本文選題：抗原嵌合受體 + 二甲雙胍�。� 參考：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景惡性腫瘤已經(jīng)成為危害人類生命健康、降低人們生活質(zhì)量的重要疾病之一,我國(guó)惡性腫瘤每年的發(fā)病率和死亡率均呈上升之勢(shì),而外科手術(shù)治療、放療和化療等傳統(tǒng)治療方法惡性腫瘤都各有其弊端,治療后都會(huì)對(duì)患者的免疫力產(chǎn)生消極的影響,對(duì)于惡性程度較高、易復(fù)發(fā)且難治的惡性腫瘤缺乏有效的治療方法,因此,尋找一種新型的、有效的治療惡性腫瘤的方法勢(shì)在必行。近年來(lái),腫瘤細(xì)胞免疫治療越來(lái)越受到科學(xué)家和醫(yī)務(wù)工作者的關(guān)注。腫瘤細(xì)胞免疫治療是一種自體細(xì)胞回輸?shù)倪^(guò)繼性免疫細(xì)胞治療手段,通過(guò)生物技術(shù)獲取腫瘤患者外周血中免疫細(xì)胞以及對(duì)患者免疫細(xì)胞的體外修飾,重新靜脈回輸至患者體內(nèi),使機(jī)體重新獲得特異性殺傷惡性腫瘤細(xì)胞的能力。腫瘤細(xì)胞免疫治療最大的優(yōu)勢(shì)就是其安全性和有效性,回輸自體細(xì)胞避免了免疫排斥反應(yīng),同時(shí),免疫修飾使免疫細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞更精確,由此看來(lái),腫瘤細(xì)胞免疫治療彌補(bǔ)了手術(shù)、化療和放療的缺點(diǎn),為惡性腫瘤的徹底根治奠定了基礎(chǔ)。抗原嵌合受體(CAR)T細(xì)胞正是基于對(duì)患者外周血T細(xì)胞進(jìn)行基因修飾,回輸體內(nèi)從而實(shí)現(xiàn)自體細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷功能,因此,CAR-T細(xì)胞免疫治療已經(jīng)成為生物治療領(lǐng)域的關(guān)注重點(diǎn),為復(fù)發(fā)、難治腫瘤患者帶來(lái)了治愈的希望;基于CD19在B淋巴細(xì)胞表面表達(dá)的特異性,CD19 CAR-T細(xì)胞治療已經(jīng)使不少患者達(dá)到了完全緩解,甚至治愈;但是,B淋巴細(xì)胞惡性腫瘤并非對(duì)CD19 CAR-T細(xì)胞治療均敏感,如何提高CD19 CAR-T細(xì)胞的治療效果成為很多專家學(xué)者研究的重點(diǎn)。無(wú)論是在內(nèi)分泌疾病還是腫瘤治療領(lǐng)域,糖代謝已經(jīng)成為其疾病發(fā)生發(fā)展中不可忽略的一個(gè)環(huán)節(jié)。目前,有研究表明糖代謝在腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡中也有著舉足輕重的影響。而糖代謝不僅影響腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡,其對(duì)免疫細(xì)胞功能的發(fā)揮也有重要的影響。二甲雙胍,作為Ⅱ型糖尿病一線用藥,在調(diào)節(jié)糖代謝和改善胰島素抵抗方面有著突出的優(yōu)勢(shì),研究表明,二甲雙胍可以抑制腫瘤細(xì)胞糖代謝,從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),起到預(yù)防和治療的目的。然而,二甲雙胍對(duì)于CAR-T細(xì)胞的影響及作用機(jī)制迄今無(wú)人探究,因此,本課題意在研究二甲雙胍對(duì)CD19 CAR-T細(xì)胞的影響,并探討作用機(jī)制。研究目的研究二甲雙胍對(duì)CD19 CAR-T細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞毒性作用的影響,并探討其作用機(jī)制。研究方法1.采用分子生物學(xué)方法構(gòu)建PGK-EGFP-CD19 CAR慢病毒質(zhì)粒,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法進(jìn)行病毒包裝,對(duì)人外周血T淋巴細(xì)胞進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)染,流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)染率;2.CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法評(píng)估二甲雙胍對(duì)CD19 CAR-T細(xì)胞增殖的影響;3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)二甲雙胍對(duì)CD19 CAR-T細(xì)胞凋亡的影響;4.CD19 CAR-T細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞按照一定的效靶比(E:T)共培養(yǎng),流式細(xì)胞儀評(píng)估二甲雙胍對(duì)CD19 CAR-T細(xì)胞殺傷能力的影響,ELISA法檢測(cè)細(xì)胞因子的釋放;5.Western blotting驗(yàn)證二甲雙胍通過(guò)AMPK-mTOR-HIF1 α信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑影響CD19 CAR-T細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞毒性作用。研究結(jié)果1.二甲雙胍抑制CD19 CAR-T細(xì)胞增殖,并促進(jìn)其凋亡;2.二甲雙胍降低CD19 CAR-T細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的能力,抑制其細(xì)胞因子的釋放;3.二甲雙胍激活A(yù)MPK,進(jìn)而抑制mTOR的表達(dá),最終HIF1α表達(dá)下調(diào);4.AMPK抑制劑逆轉(zhuǎn)二甲雙胍的消極作用,但未影響mTOR及HIF1α的表達(dá),二甲雙胍對(duì)CD19 CAR-T細(xì)胞的作用存在AMPK依賴性。結(jié)論二甲雙胍通過(guò)AMPK-mTOR-HIF1 α信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制CD19 CAR-T細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性作用,促進(jìn)其凋亡。
[Abstract]:Tumor cell immunotherapy is one of the most important diseases in the treatment of malignant tumors . The effects of metformin on the proliferation , apoptosis and cytotoxicity of CD19 - T cells were investigated . The effects of metformin on the proliferation , apoptosis and cytotoxicity of CD19 - T cells were investigated by using molecular biology method .

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R730.51

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本文編號(hào)：1859163