.05);3NF1基因在非小細(xì)胞肺癌患者組織中陽性表達(dá)與患者肺癌臨床分期(腫瘤大小,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等)具有一定的相關(guān)性(p0.05)。結(jié)論:1本文通過在實(shí)驗(yàn)室hrm實(shí)驗(yàn)操作提取非小細(xì)胞肺癌患者血液中的微核酸物質(zhì)檢測(cè)nf1基因、hmmr的基因表達(dá)的可行性較差,陽性檢出率為0,因由血液標(biāo)本中dna做轉(zhuǎn)錄rna表達(dá)時(shí)不能被有效的檢測(cè),與其血液中核酸物質(zhì)含量較少有密切關(guān)系。2通過該實(shí)驗(yàn)室方法對(duì)非小細(xì)胞肺癌組織切片組提取基因檢測(cè)nf1基因與hmmr基因具有一定的可行性。通過組織蠟塊與血液標(biāo)本兩組比較,檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者癌組織更適合作為檢測(cè)兩種基因表達(dá)的途徑。3通過對(duì)小樣本的結(jié)果結(jié)合患者的基本資料分析,nf1的高表達(dá)對(duì)患者預(yù)后具有一定的積極的作用。這一結(jié)果與nf1基因作為保護(hù)性基因這一結(jié)論相吻合。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2283365