本文選題：LC-MS/MS + 芒果苷　； 參考：《廣州中醫(yī)藥大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:1.建立準確,可靠,高效的液相色譜-質譜聯(lián)用(LC-MS/MS)法測定大鼠血漿和磷酸鹽緩沖液(PBS)中芒果苷的質量濃度;2.利用平衡透析法的原理,聯(lián)合已建立的LC-MS/MS法考察芒果苷在糖尿病大鼠以及正常大鼠血漿中的蛋白結合率,并比較其差異性;3.建立準確,可靠,靈敏度高的液相色譜-質譜聯(lián)用(LC-MS/MS)法測定大鼠血漿和各組織勻漿中芒果苷的質量濃度;4.采用已經建立的LC-MS/MS法考察芒果苷單體在正常大鼠體內的組織分布特征;并與知母單煎液、黃柏知母藥對煎液給藥后芒果苷的組織分布情況進行比較;考察糖尿病大鼠灌服同等劑量黃柏知母藥對后芒果苷在體內的組織分布特征,同時比較與正常大鼠組間的分布差異性。方法:1.芒果苷在大鼠血漿和PBS緩沖液中測定方法的建立:以蘆丁為內標,大鼠血漿樣品采用蛋白沉淀法進行預處理,提取劑為乙腈:乙酸(9:1);色譜柱為日本資生堂CAPCELL PAK C18柱(150 mm×2.0 mm,5 μm);洗脫方式:等度洗脫;分析時間:5min;流速:0.25 mL·min~(-1);柱溫:30℃;進樣量:5 μL。檢測方式為正離子多離子反應(MRM),用于定量分析的離子對為:m/z423.0→273.2(芒果苷);m/z611.5→303(內標蘆丁)。2.血漿蛋白結合率的測定:正常SD雄性大鼠隨機分為正常對照組和糖尿病模型組,利用平衡透析法的原理,聯(lián)合已建立的LC-MS/MS法測定大鼠血漿和PBS緩沖液中芒果苷的質量濃度,根據(jù)相應公式計算芒果苷在糖尿病大鼠與正常大鼠血漿中的蛋白結合率,對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。3.芒果苷在大鼠血漿和組織勻漿中測定方法的建立:以蘆丁為內標,大鼠血漿和組織勻漿樣品均采用蛋白沉淀法預處理,血漿中提取劑為乙腈:乙酸(體積比9:1),組織勻漿中提取劑為乙腈:乙酸(體積比40:1);色譜柱為日本資生堂CAPCELLPAKC18柱(150mm×2.0mm,5 μm);洗脫方式:梯度洗脫;總分析時間:7min;流速:300μL·min~(-1);柱溫:35 ℃;進樣量:10 μL。檢測方式為正離子多離子反應(MRM)。4.芒果苷在正常大鼠及糖尿病大鼠體內組織分布的研究:正常大鼠分別單次灌胃芒果苷單體液、知母單煎液、黃柏知母藥對煎液;糖尿病大鼠單次灌胃黃柏知母藥對煎液后分別按不同時間點(6個)取樣(芒果苷劑量均為35mg·Kg~(-1)),分離血漿及各組織臟器,利用已建立的LC-MS/MS法測定大鼠血漿和各組織勻漿中芒果苷的質量濃度,計算芒果苷在各組織中的分布含量;考察芒果苷單體在正常大鼠體內的分布特征,比較芒果苷單體組與知母單煎液組及黃柏知母藥對組中組織分布的異同;同時考察同等劑量黃柏知母藥對煎液給藥后,比較芒果苷在正常大鼠與糖尿病大鼠體內的組織分布差異。結果:1.芒果苷在大鼠血漿與磷酸鹽緩沖液(PBS)中定量分析方法的建立:大鼠血漿和磷酸鹽緩沖液(PBS)中,芒果苷分別在200～3000 ng·mL~(-1)(r=0.9983),50～2000 ng· mL~(-1)(r=0.9979)范圍內線性關系良好,準確度均在94.7%～108.6%間,日內、日間相對標準偏差(RSD)均小于11.3%;提取回收率在73.3%～73.7%間,基質效應在67.2%～73.5%間。2.血漿蛋白結合率的測定:PBS緩沖液中芒果苷的質量濃度為100,200,500 ng· mL~(-1)時,芒果苷與糖尿病大鼠的平均血漿蛋白結合率分別為:(84.5±1.4)%、(82.6±1.4)%、(82.4±1.7)%;與正常大鼠的平均血漿蛋白結合率分別為:(65.5±0.6)%、(66.6±1.0)%、(68.4±0.7)%,兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),芒果苷在糖尿病大鼠中的平均血漿蛋白結合率高于正常大鼠。3.芒果苷在大鼠血漿和組織勻漿中定量分析方法的建立:血漿中芒果苷的線性范圍為1～600 ng · mL~(-1),組織勻漿中芒果苷的線性范圍分別為:2～500 ng · mL~(-1)、5～2000 ng·L~(-1),結果顯示芒果苷在上述標線范圍內線性關系良好;方法準確度在97.2%～111.7%間,日內、日間相對標準偏差(RSD)均小于14.0%;提取回收率在30.2%～84.2%間,基質效應均在30.6%～78.0%間。4.芒果苷組織分布學的研究:芒果苷單體灌胃給藥后,除大腦中未檢測到芒果苷外,心、肝、脾、肺、腎、胃、腸、骨骼肌以及胰腺組織中在給藥后10min均可檢測到芒果苷;芒果苷單體組中各組織中分布含量普遍低于知母單煎液組及黃柏知母藥對煎液組;正常大鼠體內知母配伍黃柏給藥后,各組織分布中的含量普遍低于知母單煎液組,而配伍組中胰腺組織的分布含量則明顯高于知母單煎液組及同組中其它各組織;糖尿病大鼠與正常大鼠分別口服黃柏知母藥對煎液后,糖尿病大鼠組中胰腺和小腸組織的分布含量雖然較正常大鼠降低,但仍明顯高于其他組織;肝、脾、肺、腎、胃及血漿中的分布含量均高于正常大鼠組。結論:(1)本文建立的兩種液相色譜-質譜(LC-MS/MS)法快速、準確、可靠,測定方法可滿足方法學的分析要求,適用于血漿、磷酸鹽緩沖液(PBS)及組織勻漿中生物樣品的測定。(2)芒果苷在糖尿病大鼠與正常大鼠血漿中蛋白結合率的比較具有顯著性差異,且糖尿病大鼠組的血漿蛋白結合率高于正常大鼠組。(3)正常大鼠予以芒果苷單體給藥后,芒果苷分布快速且廣泛,但組織分布含量低,胃和小腸中分布最多,腦無分布;知母單煎液組中芒果苷的組織分布含量明顯高于單體組,提示中藥知母中的其它有效成分可能促進了芒果苷的組織分布,不同成分共同作用后對機體產生了協(xié)同作用;知母配伍黃柏灌胃給藥后,胰腺組織中的分布含量明顯增加,提示黃柏中的某些成分可能促進了胰腺的組織分布;大鼠疾病微環(huán)境也會影響芒果苷的吸收,糖尿病大鼠口服黃柏知母藥對煎液后與正常大鼠組相比芒果苷在肝、脾、肺、腎、胃等組織中分布含量較高,同時這些臟器也是糖尿病大鼠及其并發(fā)癥的主要病變部位,根據(jù)藥物的組織分布特點,可以有效預測藥物作用的靶器官,對擴大芒果苷臨床用途有著重要的意義。
[Abstract]:Objective : To establish an accurate , reliable and high - performance liquid chromatography - mass spectrometry ( LC - MS / MS ) method for the determination of the mass concentration of mango glycosides in rat plasma and phosphate buffer ( PBS ) . The results were as follows : 1 . The concentration of mango glycosides in normal rats and diabetic rats was determined by using the established LC - MS / MS method . The mean plasma protein binding rate was ( 84.5 鹵 1.4 ) % , ( 82.6 鹵 1.4 ) % , ( 82.4 鹵 1.7 ) % in PBS buffer . The linear range of Mangiferin in diabetic rats was ( 66.5 鹵 0.6 ) % , ( 66.6 鹵 1.0 ) % , ( 68.4 鹵 0.7 ) % , respectively . Conclusion : ( 1 ) The distribution of mango glycosides in diabetic rats is higher than that in normal rats .

【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：1869236