本文選題：NHE-1 + Cariporide��； 參考：《江蘇大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的鈉氫交換蛋白-1(Sodium Hydrogen Exchanger,NHE-1)調(diào)節(jié)細(xì)胞膜內(nèi)外的H+/Na+交換,與腫瘤的耐藥機(jī)制密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)探討鈉氫交換蛋白NHE-1抑制劑Cariporide(CP)調(diào)節(jié)人乳腺癌耐藥細(xì)胞株MCF-7/ADR細(xì)胞對(duì)化療藥物阿霉素(Adriamycin,Adr)體內(nèi)外藥物敏感性的作用及其分子機(jī)制,為逆轉(zhuǎn)腫瘤治療過(guò)程中發(fā)生的多藥耐藥提供新的理論依據(jù)和治療途徑。方法1.CCK8法檢測(cè)不同濃度的NHE-1抑制劑CP(3、6、9、12、60、100μg/ml)對(duì)人乳腺癌MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞24、48h的抑制率,通過(guò)Graphpad prism5計(jì)算非細(xì)胞毒性劑量的CP與不同濃度(1、5、30、50μg/ml)的化療藥物Adr聯(lián)用后,藥物的半數(shù)抑制濃度(IC50)的改變,并運(yùn)用Compu Syn軟件計(jì)算聯(lián)用指數(shù)(CI);2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)6μg/ml CP單用及與10μg/ml Adr聯(lián)用后,乳腺癌耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR的凋亡率、對(duì)阿霉素的攝取率和細(xì)胞周期的改變;3.Western blot法檢測(cè)腫瘤耐藥細(xì)胞株(MCF-7/ADR、A2780/PTX)與敏感細(xì)胞株(MCF-7、A2780)中NHE-1蛋白的表達(dá)差異;檢測(cè)CP單獨(dú)及與Adr聯(lián)合作用48h后,相關(guān)蛋白(CD44、MDR1、NF-κB)和凋亡蛋白(Caspase-3/9、Bcl-2)的表達(dá)變化;4.RT-PCR法檢測(cè)腫瘤耐藥細(xì)胞株(MCF-7/ADR、A2780/PTX)與敏感細(xì)胞株(MCF-7、A2780)中NHE-1基因的表達(dá)差異;檢測(cè)CP單用及與Adr聯(lián)用48h后MDR-1、NF-κB等相關(guān)核轉(zhuǎn)錄因子mRNA的差異表達(dá);5.構(gòu)建人乳腺癌耐藥細(xì)胞株皮下移植瘤模型,動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)各組裸鼠的體重變化及皮下移植瘤生長(zhǎng)速度,測(cè)量瘤體體積,繪制瘤體生長(zhǎng)曲線(xiàn);通過(guò)HE染色觀察瘤體組織的病理變化;免疫組化法及Western blot法檢測(cè)瘤體組織中NHE-1、MDR1、Caspase-3、Bcl-2等蛋白的表達(dá)改變。結(jié)果1.耐藥細(xì)胞株MCF-7/ADR和A2780/PTX中NHE-1蛋白和mRNA的表達(dá)明顯高于相應(yīng)的敏感株(P0.01);而6μg/ml CP能夠下調(diào)MCF-7/ADR細(xì)胞NHE-1蛋白和mRNA的表達(dá)水平(P0.05)。CP與Adr均能夠抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖,且具有劑量及時(shí)間依賴(lài)性,選擇抑制率為10%CP的作用濃度6μg/ml作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)劑量;CP與Adr聯(lián)用下調(diào)阿霉素對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞的IC50值;兩藥聯(lián)用時(shí),聯(lián)用指數(shù)CI值均小于1。隨著CP濃度的增加,乳腺癌耐藥細(xì)胞對(duì)阿霉素的攝取率呈遞增趨勢(shì),且不同濃度的藥物處理組間有顯著性差異(P0.05)。CP與Adr聯(lián)用組細(xì)胞周期中處于G0/G1期的百分比為68.32±5.99%,顯著高于其他各組;而分布于G2/M期的百分比3.38±1.49%低于其他組(P0.01)。析因分析顯示兩藥之間存在交互作用(P0.001)。2.CP與Adr聯(lián)用MCF-7/ADR細(xì)胞的凋亡率為(29.12±0.65)%,明顯高于空白對(duì)照組(2.43±0.08)%、單用Adr組(16.34±0.39)%和單用CP組(9.55±0.47)%,且存在交互作用(P0.01)。CP與Adr聯(lián)用后耐藥相關(guān)蛋白CD44、MDR-1和相關(guān)基因MDR-1 mRNA、NF-κB mRNA均出現(xiàn)了表達(dá)水平的顯著下調(diào)(P0.05),而凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9表達(dá)量增加。3.細(xì)胞懸液皮下接種法使裸鼠成瘤,CP和Adr聯(lián)用組、單用Adr組移植瘤生長(zhǎng)速度明顯低于空白對(duì)照組(P0.05)。移植瘤組織HE染色發(fā)現(xiàn),與空白對(duì)照組及單用用藥組相比,聯(lián)合用藥組中腫瘤細(xì)胞分布明顯減少,且同時(shí)出現(xiàn)了大面積的液化壞死區(qū)并伴有周?chē)w維化增生。CP和Adr聯(lián)用組瘤體組織NHE-1蛋白、抗凋亡蛋白Bcl-2及耐藥蛋白MDR-1的表達(dá)顯著降低(P0.05),但是Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP則表達(dá)增加(P0.05),組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論NHE-1抑制劑Cariporide與化療藥物阿霉素聯(lián)用可以顯著抑制MCF-7/ADR耐藥細(xì)胞的增殖,明顯減緩乳腺癌細(xì)胞皮下移植瘤的生長(zhǎng)速度,可能是通過(guò)調(diào)控NF-κB信號(hào)通路,下調(diào)耐藥相關(guān)基因和蛋白的表達(dá),同時(shí)活化凋亡相關(guān)蛋白,使細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期并促進(jìn)細(xì)胞凋亡,從而有效逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的化療耐藥。
[Abstract]:The expression of NHE - 1 in MCF - 7 / ADR and MCF - 7 / ADR cells was determined by using the method of Western blot . There was a significant difference between CP and Adr ( P < 0.01 ) . Compared with control group and single - use group , there was a significant difference between CP and Adr group ( P < 0.05 ) .
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1930921