本文選題：ACE + ACE2��； 參考：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:采用傳統(tǒng)藥理學(xué)、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子生物學(xué)等評(píng)價(jià)方法,從收縮壓、心率、宏觀表征、行為學(xué)、微觀理化指標(biāo)和病理診斷等多個(gè)方面全方位綜合評(píng)價(jià)五味降壓散的藥效;在確定五味降壓散降壓藥效的基礎(chǔ)上,以目前與高血壓發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)的靶點(diǎn)ACE、ACE2為切入點(diǎn),同時(shí)結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)的藥物作用靶點(diǎn)AR、ER,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)和蛋白免疫印跡(Western blot)技術(shù),初步探索五味降壓散的降壓機(jī)制,為五味降壓散抗高血壓病提供科學(xué)依據(jù),為中藥復(fù)方抗高血壓病的藥效機(jī)制研究提供新的思路和方法。方法:1.動(dòng)物藥效學(xué)評(píng)價(jià):采用血壓、心率、體重、宏觀表征、微觀理化指標(biāo)及病理診斷為依據(jù),選擇14周齡的SHR大鼠,根據(jù)初始血壓及體重分組,隨機(jī)分為模型組,五味組,三草組,牛黃組,纈沙坦組,WKY為正常對(duì)照組,連續(xù)給藥10周;運(yùn)用BP-2010A大小鼠尾動(dòng)脈智能無(wú)創(chuàng)血壓計(jì)測(cè)量大鼠收縮壓和心率,每周定時(shí)監(jiān)測(cè)2次。密切觀察給藥后SHR大鼠的基本情況變化,同時(shí)進(jìn)行每周一次的體重測(cè)量、易激惹程度評(píng)分、旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間測(cè)試等;實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,腹主動(dòng)脈取血,分離和制備血清,做生化檢測(cè);研究五味降壓散對(duì)大鼠血液相關(guān)指標(biāo)的影響;進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物靶器官的病理檢查診斷,將取材所得心、腎組織浸蠟包埋,切片,HE染色,中性樹膠封片,顯微鏡下觀察、照相。觀察大鼠組織的病理形態(tài)學(xué)改變情況,探索五味降壓散對(duì)心臟和腎臟的病理改變,以綜合評(píng)價(jià)五味降壓散的降壓效果。2.五味降壓散降壓機(jī)制初步探討:運(yùn)用分子生物學(xué)和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)評(píng)價(jià)方法,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)和Western blot技術(shù)研究SHR大鼠心臟和腎臟ACE、ACE2基因和蛋白的表達(dá)水平;同時(shí)檢測(cè)心臟和腎臟中AR、ERα蛋白的表達(dá)水平,以驗(yàn)證課題組前期網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性,即五味降壓散是否通過(guò)調(diào)節(jié)AR、ERα而降壓。結(jié)果:1.五味降壓散的藥效學(xué):(1)對(duì)收縮壓的影響:給藥10周時(shí):模型血壓持續(xù)上升;五味組在給藥2周時(shí)起效明顯,血壓明顯下降,到4周后血壓維持平穩(wěn)低水平;三草組在給藥0-4周內(nèi)起效,4-8周血壓回升,8周后血壓呈下降趨勢(shì);牛黃組在給藥0-1周,4-8周內(nèi)有效;纈沙坦組持續(xù)降壓。(2)對(duì)心率的影響:五味組與模型組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,模型組心率明顯升高,而五味組給藥后心率維持穩(wěn)定狀態(tài)。(3)對(duì)體重的影響:模型組體重增加迅速,五味組體重增加緩慢且幅度最小。(4)對(duì)行為學(xué)的影響:①易激惹程度:五味降壓散給藥5周后易激惹程度趨于穩(wěn)定;②旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間:五味組在給藥2周后旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間增長(zhǎng),并一直趨于穩(wěn)定,這與血壓的降低趨勢(shì)是一致的。(5)對(duì)一般表征的影響:五味降壓散組大鼠的扎堆攀打、抓取尖叫、弓背、狂躁、固定困難、小便深黃、大便干硬且量少等癥狀跟隨血壓波動(dòng)而變化:血壓升高,表征明顯加重。血壓下降,諸癥減弱,如各自爬臥減少、抓取尖叫程度減輕甚至無(wú)抓取無(wú)反抗、小便清長(zhǎng)、大便量逐漸增多、大便稀軟等;而模型組則是諸癥較給藥前日益加重,差異明顯。(6)對(duì)血常規(guī)的影響:與模型組比較,LYM%上升、MID下降、MID%下降、RBC上升、HCT上升、MCH下降、MCHC下降;差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。(7)對(duì)血脂的影響:與模型組比較:五味組的總膽固醇CHOL、低密度脂蛋白膽固醇LDL-C、甘油三酯TG均降低,差異顯著(P0.05)。(8)對(duì)心臟、腎臟病理改變的影響:模型組大鼠心肌血管內(nèi)瘀血,小動(dòng)脈肌層明顯增厚,細(xì)胞大小不均勻、不規(guī)則,細(xì)胞有空泡變性,血腔變窄。腎臟腎小球有增大,瘀血明顯,部分基底膜輕度增厚,包氏囊有滲出,曲管腫脹,有網(wǎng)眼樣改變,間質(zhì)有炎癥浸潤(rùn)。而五味組大鼠心、腎病變與模型組臟器的損害比較相對(duì)的減輕。2.五味降壓散的作用機(jī)制:(1)對(duì)大鼠心臟和腎臟ACE、ACE2基因表達(dá)的影響:與模型組相比,五味組能下調(diào)SHR大鼠心臟ACE基因表達(dá)水平,上調(diào)ACE2基因表達(dá)水平,P0.01。五味組心臟ACE2和ACEmRNA與正常組比較差別不明顯(P0.05)。正常組、模型組、五味組.和纈沙坦組四組的腎臟ACEmRNA表達(dá)差別不大(P0.05),說(shuō)明五味降壓散對(duì)腎臟ACE mRNA無(wú)明顯影響。五味組的SHR大鼠ACE2基因表達(dá)水平與正常組比較差距不大(P0.05);但與模型組比,五味組能上調(diào)腎臟ACE2基因水平,P0.05。(2)對(duì)大鼠心臟和腎臟ACE、ACE2和ERα、AR蛋白表達(dá)的影響:①五味組心臟ACE、ACE2蛋白表達(dá)與正常組相別,差別不大(P0.05);與模型組相比,五味降壓散能上調(diào)心臟ACE2蛋白(P0.05),與上調(diào)心臟ACE2mRNA結(jié)果一致。②與模型組相比,五味組的心臟和腎臟AR、ERα蛋白表達(dá)差異不大(P0.05)。結(jié)論:1.五味降壓散的藥效學(xué)特點(diǎn):(1)降壓平穩(wěn)持續(xù),后期更優(yōu):五味降壓散起效較慢,但其穩(wěn)壓優(yōu)勢(shì)在后期比較明顯,且后期優(yōu)于三草降壓湯和牛黃降壓丸。五味降壓散降壓持續(xù)、平穩(wěn)、波動(dòng)幅度小。而模型組血壓持續(xù)上升,五味組降壓作用與模型組相比,差別顯著(P0.05)。(2)穩(wěn)定心率:模型組心率明顯升高,而五味組給藥后心率維持穩(wěn)定狀態(tài)。五味降壓散給藥2周后,心率和血壓均下降并保持穩(wěn)定,且變化趨勢(shì)呈現(xiàn)一致性。(3)減緩體重增長(zhǎng):模型組體重增加迅速,五味組體重增加緩慢且幅度最小。(4)鎮(zhèn)靜:五味降壓散組較模型組易激惹程度低且平穩(wěn),波動(dòng)性小;五味降壓散組旋轉(zhuǎn)耐受時(shí)間增長(zhǎng),并一直趨于穩(wěn)定,較模型組變化幅度小。二者變化趨勢(shì)與降壓趨勢(shì)基本一致。(5)改善表征:五味降壓散在降壓的同時(shí)能夠改善SHR大鼠的高血壓伴隨癥狀,如抓取反抗、尖叫、固定困難等隨血壓的下降而減弱,大便量逐漸增多,質(zhì)地從硬到逐漸變軟,小便少而黃逐漸變?yōu)榱慷嗌?而模型組則隨血壓的升高而諸癥加重。(6)降脂明顯:五味降壓散具有明顯降脂的作用,能改降低血脂相關(guān)指標(biāo)CHOL、TG、LDL-C的水平。(7)保護(hù)靶器官:五味降壓散能夠改善心腎兩臟的病理?yè)p害,能發(fā)揮一定程度的保護(hù)靶器官功能。2.五味降壓散可能的降壓機(jī)制:(1)調(diào)控心臟RAAS而降壓:五味降壓散能夠降低SHR大鼠心臟ACE mRNA的水平,抑制心臟ACE的活性;同時(shí)能提高心臟ACE2基因和蛋白的含量。(2)未見對(duì)AR、ERα蛋白的表達(dá)的影響。
[Abstract]:Objective : To evaluate the effects of five kinds of blood pressure - lowering powder on blood pressure , heart rate , macroscopic representation , behavior , micro - physical and chemical indexes and pathological diagnosis by using traditional pharmacology , network pharmacology and molecular biology . The changes of ACE , ACE2 gene and protein in heart and kidney of SHR were studied by means of real - time fluorescence quantitative PCR and Western blot . ( 4 ) The effects on behavior were as follows : ( 1 ) the degree of irritability is more stable after 5 weeks of administration of five kinds of blood pressure - lowering powder ; ( 2 ) the effect of increasing blood pressure is consistent with the decreasing trend of blood pressure . ( 5 ) The effects of the symptoms are as follows : the increase of the number of the patients , the decrease of MID , the decrease of MID % , the increase of RBC , the increase of HCT , the decrease of MCH and the decrease of MCHCs . Compared with the model group , the expression level of ACE2 gene was not significant ( P0.05 ) . Compared with the model group , the expression level of ACE2 gene was not significant ( P0.05 ) , but compared with the model group , the expression level of ACE2 gene in SHR was not significantly different from that of the normal group ( P0.05 ) . The results showed that : ( 1 ) Compared with the model group , the heart rate and the blood pressure of the five groups were significantly higher than those in the model group ( P0.05 ) . ( 6 ) To protect target organs : Five kinds of blood pressure - lowering powder can improve the level of cardiac ACE mRNA in heart and kidney , inhibit ACE activity in heart and kidney , and increase the content of ACE2 gene and protein .
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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4 蔣，

本文編號(hào)：2014052