發(fā)布時間：2018-05-10 05:16

  本文選題：心肌缺血 + 線粒體動力學(xué)��； 參考：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的在成功建立心肌缺血大鼠模型的基礎(chǔ)上,通過探究益氣活血方對實驗大鼠的心臟結(jié)構(gòu)、功能、心肌細胞線粒體和相關(guān)信號通路變化的影響,闡述益氣活血方通過調(diào)節(jié)心肌細胞線粒體動力學(xué)相關(guān)蛋白,進而作用于TGF-β1/Smad3信號通路,減輕心肌纖維化等病理過程對心臟損傷的作用機制。方法SPF級SD大鼠結(jié)扎左冠狀動脈前降支構(gòu)建心肌缺血模型,隨機將造模成功的大鼠分為三組,分別為模型組、益氣活血方組和培哚普利組,以及只穿刺打空環(huán)的假手術(shù)組。術(shù)后第二天灌胃給藥。以第7天、28天為觀測時間點。采用小動物超聲系統(tǒng)檢測各組大鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能的變化;HE染色和透射電鏡分別觀察心肌及其線粒體病理形態(tài)改變,Masson染色觀測心肌纖維化的嚴重程度;運用高效液相色譜法檢測線粒體中的ATP和AMP的含量;運用Western Blotting、免疫熒光實時定量PCR法檢測大鼠梗死區(qū)邊緣心肌的Mfn2、Drp1、AMPK、TGF-β1和Smad3基因和蛋白及AMPK磷酸化表達水平。探討益氣活血方通過線粒體動力學(xué)相關(guān)蛋白Mfn2、Drp1促進線粒體的融合抑制過度分裂,進而促進AMPK蛋白的表達,增強抑制TGF-β1/Smad3信號通路作用機制。為探究益氣活血方對MI大鼠保護及其可能機制提供依據(jù)。結(jié)果實驗一 HE染色結(jié)果:假手術(shù)組大鼠心肌細胞大小形態(tài)正常,排列整齊,結(jié)構(gòu)清楚,細胞核形態(tài)正常,無脂褐素沉積,細胞間質(zhì)無明顯變化;模型組大鼠心肌細胞數(shù)量顯著減少,心肌細胞排列紊亂,大量炎性細胞浸潤;各藥物組較模型組明顯改善。超聲心動結(jié)果:第7天和28天組中,與假手術(shù)組相比,模型組大鼠的左心室收縮末期內(nèi)徑(LVIDs)、左心室舒張末期內(nèi)徑(LVIDd)、左心室收縮末期容積(ESV)、左心室舒張末期容積(EDV)均顯著增大(P0.01),左心室射血分數(shù)(EF)和左心室短軸率(FS)均顯著降低(P0.01),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;與模型組相比,益氣活血方組和培哚普利組LVIDs、LVIDd、ESV、EDV均明顯下降(P0.01或P0.05),EF和FS均明顯升高(P0.01或P0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。實驗二透射電鏡結(jié)果:第7天和28天組中,假手術(shù)組心肌及線粒體結(jié)構(gòu)基本正常,心肌纖維分布規(guī)則,形態(tài)大小正常,線粒體結(jié)構(gòu)完整,嵴結(jié)構(gòu)清晰;模型組心肌纖維破裂,排列紊亂,核溶解消失,線粒體腫脹,嵴消失;用藥后,心肌纖維排列較整齊,間質(zhì)間隔變小,線粒體大小形態(tài)較模型組明顯正常,輕度水腫,大部分嵴正常,部分斷裂消失。心肌細胞能量產(chǎn)物ATP和AMP檢測結(jié)果:第7天和28天組中,與假手術(shù)組相比,模型組ATP的表達量顯著降低(P0.01),AMP的表達量顯著升高(P0.01);與模型組相比,益氣活血方組和培哚普利組ATP的表達量顯著升高(P0.01),AMP的表達量顯著降低(P0.01),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。心肌細胞線粒體Mfn2和Drp1檢測結(jié)果:第7天和28天組中,與假手術(shù)組相比,模型組Mfn2的基因和蛋白表達量顯著降低(P0.01),Drp1的基因和蛋白表達量顯著升高(P0.01);與模型組相比,益氣活血方組和培哚普利組的Mfn2基因和蛋白表達量明顯升高(P0.01或P0.05),Drp1的基因和蛋白表達量顯著降低(P0.01或P0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;實驗三Masson染色結(jié)果:第7天和28天組中:與假手術(shù)組相比,模型組藍色區(qū)域增大,膠原生成增多,心肌纖維化加重,各用藥組較模型組相比,藍色區(qū)域減小,膠原量減少,纖維化減輕。心肌梗邊緣區(qū)AMPK、p-AMPK、TGF-β1和Smad3檢測結(jié)果:第7天和28天組中,與假手術(shù)組相比,模型組AMPK的基因和蛋白表達量以及磷酸化AMPK量明顯降低(P0.01或P0.05);TGF-β1和Smad3的基因和蛋白表達量顯著升高(P0.01)。與模型組相比,益氣活血方組和培哚普利組的AMPK的基因和蛋白表達量以及磷酸化AMPK量明顯升高(P0.01或P0.05);TGF-β1和Smad3的基因和蛋白表達量顯著降低(P0.01或P0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;結(jié)論1.本實驗應(yīng)用成功構(gòu)建的心肌缺血大鼠模型,驗證益氣活血方能夠修復(fù)心肌細胞結(jié)構(gòu)和增強心肌功能,降低梗死面積的大小等,有效減輕心肌缺血對心肌細胞的損傷和心室重構(gòu)。2.益氣活血方通過促進受損心肌細胞線粒體的融合,抑制過度分裂,改善線粒體的結(jié)構(gòu)和功能,促進能量的合成,從而減輕心肌缺血的損傷,可能是益氣活血方的作用靶點之一。3.益氣活血方可增加AMPK、磷酸化的AMPK的表達量,抑制TGF-β1/Smad3信號通路來減輕心肌纖維化及心室重構(gòu)。4.由實驗結(jié)果以及相關(guān)文獻理論支持,提出可能性:益氣活血方通過調(diào)節(jié)線粒體動力學(xué)相關(guān)蛋白Mfn2、Drp1,作用于AMPK/TGF-β信號通路來發(fā)揮作用。
[Abstract]:Objective To study the effects of Yiqihuoxu recipe on myocardial fibrosis in rats with myocardial fibrosis . Compared with the sham operation group , the expression of Mfn2 gene and protein in the model group decreased significantly ( P0.01 ) . Conclusion : Compared with the model group , the gene and protein expression level of AMPK and the expression of phosphorylated AMPK decreased significantly ( P0.01 or P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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2 劉晨晨;王靚;施慧;余爽;;TGF-β1/Smad信號通路在心室重構(gòu)中的調(diào)控機制研究進展[J];廣西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2016年02期

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7 張U，

本文編號：1867933