【摘要】：目的:探討莪術(shù)油對阿霉素誘導(dǎo)耐藥的人甲狀腺未分化癌細(xì)胞株HTh74Rdox增殖和耐藥性的影響及機(jī)制。方法:用不同濃度莪術(shù)油(0、60、90、120mg/L)處理HTh74Rdox24小時后,于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài);四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測莪術(shù)油對HTh74Rdox細(xì)胞增殖的抑制作用;細(xì)胞流式術(shù)(Flow cytomety,FCM)檢測HTh74Rdox細(xì)胞周期變化和凋亡;蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot,WB)檢測抑凋亡蛋白(Bcl-2)和促凋亡蛋白(Bax)的表達(dá);熒光定量(Quantitative polymerase chain reaction,qPCR)檢測多藥耐藥性基因 1(Multi-drug resistance gene1,MDR1)和三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白 G2(ATP-binding cassette superfamily G member 2,ABCG2)信使核糖核酸(Messenger RNA,mRNA)的變化。結(jié)果:用不同濃度莪術(shù)油(0、60、90、120mg/L)處理HTh74Rdox24小時后,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)可見,從莪術(shù)油濃度為60mg/L起有部分細(xì)胞脫離培養(yǎng)皿;隨著莪術(shù)油處理濃度的增加,細(xì)胞密度系數(shù)降低,貼壁細(xì)胞數(shù)量減少,細(xì)胞形狀由梭形變?yōu)樗槠㈩w粒,待莪術(shù)油濃度增加至120mg/L,細(xì)胞幾乎全部脫離培養(yǎng)皿,細(xì)胞形狀完全變?yōu)椴灰?guī)則形狀,死亡的細(xì)胞凝結(jié)成團(tuán),細(xì)胞液可見渾濁。MTT結(jié)果顯示:隨著莪術(shù)油刺激濃度的升高,莪術(shù)油抑制HTh74Rdox細(xì)胞增殖的作用越來越強,具有時間依賴性(P0.05)。流式結(jié)果顯示:莪術(shù)油可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,細(xì)胞表現(xiàn)為早期凋亡(P0.01);Western Blot結(jié)果顯示:莪術(shù)油可以增加Bax蛋白表達(dá),可以抑制Bcl-2蛋白表達(dá),使Bax/Bcl-2比值增加(P0.05);qPCR:莪術(shù)油可使MDR1和ABCG2的mRNA表達(dá)減少。用單藥莪術(shù)油、單藥阿霉素或聯(lián)合用藥刺激HTh74Rdox細(xì)胞24小時后,MTT法分析示,2.0mg/L阿霉素+90ml/L莪術(shù)油組與2.0mg/L阿霉素+0ml/L莪術(shù)油組比較,均具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),提示阿霉素與莪術(shù)油聯(lián)用后,可增強阿霉素的細(xì)胞毒作用;當(dāng)阿霉素用藥濃度減少至1.0mg/L的時候,加入低濃度(45ml/L)莪術(shù)油后,與1.5mg/L阿霉素+45mg/L莪術(shù)油組比較,其細(xì)胞毒作用沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),提示加入低濃度莪術(shù)油可減少阿霉素的用量,由此可見,莪術(shù)油對阿霉素具有明顯的聯(lián)合協(xié)同作用。結(jié)論:莪術(shù)油可以抑制HTh74Rdox細(xì)胞的生長、誘導(dǎo)其凋亡并改善其耐藥作用,其機(jī)制可能分別與提高Bax/Bcl-2比值和降低MDR1、ABCG2 mRNA表達(dá)有關(guān)。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect and mechanism of zedoary turmeric oil on the proliferation and drug resistance of adriamycin-resistant human thyroid undifferentiated carcinoma cell line HTh74Rdox. Methods: HTh74Rdox24 cells were treated with different concentrations of Zedoary turmeric oil (060,90120mg / L) for hours, and the cell morphology was observed under inverted microscope, and the inhibitory effect of Zedoary turmeric oil on proliferation of HTh74Rdox cells was detected by (MTT) method. Cell cycle changes and apoptosis of HTh74Rdox cells were detected by flow cytometry (Flow cytomety,FCM), and the expression of Bcl-2 and (Bax) were detected by Western blot (Western Blot,WB). The changes of multidrug resistance gene 1 (Multi-drug resistance gene1,MDR1) and adenosine triphosphate binding cassette transporter G2 (ATP-binding cassette superfamily G member 2 ABCG2) messenger ribonucleic acid (Messenger RNA,mRNA) were detected by fluorescence quantitative (Quantitative polymerase chain reaction,qPCR. Results: after treated with different concentrations of Zedoary turmeric oil (060 ~ 90120mg / L) for HTh74Rdox24 hours, the morphology of cells was observed under inverted microscope. Some cells were separated from petri dish from the concentration of 60mg/L, and the cell density coefficient decreased with the increase of the concentration of zedoary turmeric oil. The number of adherent cells is reduced, the shape of cells is changed from fusiform to fragments, particles, when the concentration of zedoary turmeric oil increases to 120 mg / L, the cells are almost completely detached from the petri dish, the shape of the cells becomes completely irregular, and the dead cells coagulate into clusters. The results showed that with the increase of the concentration of zedoary turmeric oil the inhibitory effect of zedoary turbid oil on the proliferation of HTh74Rdox cells was stronger and stronger in a time dependent manner (P0.05). The results of flow cytometry showed that Zedoary turmeric oil could induce cell apoptosis. The results of early apoptosis (P0.01) and Western Blot showed that curcuma oil could increase the expression of Bax protein and inhibit the expression of Bcl-2 protein. The ratio of Bax/Bcl-2 was increased (P0.05) QPCR: zedoary turmeric oil decreased the mRNA expression of MDR1 and ABCG2. Compared with 2.0mg/L adriamycin 0ml/L turmeric oil group and 2.0mg/L adriamycin 0ml/L turmeric oil group, HTh74Rdox cells were stimulated with single drug, adriamycin or adriamycin for 24 hours. The results showed that doxorubicin and zedoary oil combined with doxorubicin were significantly different (P0.05). When the concentration of doxorubicin was reduced to 1.0mg/L, the low concentration (45ml/L) of zedoary turmeric oil was added, which was compared with 1.5mg/L adriamycin 45mg/L zedoary oil group. Its cytotoxic effect was not statistically significant (P0.05), suggesting that adding low concentration of zedoary oil can reduce the amount of Adriamycin, it can be seen that zedoary oil has a significant synergistic effect on doxorubicin. Conclusion: Zedoary turmeric oil can inhibit the growth of HTh74Rdox cells, induce its apoptosis and improve its drug resistance. The mechanism may be related to the increase of Bax/Bcl-2 ratio and the decrease of MDR1,ABCG2 mRNA expression.
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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本文編號：2245932