本文選題：三羥異黃酮 + PPARs��； 參考：《合肥工業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：肝臟是脂類(lèi)代謝的主要器官和重要場(chǎng)所,脂肪肝是常見(jiàn)的肝臟疾病之一,形成原因主要是肝細(xì)胞內(nèi)脂肪儲(chǔ)積積累過(guò)多、細(xì)胞脂肪化嚴(yán)重,導(dǎo)致脂肪代謝發(fā)生紊亂形成。有人已經(jīng)檢測(cè)出大豆異黃酮對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠脂肪肝有顯著的治療作用。大豆基異黃酮是從豆科植物根部分離得到的一種天然次級(jí)代謝產(chǎn)物,它具有顯著的抗癌、抑菌、抗氧化等作用。三羥異黃酮(Genistein,Gen)在大豆異黃酮活性功能中發(fā)揮重要作用,研究發(fā)現(xiàn)三羥異黃酮在脂質(zhì)代謝過(guò)程中主要通過(guò)PPARs過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體調(diào)控以及對(duì)代謝酶的表達(dá)與活性的調(diào)控發(fā)揮重要生理功能。目的:本文主要通過(guò)細(xì)胞體外培養(yǎng)試驗(yàn)來(lái)探索三羥異黃酮調(diào)控脂質(zhì)代謝的途徑,研究Gen對(duì)過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)、肝X受體(LXR)、脂肪甘油三酯脂酶(Adipose Triglyceride lipase,ATGL)、激素敏感性甘油三酯脂肪酶(Hormone-sensitive lipase,HSL)調(diào)控表達(dá)中的規(guī)律,比較三羥異黃酮與PPAR激動(dòng)劑對(duì)細(xì)胞活性的影響,以及探究Gen對(duì)脂肪化細(xì)胞中人腫瘤壞死因子TNF-α、瘦素Leptin的調(diào)控規(guī)律,為三羥異黃酮在營(yíng)養(yǎng)保健、臨床藥理、調(diào)脂保肝等方面提供理論基礎(chǔ)和試驗(yàn)依據(jù)。方法:實(shí)驗(yàn)對(duì)象為體外培養(yǎng)細(xì)胞模型,培養(yǎng)人體正常肝細(xì)胞L-02、人肝癌細(xì)胞HepG2、Hep3b以及小鼠前脂肪細(xì)胞3T3-L1四種細(xì)胞,將細(xì)胞分為空白組、模型組、Gen試劑組以及PPAR激動(dòng)劑組。首先用MTT測(cè)定細(xì)胞在不同油酸(OA)濃度下的細(xì)胞活性,確定最佳的OA誘導(dǎo)濃度,建立細(xì)胞脂肪化模型。用Annexin V/PI雙染色法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色處理,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況;進(jìn)一步驗(yàn)證Gen與PPAR激動(dòng)劑及抑制劑比較對(duì)細(xì)胞的毒性影響;利用Gen、PPAR激活劑及抑制劑處理四種脂肪化細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ATGL、HSL、PPARα、PPARγ以及肝X受體LXR的mRNA表達(dá)量;酶聯(lián)免疫法檢測(cè)Gen、PPAR激活劑及抑制劑處理后的四種脂變細(xì)胞培養(yǎng)液中的TNF-α、Leptin含量變化。結(jié)果:(1)MTT細(xì)胞活力測(cè)定實(shí)驗(yàn)中,當(dāng)油酸濃度高于1mM時(shí),細(xì)胞活力大幅度降低且部分細(xì)胞漂浮壞死,細(xì)胞內(nèi)TG含量顯著性累積,當(dāng)油酸濃度低于1mM時(shí),細(xì)胞活力相近,細(xì)胞形態(tài)變化不明顯。(2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,三羥異黃酮對(duì)細(xì)胞脂肪化有保護(hù)作用,能提高細(xì)胞的活性。(3)Gen可以上調(diào)PPARs以及LXRα的mRNA表達(dá)量,其中對(duì)PPARs調(diào)控較LXRα顯著,同時(shí)細(xì)胞中HSL和ATGL的m RNA表達(dá)量也有相應(yīng)的提高。(4)Gen可以呈劑量效應(yīng)調(diào)控TNF-α、Leptin濃度。結(jié)論:使用1mM濃度的OA誘導(dǎo)建立細(xì)胞脂肪化模型較為適宜,Gen與PPAR激動(dòng)劑都能調(diào)節(jié)細(xì)胞的脂質(zhì)代謝活性,調(diào)控細(xì)胞的TG含量。Gen可以通過(guò)代謝性核受體途徑調(diào)節(jié)ATGL、HSL的活性,TNF-α、Leptin能夠明顯降低ATGL mRNA的表達(dá),Gen是通過(guò)調(diào)控PPARs途徑來(lái)抑制TNF-α、Leptin分泌,調(diào)控體內(nèi)脂質(zhì)代謝產(chǎn)生降脂效果,具有重要的生理意義。
[Abstract]:The liver is the main organ and important place of lipid metabolism. Fatty liver is one of the common liver diseases. Soybean isoflavones have been detected to have a significant therapeutic effect on experimental fatty liver in rats. Soybean isoflavone is a natural secondary metabolite isolated from the roots of legumes. Genistein Genin played an important role in the activity of soybean isoflavones. It is found that genistein plays an important physiological role in lipid metabolism mainly through the regulation of PPARs peroxisome proliferator activated receptor and the regulation of metabolic enzyme expression and activity. Objective: to explore the pathway of trihydroxyisoflavones regulating lipid metabolism through cell culture in vitro. To study the regulation and expression of Gen on the expression of peroxisome proliferator activated receptor (PPAR), liver X receptor (LXRN), adipose Triglyceride lipase (ATGL) and hormone sensitive triglyceride lipase (Hormone-sensitive lipase). To compare the effects of genistein and PPAR agonist on cell activity, and to explore the regulation of Gen on human tumor necrosis factor TNF- 偽 and leptin Leptin in adipogenic cells, it is suggested that trihydroxyisoflavone is in nutritional care and clinical pharmacology. To provide theoretical basis and experimental basis for regulating fat and protecting liver. Methods: human normal hepatocytes L-02, human hepatoma HepG2 Hep3b and mouse preadipocytes 3T3-L1 were cultured in vitro. The cells were divided into blank group, model group and PPAR agonist group. At first, MTT was used to determine the cell activity at different concentrations of oleic acid, to determine the optimal concentration of OA induction, and to establish a model of cell adipogenesis. The cell apoptosis was detected by flow cytometry with Annexin V/PI double staining method, and the toxicity of Gen compared with PPAR agonist and inhibitor was further verified. Four kinds of fatty cells were treated with genistein PPAR activator and inhibitor, and the mRNA expression of ATGL HSLPAR- 偽 PPAR- 偽 PPAR- 緯 and liver X receptor LXR were measured by real-time fluorescence quantitative PCR. Enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) was used to detect the changes of TNF- 偽 Leptin in four kinds of lipopolysaccharide cell cultures treated with genistein PPAR activator and inhibitor. Results when the concentration of oleic acid was higher than 1mM, the cell viability was significantly decreased, and some cells were floating and necrotic. The TG content in the cell accumulated significantly. When oleic acid concentration was lower than 1mM, the cell viability was similar. The results of flow cytometry showed that genistein had protective effect on cell adipogenesis and increased the activity of PPARs and mRNA expression of LXR 偽, and the regulation of PPARs was more significant than that of LXR 偽. At the same time, the expression of m RNA in HSL and ATGL was also increased, and the concentration of TNF- 偽 Leptin could be regulated in a dose-dependent manner. Conclusion: the model of cell adipogenesis induced by OA at the concentration of 1mM is more suitable for regulating the lipid metabolism activity of cells by both PPAR agonists and genistein. Regulation of TG content. Gen can regulate the activity of TNF- 偽 Leptin through metabolic nuclear receptor pathway. TNF- 偽 -Leptin can significantly reduce the expression of ATGL mRNA by regulating the PPARs pathway to inhibit the secretion of TNF- 偽 -leptin, and to regulate the lipid metabolism in vivo to produce lipid-lowering effect. It has important physiological significance.
【學(xué)位授予單位】：合肥工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R575.5

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本文編號(hào)：1883255