發(fā)布時間：2018-05-09 05:35

  本文選題：腸道嘌呤轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 + 高尿酸血癥��； 參考：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景:本研究是北京市自然基金(編號:7162117)的部分研究內(nèi)容,并得到了北京中醫(yī)藥大學(xué)自主選題項(xiàng)目(2016-JYB-XS-129)的資助,旨在探討基于腸道嘌呤核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白CNT2中藥菊苣防治高尿酸血癥作用機(jī)制的部分實(shí)驗(yàn)研究內(nèi)容。高嘌呤飲食一直被認(rèn)為是高尿酸血癥的危險因素之一,高嘌呤飲食的攝入與高尿酸血癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。CNT2是腸道嘌呤核苷吸收的核心轉(zhuǎn)運(yùn)載體,抑制CNT2活性減少腸道嘌呤核苷的攝入可以降低血尿酸水平,有望成為藥物干預(yù)新靶點(diǎn)。中藥可以安全、有效的通過多途徑、多靶點(diǎn)防治高尿酸血癥,其能否通過干預(yù)腸道CNT2減少嘌呤的吸收從而降低體內(nèi)尿酸水平有待探討。因此,本研究以腸道CNT2為靶點(diǎn),探討中藥減少腸道嘌呤吸收降尿酸的作用機(jī)制,為研究中藥防治高尿酸血癥的效用新靶點(diǎn)提供參考,具有明確的學(xué)術(shù)價值和臨床現(xiàn)實(shí)意義。課題組前期研究發(fā)現(xiàn),菊苣降尿酸效果顯著,可以通過干預(yù)尿酸生成和排泄等環(huán)節(jié)降低血尿酸水平。實(shí)驗(yàn)室前期已從多個角度闡明菊苣防治高尿酸血癥的藥效機(jī)制。本課題切入腸道嘌呤核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(CNT2),采用同源建模和分子對接技術(shù)虛擬篩選菊苣與腸道CNT2結(jié)合的化學(xué)成分,結(jié)合生物學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證菊苣化學(xué)成分對腸道CNT2的抑制作用,以期從減少腸道嘌呤核苷吸收的角度闡明菊苣降尿酸的作用機(jī)制,為研究中藥防治高尿酸血癥的作用靶點(diǎn)提供參考,同時為研究中藥降尿酸的作用機(jī)制提供方法學(xué)參考。研究目的:1.分子對接虛擬篩選菊苣中與腸道CNT2轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相結(jié)合的化學(xué)成分,為進(jìn)一步探討菊苣干預(yù)腸道嘌呤轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白降尿酸的作用機(jī)制提供理論依據(jù)2.生物學(xué)驗(yàn)證菊苣化學(xué)成分對腸道CNT2活性的抑制作用,闡明菊苣減少腸道嘌呤吸收環(huán)節(jié)降尿酸的作用機(jī)制,為中藥防治高尿酸血癥的效用新靶點(diǎn)提供參考。研究內(nèi)容與方法本論文緊密圍繞基于分子對接技術(shù)菊苣抑制嘌呤核苷吸收的降尿酸作用機(jī)制展開文獻(xiàn)研究與實(shí)驗(yàn)研究。(一)文獻(xiàn)綜述文獻(xiàn)研究主要通過檢索國內(nèi)外研究文獻(xiàn)從腸道嘌呤核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白與高尿酸血癥的關(guān)系、同源建模在中藥研究中的應(yīng)用和藥物膜轉(zhuǎn)運(yùn)體研究中細(xì)胞模型的應(yīng)用三個方面內(nèi)容,為同源建模構(gòu)建腸道CNT2蛋白結(jié)構(gòu),虛擬篩選菊苣與CNT2結(jié)合的化學(xué)成分,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證菊苣單體成分對CNT2的抑制作用提供理論與方法基礎(chǔ)。(二)實(shí)驗(yàn)研究實(shí)驗(yàn)研究主要分為兩個章節(jié)第一章菊苣結(jié)合CNT2的化學(xué)成分虛擬篩選1.以實(shí)驗(yàn)室前期建立的菊苣小分子化學(xué)成分庫為基礎(chǔ),以腸道嘌呤核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白為靶點(diǎn),采用同源建模方法構(gòu)建人源腸道CNT2蛋白的三維結(jié)構(gòu)模型,已知活性抑制劑進(jìn)行分子對接驗(yàn)證模型的可靠性,為后續(xù)虛擬篩選菊苣成分提供靶點(diǎn)CNT2的三維結(jié)構(gòu)。2.分子對接技術(shù)虛擬篩選菊苣與嘌呤核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白結(jié)合的小分子化合物,并分析其與轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的作用結(jié)合模式,為從干預(yù)外源性嘌呤核苷攝入角度初步探討中藥菊苣降尿酸作用機(jī)制提供理論依據(jù)。第二章菊苣成分抑制CNT2活性的實(shí)驗(yàn)研究1.建立IEC-6單層細(xì)胞模型,通過觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)、測定細(xì)胞單層跨上皮電阻、熒光素鈉透過率等指標(biāo)評價本實(shí)驗(yàn)室條件下建立的IEC-6單層細(xì)胞模型的可靠性。2.復(fù)制IEC-6單層細(xì)胞模型,在第一章實(shí)驗(yàn)篩選出的菊苣成分基礎(chǔ)上,重點(diǎn)優(yōu)先選擇菊苣中含量高、專屬性相對強(qiáng)的代表性成分探討其對CNT2轉(zhuǎn)運(yùn)活性的抑制作用。在CNT2抑制劑、菊苣代表性命中成分干預(yù)下,采用高效液相法檢測IEC-6細(xì)胞單層模型基底層CNT2轉(zhuǎn)運(yùn)底物腺苷的含量,觀察菊苣單體化合物對CNT2的抑制作用,闡明菊苣減少腸道嘌呤核苷吸收的降尿酸作用機(jī)制。3.建立鵪鶉腸囊外翻模型,考察鵪鶉腸囊活性、培養(yǎng)時間、不同腸段CNT2轉(zhuǎn)運(yùn)底物量及最佳底物濃度,為驗(yàn)證菊苣單體成分對鵪鶉腸道CNT2活性的抑制作用提供可靠的模型。研究結(jié)果1.同源建模方法構(gòu)建的腸道hCNT2三維結(jié)構(gòu)合理和可靠,在一定范圍內(nèi)對不同活性的抑制劑具有一定的識別作用。2.以hCNT2模建模型為受體,以菊苣小分子化合物為配體,以陽性藥(7,8,3'-三羥基黃酮)的打分為閾值,篩選出21個得分高于陽性藥(打分閾值-8.0)的菊苣化合物。得分排名前十的化合物與hCNT2模建模型的作用模式以氫鍵和疏水作用為主。3.建立HPLC-UV測定培養(yǎng)液中腺苷含量的含量測定方法,以茶堿為內(nèi)標(biāo),以甲醇-水為流動相,梯度洗脫,方法專屬性良好,在0.7875-2.1 u g/ml的線性范圍內(nèi),R2=0.9936測定方法的加樣回收率均值在80%以上,精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性RSD值均在10%以內(nèi),符合要求。4.建立了 IEC-6單層細(xì)胞模型,利用IEC-6細(xì)胞模型觀察菊苣命中的代表性化學(xué)成分菊苣酸和山萵苣苦素對CNT2轉(zhuǎn)運(yùn)活性的影響,菊苣酸可以顯著抑制CNT2對底物腺苷的轉(zhuǎn)運(yùn)(P0.05)。研究結(jié)論:1.菊苣中含有與腸道CNT2相結(jié)合的化學(xué)成分,腸道CNT2可能是菊苣發(fā)揮降尿酸作用的靶點(diǎn)之一。2.菊苣中含有抑制腸道CNT2轉(zhuǎn)運(yùn)活性的化學(xué)成分,抑制腸道CNT2的活性減少腸道嘌呤吸收可能是菊苣發(fā)揮降尿酸的作用機(jī)制之一。
[Abstract]:In order to study the effect mechanism of the traditional Chinese medicine on the prevention and treatment of hyperuricaemia , it is possible to study the mechanism of reducing uric acid by interfering with the absorption of purine nucleoside in intestinal tract . It is expected to be a new target for the prevention and treatment of hyperuricaemia . A three - dimensional structure model was established for the inhibition of CNT2 activity by using the method of homologous modeling .

【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1864797