【摘要】：目的:探討補腎益肝活血方對大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎的療效,以及通過病理學切片、ELISA、免疫組化評估補腎益肝活血方對關(guān)節(jié)軟骨的影響。方法:首先把54只標準SD實驗大鼠隨機抽出9只分為空白組,剩下的45只均予以右后膝關(guān)節(jié)注射木瓜蛋白酶稀釋液造模,造模完成后隨機抽取造模組5只、空白組1只大鼠并處死,檢測并評估造模成功后,再次將造成的KOA模型大鼠隨機分為5組,分別設(shè)置為中藥(補腎益肝活血方)高劑量組、中劑量組、低劑量組、模型組、西藥雙醋瑞因組(陽性對照組),每組8只。按照預(yù)先設(shè)計好的實驗方法進行藥物干預(yù),藥物干預(yù)期間觀察并記錄各組實驗大鼠造模關(guān)節(jié)的局部改變及大鼠行為的變化情況。給藥4周后,腹主動脈取血并采取脫頸法處死各組實驗大鼠,取材后進行軟骨組織切片HE染色觀察、相關(guān)細胞因子檢測、軟骨組織免疫組化檢測等:①參照文獻標準對軟骨組織表面進行肉眼觀察及評分:實驗大鼠經(jīng)處死后,切開模型側(cè)(右后)膝關(guān)節(jié)腔,請三名專業(yè)人員遵循雙盲原則根據(jù)軟骨的變化進行評分;②取軟骨組織切片并HE染色,光鏡下觀察軟骨組織的病理改變,按照Mankin's評分分別對其評分;③腹主動脈取血后,分離出血清,ELISA法測定各組實驗大鼠血清中IL-lβ、TNF-α的含量;④取造模關(guān)節(jié)軟骨組織作成切片,采取免疫組化法檢測其中MMP-3、EFEMP-1的表達情況。結(jié)果:①行造模術(shù)前、后及藥物干預(yù)后所造模膝關(guān)節(jié)局部的表現(xiàn)及變化：實驗開始前所有實驗大鼠膝關(guān)節(jié)外形及活動均正常,造模完成后除空白組外其余各組大鼠均表現(xiàn)為一定程度的造模關(guān)節(jié)活動受限、大鼠跛行、局部紅腫等KOA表現(xiàn),行藥物干預(yù)結(jié)束后空白組大鼠膝關(guān)節(jié)較前變化不明顯,給藥治療的各組大鼠造模膝關(guān)節(jié)均有一定程度的KOA表現(xiàn),但均較模型組大鼠程度減輕。②通過肉眼觀察,對大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨評分結(jié)果:正常組的肉眼評分要低于模型組及各藥物干預(yù)組,差異(P＜0.05),有統(tǒng)計學意義;補腎益肝活血方高劑量組、中劑量組、低劑量組以及陽性對照組肉眼評分相比于模型組均較低,差異(P0.05),有統(tǒng)計學意義;補腎益肝活血方高劑量組、中劑量組以及陽性對照組肉眼評分均較補腎益肝活血方低劑量組低,差異(P0.05),有統(tǒng)計學意義;補腎益肝活血方高劑量組較陽性對照組差異不明顯(P0.05),無統(tǒng)計學意義。③光鏡切片后各組Mankin's評分結(jié)果:藥物治療各組以及模型組Mankin's評分均高于正常組,差異(P0.05),有統(tǒng)計學意義;補腎益肝活血方高劑量組、中劑量組以及陽性對照組Mankin's評分均低于模型組,差異(P＜0.05),有統(tǒng)計學意義;補腎益肝活血方高劑量組、中劑量組、陽性對照組Mankin's評分低于補腎益肝活血方低劑量組,差異(P0.05),有統(tǒng)計學意義;補腎益肝活血方高劑量組Mankin's評分較陽性對照組差異不大(P0.05),無明顯統(tǒng)計學意義。④血清IL-1β、TNF-α指標各組之間的比較:模型組、各藥物治療組血清中IL-lβ、TNF-α含量均高于正常組,差異(P＜0.05),有統(tǒng)計學意義;模型組大鼠血清中IL-lβ、TNF-αα含量均較各藥物治療組高,差異(P＜0.05),有統(tǒng)計學意義;補腎益肝活血方高劑量組、中劑量組大鼠血清中IL-1β、TNF-α含量較補腎益肝活血方低劑量組低,差異(P0.05),有統(tǒng)計學意義;陽性對照組大鼠血清中IL-lβ、TNF-α含量低于補腎益肝活血方中、高劑量組,差異(P0.05),有統(tǒng)計學意義。⑤免疫組化檢測軟骨組織中MMP-3、EFEMP-1的結(jié)果顯示:在各組中,MMP-3、EFEMP-1均有不同程度陽性表達;模型組及各藥物干預(yù)組MMP-3、EFEMP-1陽性表達均高于空白組,差異(P0.05),有統(tǒng)計學意義;MMP-3的陽性表達在補腎益肝活血方低、中、高劑量組及陽性對照組要低于模型組,差異(P0.05),有統(tǒng)計學意義;EFEMP-1的陽性表達在補腎益肝活血方低、中、高劑量組及陽性對照組要高于模型組,差異(P0.05),有統(tǒng)計學意義;補腎益肝活血中、高劑量組及陽性對照組MMP-3陽性表達低于補腎益肝活血方低劑量組,差異(P0.05),有統(tǒng)計學意義;補腎益肝活血中、高劑量組及陽性對照組EFEMP-1陽性表達高于補腎益肝活血方低劑量組,差異(P0.05),有統(tǒng)計學意義;補腎益肝活血方高劑量組和陽性對照組中MMP-3、EFEMP-1陽性表達差異(P0.05),無統(tǒng)計學意義。結(jié)論:① 運用關(guān)節(jié)腔注射木瓜蛋白酶方法能成功誘導(dǎo)大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎模型,穩(wěn)定性好。②各藥物治療組及模型組中模型側(cè)膝關(guān)節(jié)軟骨中MMP-3、EFEMP-1的陽性表達量均較正常組有變化,證明MMP-3、EFEMP-1與KOA的發(fā)生和發(fā)展有緊密關(guān)系。③補腎益肝活血方延緩軟骨的退變,從而在一定程度上延緩了大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎的病情,故補腎益肝活血方對KOA有明確的治療效果。④補腎益肝活血方延緩軟骨退變、有效緩解KOA病情的機制之一可能為分別下調(diào)和上調(diào)關(guān)節(jié)軟骨中MMP-3、EFEMP-1的表達。⑤將補腎益肝活血方高劑量組與西藥組(陽性對照組)中大鼠活動狀態(tài)及軟骨病理學切片觀察結(jié)果相比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);在降低炎癥因子方面,陽性對照組較補腎益肝活血方高、中劑量組顯效稍占優(yōu),故得出高劑量補腎益肝活血方能有效治療KOA,與雙醋瑞因效果相當。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：2277015