本文選題：刮瘀　切入點(diǎn)：腰椎間盤(pán)突出癥　出處：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的(1)在既往研究的基礎(chǔ)上,采用腰椎間盤(pán)突出癥(LIDH)大鼠模型,用特定的刮痧方法進(jìn)行干預(yù),深入探討刮痧治療LIDH神經(jīng)調(diào)節(jié)功能、抗炎、提高免疫力等作用效應(yīng);(2)利用蛋白質(zhì)組學(xué)iTRAQ標(biāo)記的液質(zhì)聯(lián)用技術(shù),觀察刮瘀干預(yù)LIDH大鼠模型背根神經(jīng)節(jié)(DRG)組織中的差異蛋白質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化,探討刮痧治療LIDH密切相關(guān)的網(wǎng)絡(luò)途徑和可能作用靶點(diǎn),尋找與LIDH相關(guān)的標(biāo)志性內(nèi)容物,為揭示刮痧治療效應(yīng)機(jī)制提供客觀依據(jù),為臨床合理應(yīng)用刮痧法治療LIDH提供依據(jù)。方法(1)效應(yīng)實(shí)驗(yàn)研究將72只雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、刮痧組,每組24只。采用自體髓核移植法建立腰椎間盤(pán)突出癥大鼠模型。刮痧組于造模后第5天開(kāi)始刮痧,假手術(shù)組及模型組不予干預(yù)措施。分別于造模后第4天(干預(yù)前)、干預(yù)后第6天、干預(yù)后第12天、干預(yù)后第18天(干預(yù)結(jié)束后)麻醉處死取材。利用HE染色法檢測(cè)大鼠背根神經(jīng)節(jié)的形態(tài)學(xué)變化,利用免疫組化法檢測(cè)大鼠背根神經(jīng)節(jié)中神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、P物質(zhì)(SP)、炎性細(xì)胞因子磷脂酶A2(PLA2)和前列腺素E2(PGE2)的含量。應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)大鼠血清中免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)的含量。(2)蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)研究36只雄性SD大鼠為研究對(duì)象,進(jìn)行腰椎間盤(pán)突出造模,造模后隨機(jī)分為6組,刮痧Ⅰ組,刮痧Ⅱ組,刮痧Ⅲ組,模型Ⅰ組,模型Ⅱ組,模型Ⅲ組,每組各6只。模型組不予治療,刮痧組于造模后第5天開(kāi)始刮痧。刮痧Ⅰ組,刮痧Ⅱ組,刮痧Ⅲ組分別進(jìn)行1周、2周、3周的刮痧干預(yù)。模型Ⅰ組,模型Ⅱ組,模型Ⅲ組分別進(jìn)行1周、2周、3周的觀測(cè)。各組干預(yù)或觀測(cè)結(jié)束后分別采集大鼠的背根神經(jīng)節(jié)標(biāo)本。運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法,以TMT標(biāo)記結(jié)合LC-MS/MS法,找到各組背根神經(jīng)節(jié)差異蛋白表達(dá)譜,應(yīng)用GO和IPA軟件,找出刮痧干預(yù)LIDH機(jī)制相關(guān)的生物標(biāo)志物。結(jié)果(1)效應(yīng)實(shí)驗(yàn)研究① 背根神經(jīng)節(jié)病理切片結(jié)果假手術(shù)組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞形態(tài)正常,無(wú)炎癥免疫反應(yīng)。模型組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞明顯腫脹,胞內(nèi)尼氏小體顏色變淺,胞漿呈空泡樣改變,細(xì)胞核部分消失,炎癥免疫反應(yīng)明顯。刮痧組少數(shù)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞空泡變性,少數(shù)神經(jīng)細(xì)胞溶解,炎癥免疫反應(yīng)與形態(tài)學(xué)改變較模型組程度明顯減輕。②與假手術(shù)組相比,模型組的NGF、SP、PLA2、PGE2、IgG和IgM的表達(dá)維持在較高水平,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),不同治療時(shí)間(6、12、18天)刮痧組的SP、PLA2、PGE2、IgG和IgM的表達(dá)水平與模型組相比明顯降低(P0.05),時(shí)間越長(zhǎng),降低越明顯,且各組間兩兩比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。不同治療時(shí)間(6、12、18天)刮痧組NGF的表達(dá)水平與模型組相比明顯升高(P0.01),時(shí)間越長(zhǎng),升高越明顯,且各組間兩兩比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)研究刮痧干預(yù)后各組背根神經(jīng)節(jié)中共鑒定出453種差異蛋白,刮痧Ⅰ組/模型Ⅰ組差異蛋白表達(dá)上調(diào)89個(gè)蛋白,下調(diào)81個(gè)蛋白;刮痧Ⅱ組/模型Ⅱ組差異蛋白表達(dá)上調(diào)56個(gè)蛋白,下調(diào)88個(gè)蛋白;刮瘀組Ⅲ組/模型Ⅲ組差異蛋白表達(dá)上調(diào)58個(gè)蛋白,下調(diào)81個(gè)蛋白。差異蛋白生物功能分析在分子功能上主要涉及粘合物,催化活性,結(jié)構(gòu)分子活性,轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性,信號(hào)傳感器活性,分子功能調(diào)節(jié)劑等;在生物進(jìn)程上主要涉及細(xì)胞進(jìn)程,生物調(diào)節(jié),代謝進(jìn)程,細(xì)胞組成組織,刺激反應(yīng)等。差異蛋白功能主要涉及凋亡、細(xì)胞形態(tài)、神經(jīng)傳遞、神經(jīng)細(xì)胞的粘附、蛋白質(zhì)合成、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)、小分子化合物等多方面。通路分析主要涉及整連蛋白信號(hào)通路、ILK信號(hào)通路、肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架信號(hào)和三磷酸肌醇合成通路等;得到細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞功能和維護(hù)、細(xì)胞間信號(hào)與相互作用、小分子生物化學(xué)、氨基酸代謝、炎癥反應(yīng)、蛋白質(zhì)合成等亞網(wǎng)絡(luò)分析圖譜。刮痧Ⅰ組/模型Ⅰ組篩選出SOD1、HTT、EFNA3、AGT、TNF等10個(gè)上游因子。刮痧Ⅱ組/模型Ⅱ組篩選出SOD1、HTT、EPO、APP、NGF等10個(gè)上游因子。刮痧Ⅲ組/模型Ⅲ組篩選出SOD1、HTT、ILK、MAPK1、IL1B等10個(gè)上游因子。結(jié)論(1)效應(yīng)實(shí)驗(yàn)研究刮痧可以有效減輕大鼠背根神經(jīng)節(jié)的病理?yè)p傷,抑制背根神經(jīng)節(jié)中炎性因子SP的表達(dá),促進(jìn)背根神經(jīng)節(jié)中NGF的增長(zhǎng),同時(shí)有效抑制背根神經(jīng)節(jié)局部炎癥因子PLA2和PGE2以及血清免疫物質(zhì)IgG和IgM的表達(dá),起到神經(jīng)修復(fù)、抗炎和神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)的作用。(2)蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)研究刮痧干預(yù)后模型大鼠體內(nèi)發(fā)生多種蛋白差異變化,參與神經(jīng)元細(xì)胞增殖、凋亡、免疫、代謝等多條通路和亞網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié),篩選出其上游調(diào)節(jié)因子,提示其可能作為刮痧的潛在治療靶點(diǎn)。這些可能是刮痧治療腰椎間盤(pán)的作用機(jī)制。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R244.4

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本文編號(hào)：1683930