本文關(guān)鍵詞：骨橋蛋白與子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《大連醫(yī)科大學(xué)》 2015年

骨橋蛋白與子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究

李英華  

【摘要】：子宮內(nèi)膜癌﹙endometrial carcinoma,EC﹚是最常見的一種影響女性生殖的惡性疾病且發(fā)病率逐年升高。近年來,隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、人們的飲食水平和生活方式的變化、非正規(guī)的激素替代治療及濫用性激素等眾多因素,導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生率呈明顯上升趨勢(shì)并且患病人群多為年輕人,成為嚴(yán)重威脅我國女性生殖健康的惡性腫瘤。骨橋蛋白(osteopontin,OPN)是一種具有多種生物學(xué)功能的鈣結(jié)合磷酸化糖蛋白,廣泛存在于人體的各個(gè)組織及體液中,與腫瘤細(xì)胞的生長增殖和侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān),被認(rèn)為是一種新的腫瘤標(biāo)志物。研究結(jié)果表明近年來骨橋蛋白在婦科腫瘤中的功能和作用受到越來越多的重視。目的:本文選用人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞(HEC-1A細(xì)胞),采用CCK-8實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室實(shí)驗(yàn),檢測(cè)人重組骨橋蛋白(rhOPN)對(duì)HEC-1A細(xì)胞增殖能力、侵襲能力和遷移能力的影響。分析rhOPN對(duì)HEC-1A細(xì)胞MMP-2、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin表達(dá)的影響及與相關(guān)通路分子ERK和AKT的相關(guān)性。方法:(1)采用人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞(HEC-1A細(xì)胞)為體外模型,用不同濃度的rhOPN(0ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、300ng/ml、400ng/ml﹚處理細(xì)胞24h,通過Cell Counting Kit-8(CCK-8)實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室實(shí)驗(yàn),檢測(cè)rhOPN對(duì)HEC-1A細(xì)胞的增殖能力、遷移能力和侵襲能力的影響。(2)Westen-blot和明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度的rhOPN對(duì)HEC-1A細(xì)胞MMP-2蛋白表達(dá)及其活性的影響。選用濃度為300ng/ml的rhOPN與HEC-1A細(xì)胞共培養(yǎng),分別在不同的時(shí)間﹙0h、4h、8h、12h、24h、48h﹚,以Westen-blot和明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)rhOPN對(duì)HEC-1A細(xì)胞中MMP-2蛋白表達(dá)及其活性的影響。(3)選用濃度為300ng/ml的rhOPN與HEC-1A細(xì)胞共培養(yǎng)24h,Western-blot和免疫熒光檢測(cè)rhOPN對(duì)HEC-1A細(xì)胞相應(yīng)通路分子E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)量及定位的影響。(4)采用不同濃度的rhOPN處理細(xì)胞24h,Western-blot檢測(cè)在不同濃度下rhOPN對(duì)HEC-1A細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路分子ERK和AKT的表達(dá)影響。然后加入相關(guān)信號(hào)通路分子的特異性抑制劑U0126(MEK1/2抑制劑﹚、LY294002﹙PI3K抑制劑﹚分別抑制HEC-1A細(xì)胞ERK和AKT的活化,Westen-blot檢測(cè)MMP-2、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)水平的變化。結(jié)果:(1)CCK-8實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室結(jié)果顯示:在rhOPN為300ng/ml時(shí),HEC-1A細(xì)胞的增殖能力、遷移能力和侵襲能力最強(qiáng)。(2)隨著rhOPN濃度的增加,HEC-1A細(xì)胞MMP-2蛋白表達(dá)量逐漸上升,在rhOPN為300ng/ml處理細(xì)胞24h時(shí),MMP-2的蛋白表達(dá)量最高。明膠酶譜實(shí)驗(yàn)顯示:rhOPN為300ng/ml處理細(xì)胞24h時(shí),MMP-2活性最強(qiáng)。(3)選取rhOPN的最佳作用條件,Westen-blot結(jié)果顯示:N-cadherin、Vimentin表達(dá)最強(qiáng),E-cadherin表達(dá)最弱。免疫熒光結(jié)果與空白組相比:E-cadherin、N-cadherin和Vimentin均定位在細(xì)胞膜上。(4)Westen-blot結(jié)果表明:不同濃度的rhOPN蛋白刺激細(xì)胞后,HEC-1A細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路分子ERK和AKT的活化均增強(qiáng),分別加入以上兩種信號(hào)通路分子的抑制劑,ERK1/2、AKT的活性均會(huì)受到抑制,rhOPN蛋白對(duì)HEC-1A細(xì)胞MMP-2、N-cadherin和Vimentin的表達(dá)上調(diào)作用受到不同程度的抑制,對(duì)E-cadherin的表達(dá)下調(diào)作用也受到抑制。同時(shí)明膠酶譜實(shí)驗(yàn)顯示:MMP-2的活性均受到了不同程度的抑制。結(jié)論:(1)OPN可提高HEC-1A細(xì)胞的增殖能力、遷移能力和侵襲能力。(2)OPN可能通過活化ERK和AKT來促進(jìn)HEC-1A細(xì)胞MMP-2、N-cadherin及Vimentin蛋白的表達(dá),抑制E-cadherin蛋白的表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

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