本文選題：黃芩素 + 代謝物��； 參考：《吉林大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：黃芩素是由中藥黃芩提取出的有效成分之一,為黃酮類化合物,具有廣泛的藥理作用,具有抗炎,抗氧化,神經(jīng)保護(hù),抗過敏細(xì)菌,抗病毒感染,抗心血管疾病,抗癌等多種藥理作用。黃芩素在體內(nèi)發(fā)生廣泛的代謝作用,產(chǎn)生多種代謝產(chǎn)物,目前對黃芩素與一種代謝物黃芩苷的測定及藥代動力學(xué)研究比較多,對其他代謝物鑒定、定量分析研究比較少。本文主要目的是對黃芩素在人體內(nèi)代謝產(chǎn)物進(jìn)行鑒定,建立同時測定黃芩素與七種代謝物的LC-MS/MS分析方法,并將分析方法進(jìn)行實(shí)際應(yīng)用研究。研究方案:使用高分辨質(zhì)譜儀,分別對服用黃芩素片前和服用后的血漿樣品進(jìn)行測定,對比分析兩者色譜圖,結(jié)合代謝分析軟件對代謝產(chǎn)物初步篩選,再根據(jù)黃芩素結(jié)構(gòu),裂解規(guī)律,二級碎片等信息對代謝產(chǎn)物進(jìn)行推測鑒定,最后合成可能代謝產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)品,并對代謝產(chǎn)物進(jìn)行色譜分離,根據(jù)保留時間區(qū)分鑒定同分異構(gòu)體。采用兩套獨(dú)立液相系統(tǒng),黃芩素采用液液萃取方法提取,使用乙腈-0.5%甲酸溶液作為流動相,SUPELCO Ascentis-C18(50 mm×4.6 mm I.D.,5μm粒徑)色譜柱對其進(jìn)行分離。七種代謝物采用沉淀蛋白方法提取,使用乙腈-10 mM醋酸銨0.1%甲酸溶液作為流動相,Agilent HC-C18(150 mm×4.6 mm I.D.,5μm粒徑)對代謝物進(jìn)行分離。流速為1.2 mL/min,梯度洗脫進(jìn)行分析。使用電噴霧電離源,正離子掃描模式,多反應(yīng)監(jiān)控模式進(jìn)行檢測。黃芩素的定量分析離子反應(yīng)為m/z 271.0→m/z 122.8,內(nèi)標(biāo)柯因?yàn)閙/z 255.0→m/z 153.0,代謝物6BG、7BG為m/z 447.1→m/z 271.1,6BS、7BS為m/z 351.0→m/z 271.0,BGG為m/z 623.2→m/z 271.0,6-MeBG為m/z 461.1→m/z 284.9,BGGlu為m/z 609.1→m/z 271.1,內(nèi)標(biāo)木犀草素為m/z 287.0→m/z 135.0。黃芩素的線性范圍為1-500 ng/m L,定量下限為1 ng/m L。七種代謝物:6BG選定1-300 ng/m L為其定量的線性范圍,選定1 ng/m L為其定量下限;7BG選定1-500 ng/m L為其定量的線性范圍,選定1ng/m L為其定量下限;6BS選定10-500 ng/mL為其定量的線性范圍,10 ng/m L為其定量下限;7BS選定10-3000 ng/mL為其定量的線性范圍,選定10 ng/m L為其定量下限;BGG選定50-5000 ng/m L為其線性范圍,選定50 ng/m L為其定量下限;6-MeBG的線性范圍為1-200 ng/m L,定量下限為1 ng/mL;BGGlu的線性范圍為1-300 ng/mL,定量下限為1 ng/m L。對方法的專屬性,線性范圍,靈敏度,準(zhǔn)確度和精密度,基質(zhì)效應(yīng),提取回收率,樣品在多種條件下的穩(wěn)定性進(jìn)行了驗(yàn)證,以檢驗(yàn)分析方法的可靠性。應(yīng)用建立的分析方法,對口服200mg黃芩素片的志愿者血漿中的黃芩素及七種代謝物進(jìn)行了分析測定,并對相關(guān)藥代參數(shù)進(jìn)行了計(jì)算與分析。研究結(jié)果:對黃芩素血漿中的代謝物進(jìn)行了查找鑒定,鑒定出血漿中的M1為黃芩素6,7-二-O-葡萄糖醛酸苷(BGG),M2為6-O-葡萄糖-7-O-葡萄糖醛酸苷(BGGlu),M3為黃芩素7-O-葡萄糖醛酸苷(7BG),M4為黃芩素6-O-葡萄糖醛酸苷(6BG),M5為黃芩素7-O-硫酸酯苷(7BS),M6為黃芩素6-O-硫酸酯苷(6BS),M7為黃芩素6-OCH3-7-O葡萄糖醛酸(6-MEBG),M8為黃芩素7-OCH3-6-O葡萄糖醛酸(7-MEBG)八種代謝物。建立了采用兩套獨(dú)立液相系統(tǒng)同時分析黃芩素及七種代謝物的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法。該方法可將同分異構(gòu)體代謝物完全分離,方法可適用于分析實(shí)際生物樣品高通量要求,分析方法靈敏度高,專屬性強(qiáng),基質(zhì)效應(yīng)小,提取回收率平行一致,精密度和準(zhǔn)確度高,分析可用于藥代動力學(xué)研究。血漿樣品分析測定結(jié)果表明黃芩素發(fā)生廣泛且快速的代謝,黃芩素代謝產(chǎn)物與黃芩素呈現(xiàn)多相消除,血漿濃度-時間曲線有多峰現(xiàn)象,經(jīng)歷肝腸循環(huán)。多種黃芩素代謝產(chǎn)物體內(nèi)水平較高,黃芩素及代謝物藥代參數(shù)如消除半衰期存在個別受試者與其他受試者有較大差異現(xiàn)象。
[Abstract]:Baicalein, one of the effective ingredients extracted from Scutellaria baicalensis, is a kind of flavonoids, and has extensive pharmacological effects. It has many pharmacological effects, such as anti-inflammatory, antioxidation, neuroprotection, antiallergic bacteria, antiviral infection, anti cardiovascular disease, anticancer and so on. Baicalein has extensive metabolic effects in the body and produces a variety of metabolites. There are many studies on the determination and pharmacokinetics of baicalein and a metabolite baicalin, and there are few quantitative studies on the identification of other metabolites. The main purpose of this paper is to identify the metabolites of baicalein in human body, to establish a LC-MS/MS method for the simultaneous determination of baicalein and seven metabolites, and to analyze the methods in the analysis. Practical application research. Research scheme: using high resolution mass spectrometer, the plasma samples before and after taking baicalein were measured, compared and analyzed the two chromatograms, combined with metabolic analysis software to screen the metabolites, and then according to the structure of baicalein, the law of fragmentation, two grade fragments and other information to speculate on the metabolites. Finally, the standard product of the possible metabolites was synthesized, and the metabolites were separated by chromatographic separation, and the isomers were identified according to the retention time. Using two sets of independent liquid phase systems, baicalein was extracted by liquid liquid extraction and acetonitrile -0.5% formic acid solution was used as a mobile phase, SUPELCO Ascentis-C18 (50 mm * 4.6 mm I.D., 5 m particle size) color. The seven metabolites were separated by the precipitation protein method. The metabolites were separated by using acetonitrile -10 mM ammonium acetate 0.1% formic acid solution as the mobile phase, Agilent HC-C18 (150 mm * 4.6 mm I.D., 5 micron m particle size). The flow rate was 1.2 mL/min, gradient elution was used to analyze. The electrospray ionization source, the positive ion scanning mode, and the multiple reaction were used. The quantitative analysis of baicalein is m/z 271 to m/z 122.8, the internal standard is m/z 255 to m/z 153, the metabolite 6BG, 7BG is m/z 447.1 to m/z 271.1,6BS, 7BS is m/z 351, m/z 271, 461.1, 284.9, 284.9, 609.1, 271.1, internal standard wood The linear range of m/z 287 to m/z 135.0. baicalein is 1-500 ng/m L, and the quantitative lower limit is 1 ng/m L. seven metabolites. The selected 1-300 ng/m L is the quantitative linear range of the selected 1-300 ng/m L, and the selected 1 ng/m L is the quantitative lower limit. For its quantitative linear range, 10 ng/m L is its quantitative lower limit; 7BS selected 10-3000 ng/mL as its quantitative linear range, and selected 10 ng/m L as its quantitative lower limit; BGG selected 50-5000 ng/m L is its linear range, and the selected 50 ng/m L is its quantitative lower limit; the linear range of 6-MeBG is 1 and the quantitative lower limit is 1. 1-300 ng/mL, a quantitative lower limit of 1 ng/m L. for the specificity of the method, linear range, sensitivity, accuracy and precision, matrix effect, extraction recovery, and the stability of the sample under a variety of conditions to verify the reliability of the analytical method. The application established analysis method for the volunteers in the volunteers' plasma of the oral 200mg baicalein tablets The analysis and analysis of scutellarin and seven metabolites were carried out, and the related drug generation parameters were calculated and analyzed. The results: the metabolites in the baicalein plasma were found and identified. The M1 in the bleeding pulp was baicalein 6,7- two -O- glucuronide (BGG), M2 6-O- glucose -7-O- glucuronide (BGGlu) and M3 7-O- of baicalein 7-O-. Glucuronide (7BG), M4 is baicalein 6-O- glucuronide (6BG), M5 is baicalein 7-O- sulphate glycoside (7BS), M6 is baicalein 6-O- sulfate glycoside (6BS), M7 is baicalein 6-OCH3-7-O glucuronic acid, and it is the eight metabolites of baicalein glucuronic acid. The simultaneous separation of two sets of liquid phase systems is established. The method for the analysis of baicalein and seven metabolites by liquid chromatography mass spectrometry. This method can completely separate the isomer metabolites. The method can be used to analyze the high throughput requirements of the actual biological samples. The analytical method has high sensitivity, strong specificity, small matrix effect, parallel and high recovery rate, high precision and accuracy, and can be used for analysis. Pharmacokinetic study. The results of plasma sample analysis show that baicalein has extensive and rapid metabolism. The metabolites of baicalein and baicalein have multiphasic elimination. The plasma concentration time curve has multiple peaks, experienced the hepatic intestinal circulation. The levels of various baicalein metabolizing objects are higher, and the parameters of baicalein and metabolites are eliminated. The half-life is different between individual subjects and other subjects.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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本文編號：2001615