本文選題：黃山石耳　切入點(diǎn)：多糖　出處：《合肥工業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：黃山石耳是生長在安徽黃山地區(qū)的一種藥食同源的地衣植物,是一種營養(yǎng)價(jià)值較高的滋補(bǔ)食材。多糖是黃山石耳的主要生物活性成分,具有增強(qiáng)機(jī)體免疫能力、抗腫瘤、抗病毒以及抗氧化等生物活性。本論文采用現(xiàn)代提取分離純化技術(shù)、結(jié)構(gòu)表征手段、分子修飾方法以及藥理活性模型對(duì)黃山石耳多糖進(jìn)行了研究,主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)黃山石耳通過熱水浸提法獲得的石耳水提粗多糖(UP,得率為5.68%)經(jīng)EDAE-Cellulose離子交換層析色譜和凝膠滲透色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化,獲得三個(gè)均一組分多糖UP1-1、UP2和UP3,相對(duì)分子量分別為2.81×105 Da、3.33×105 Da和5.05×103 Da。單糖組成分析表明,UP1-1、UP2和UP3都由甘露糖、葡萄糖和半乳糖組成,分子摩爾比分別為1.0:4.6:0.8,1.7:1.0:1.2,2.5:1.9:1.8。另外UP3還含有少量的鼠李糖、阿拉伯糖、木糖;結(jié)構(gòu)表征結(jié)果表明UP1-1主鏈主要包含(1→6)-β-D-Glcp、(1→4)-β-D-Glcp和(1→6)-β-D-Manp,在(1→6)-β-D-Manp的O-3位連有支鏈1-β-D-Glcp、(1→3)-β-D-Galp和1-β-D-Galp。UP2主鏈由(1→6)-β-D-Glcp和(1→6)-α-D-Manp組成,在(1→6)-β-D-Glcp的O-3位連有支鏈(1→6)-α-D-Galp和β-1-D-Galp。UP3主鏈包含(1→6)-β-D-Glcp、(1→6)-β-D-Manp和(1→4)-β-D-Xylp,在(1→6)-β-D-Manp和(1→4)-β-D-Xylp的O-3位連有支鏈β-1-D-Galp、β-1-L-Rhap和(1→3)-β-L-Arap。(2)采用氯磺酸-吡啶法和混合磷酸鹽試劑法分別對(duì)黃山石耳多糖UP2進(jìn)行了硫酸化和磷酸化修飾。硫酸化分子修飾結(jié)果表明,多糖UP2經(jīng)修飾后,獲得取代度為1.67的硫酸化片段UP2-S,其相對(duì)分子量為2.45×107 Da;紅外光譜實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在1250 cm-1、813 cm-1和588 cm-1處吸收峰的增強(qiáng)分別是由不對(duì)稱的S=O鍵伸縮振動(dòng)、對(duì)稱的C-O-S拉伸振動(dòng)和O-S-O的不對(duì)稱變形引起的,以上都證實(shí)了-OSO3-1基團(tuán)的加入,硫酸基成功與多糖UP2結(jié)合。磷酸化分子修飾結(jié)果表明,共獲得9個(gè)磷酸化片段,其中,在磷酸化試劑(三聚磷酸鈉與三偏磷酸鈉質(zhì)量比為6:1)、p H=7、反應(yīng)溫度為90℃、反應(yīng)時(shí)間為4 h的反應(yīng)體系下,獲得取代度最大為0.836的磷酸化衍生片段UP2-P,紅外光譜實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在1260 cm-1和1110cm-1處的特征吸收峰分別歸因于P=O鍵和P-O-C的伸縮振動(dòng),再次驗(yàn)證了多糖UP2磷酸化修飾的成功。(3)采用體外生物活性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了黃山石耳各多糖片段的免疫調(diào)節(jié)活性和抗腫瘤活性,并分析了其構(gòu)效關(guān)系。通過多糖體外刺激巨噬細(xì)胞RAW264.7進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)活性的研究,研究結(jié)果表明多糖UP1-1、UP2和UP3均能夠增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的增殖活性、中性紅吞噬活性,以及促進(jìn)NO產(chǎn)生量的增加。體外抗腫瘤活性研究表明,多糖組分UP1-1、UP2和UP3對(duì)肝癌細(xì)胞Hep G2具有不同程度的腫瘤抑制活性。硫酸化衍生多糖在所有濃度下,均顯示出較高的體外抗腫瘤活性,當(dāng)UP2-S濃度達(dá)到200μg/m L時(shí),腫瘤抑制率達(dá)到最大為50.36%,是相同濃度下的UP2的腫瘤抑制率的2.4倍。UP2-P對(duì)肝癌細(xì)胞Hep G2具有不同程度的腫瘤抑制活性,其中UP2-P5在各個(gè)濃度下均具有較好的抗腫瘤活性,最高抑制率可達(dá)40.80%。本研究結(jié)果對(duì)黃山石耳多糖的開發(fā)及應(yīng)用具有一定的指導(dǎo)意義。
[Abstract]:Mount Huangshan stone ear is a kind of medicinal and edible lichens grow in Anhui Mount Huangshan area, is a kind of high nutrition nourishing ingredients. Polysaccharides are the main bioactive components in Mount Huangshan stone ear, can enhance immune ability, antitumor, antiviral, antioxidant and other biological activity. This paper uses modern extraction and separation and purification technology, structural characterization, molecular modification and pharmacological activity model to study Mount Huangshan stone fungus polysaccharide, the main results are as follows: (1) Mount Huangshan stone ear by hot water extraction from stone ear water extraction of crude polysaccharide (UP was 5.68%) chromatography and gel permeation chromatography separation purified by EDAE-Cellulose ion exchange, three homogeneous polysaccharides UP1-1, UP2 and UP3, the relative molecular weight of 2.81 * 105 Da respectively, 3.33 Da and 5.05 x 105 x 103 Da. monosaccharide composition analysis showed that UP1-1, UP2 and UP3 鐢辯敇闇茬硸,钁¤悇緋栧拰鍗婁鉤緋栫粍鎴，

本文編號(hào)：1713198