本文選題：細(xì)胞凋亡　切入點：心肌梗死　出處：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景與目的心肌梗死后,氧化應(yīng)激誘發(fā)的心肌細(xì)胞凋亡是心室重構(gòu)發(fā)生的重要原因,而同樣由氧化應(yīng)激誘發(fā)的線粒體自噬也參與了心肌梗死后病理進(jìn)程,但其作用具有心肌保護或損傷的"雙重性"。依據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)氣血理論創(chuàng)立的益氣活血方是臨床常用治療心肌缺血的經(jīng)驗方,具有益心益氣,活血通脈的功效。前期研究表明益氣活血方可以有效改善心肌梗死患者臨床癥狀與心功能,改善冠脈微循環(huán)障礙。對心梗患者的心功能恢復(fù)起到積極作用,近年來,隨著對自噬這一現(xiàn)象研究的深入,發(fā)現(xiàn)自噬在諸多生理病理過程中發(fā)揮廣泛的生物學(xué)作用。因此,本研究從心肌梗死后心肌細(xì)胞凋亡與線粒體自噬的變化情況,研究益氣活血方防治心肌損傷的作用機理。方法1運用結(jié)扎SD大鼠冠狀動脈左前降支的方法復(fù)制心肌梗死動物模型,隨機分為模型組、益氣活血方組、培哚普利組,并設(shè)置假手術(shù)組,共4組。各組于術(shù)后第2天開始分別灌胃相應(yīng)藥物,每日一次,觀察治療后7、28天兩個時間節(jié)點相關(guān)指標(biāo)的變化。2檢查各時間節(jié)點心肌梗死大鼠心臟功能、結(jié)構(gòu)變化,評估心梗模型復(fù)制的成功情況及益氣活血方對心梗大鼠心功能的影響。3光鏡觀察心肌梗死大鼠心臟組織細(xì)胞病理結(jié)構(gòu),透射電鏡觀察線粒體結(jié)構(gòu)、形態(tài)的變化以及自噬小泡的數(shù)量,探究益氣活血方對心梗大鼠心肌的保護作用及對心肌線粒體自噬的影響。4用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法檢測心梗大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)變化,探究益氣活血方對心梗大鼠抗氧化能力的影響。5用蛋白質(zhì)印跡法(WesternBlotting)和實時熒光定量法(RT-PCR)檢測心肌梗死邊緣區(qū)組織中自噬相關(guān)蛋白微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(LC3)、Beclin1mRNA及蛋白表達(dá)水平的變化,觀察心梗大鼠心肌線粒體自噬變化及益氣活血方對其的影響。6采用蛋白質(zhì)印跡法觀察細(xì)胞色素(CytC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表達(dá)情況,評價大鼠心肌梗死心肌細(xì)胞凋亡變化及益氣活血方對其影響。結(jié)果實驗研究包括5個部分實驗一,益氣活血方對心梗后心功能的影響情況:與假手術(shù)組相比,模型組大鼠左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)、左室短軸率(LVFS)明顯下降,左室收縮末期內(nèi)徑(LVIDs)、左室舒張末期內(nèi)徑(LVIDd)明顯增加,左室舒張末期容積(EDV)、左室收縮末期容積(ESV)明顯增加(P0.01)。7天時,與模型組比較,給藥組LVEF,LVFS明顯升高,差異明顯(P0.01 或 P0.05),LVIDs、LVIDd,EDV、ESV 呈縮減趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。28天時,與模型組比較,給藥組LVEF,LVFS明顯升高,EDV、ESV縮減,差異明顯(P0.05)。益氣活血方組LVIDs,LVIDd明顯縮減(P0.05),培哚普利組LVIDd明顯縮減(P0.05),LVIDs縮減但無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)果表明,心肌梗死后左心室擴張,舒縮功能下降,運用益氣活血方可以減輕左心室擴張,改善左心室舒縮功能,對心梗后的心功能恢復(fù)起積極作用。實驗二,益氣活血方對心肌梗死模型大鼠梗死邊緣區(qū)心肌組織細(xì)胞及線粒體形態(tài)的影響:光鏡顯示:7天時,假手術(shù)組大鼠心肌細(xì)胞排列整齊,紋理清晰,偶有斷裂,心肌纖維結(jié)構(gòu)清楚,未見明顯炎性細(xì)胞浸潤;心肌梗死組大鼠心肌細(xì)胞排列紊亂,紋理走向不確定,可見灶性心肌纖維走形中斷,心肌細(xì)胞核溶解、消失,大量炎性細(xì)胞浸潤;益氣活血組病理性改變與心肌梗死組相似,但病變范圍減小,培哚普利組病理性改變與模型組相類似,但病變的范圍與模型組相比較有所減小。28天時,假手術(shù)組心肌細(xì)胞核排列整齊,紋理清晰,心肌纖維結(jié)構(gòu)清楚,與7天的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)無明顯區(qū)別;心肌梗死組大鼠心肌細(xì)胞排列紊亂,紋理走向不確定,可見大量灶性心肌纖維走形中斷;培哚普利組大鼠心肌細(xì)胞增生明顯,重新排列較規(guī)整,較心肌梗死組病變范圍減小,與7天的相比兩用藥組病理表現(xiàn)有所減輕。電鏡顯示:7天時,模型組線粒體空泡化明顯,有自噬體形成.,用藥組可見少量自噬泡,較模型組減輕。28天時,模型組線粒體數(shù)量異常增生,形態(tài)紊亂,空泡化明顯,自噬泡少見;用藥組線粒體結(jié)構(gòu)較清晰,可見自噬泡,較模型組明顯。結(jié)果表明,心肌梗死后,大鼠心肌細(xì)胞發(fā)生死亡、間質(zhì)纖維化等病理改變,心肌細(xì)胞線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)破壞明顯,自噬現(xiàn)象隨時間增加逐漸減少。結(jié)果表明,益氣活血方可以減輕心肌細(xì)胞死亡,減輕心肌細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)破壞,并隨著時間增加增加自噬現(xiàn)象的發(fā)生。實驗三,探究益氣活血方對心肌缺血模型大鼠血清抗氧化相關(guān)分子SOD、GSH-Px的影響:與假手術(shù)組相比,模型組大鼠SOD,GSH-PX明顯下降,差異明顯(P0.01)。與模型組比較,益氣活血方組,培哚普利組SOD,GSH-PX明顯升高,差異明顯(P0.01或P0.05)。結(jié)果表明心肌梗死后,大鼠抗氧化能力下降,運用益氣活血方可以增加大鼠抗氧化能力。實驗四,探究益氣活血方對心肌梗死大鼠梗死邊緣區(qū)心肌組織自噬相關(guān)分子LC3、Beclin1基因、蛋白表達(dá)的影響:在基因表達(dá)方面,7天時,與假手術(shù)組大鼠相比,心肌梗死組LC3、Beclin1基因表達(dá)顯著升高(P0.01);與心肌梗死組大鼠相比,益氣活血方組LC3基因表達(dá)有下降趨勢但無統(tǒng)計學(xué)差異,Beclin1基因表達(dá)降低,培哚普利組L C3、Beclin1基因表達(dá)降低。28天時,與假手術(shù)組大鼠相比,心肌梗死組LC3、Beclin1基因表達(dá)顯著升高(P0.01);與心肌梗死組大鼠相比,益氣活血方組與培哚普利組LC3、Beclin1基因表達(dá)顯著升高(Pall0.01)。在蛋白表達(dá)方面,7天時,與假手術(shù)組大鼠相比,心肌梗死組LC3A、LC3B、Beclin1蛋白表達(dá)均顯著升高(P0.01);與心肌梗死組大鼠相比,益氣活血方組與培哚普利組LC3A、LC3B、Beclin1蛋白表達(dá)均顯著下降(Pall0.01)。28天時,與假手術(shù)組大鼠相比,心肌梗死組LC3A、LC3B、Beclin1蛋白表達(dá)均顯著升高(P0.01);與心肌梗死組大鼠相比,益氣活血方組與培哚普利組LC3A、LC3 B、Beclin1蛋白表達(dá)均升高。結(jié)果表明,心肌梗死后,自噬蛋白與基因表達(dá)于7天時增加,28天時減少,運用益氣活血方可以于7,28天動態(tài)調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞自噬蛋白與基因表達(dá),即于7天時抑制,28天時促進(jìn)。實驗五,探究益氣活血方對心肌缺血模型大鼠梗死邊緣區(qū)心肌組織細(xì)胞凋亡相關(guān)分子CytC,caspase-3蛋白表達(dá)的影響:7天時,模型組CytC、caspase-3蛋白表達(dá)較假手術(shù)組明顯升高(P0.05),兩用藥組蛋白表達(dá)降低。28天時,模型組Cyt C、caspase-3蛋白表達(dá)較假手術(shù)組呈升高趨勢,藥物干預(yù)后呈降低趨勢,但無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果表明心肌梗死后,凋亡現(xiàn)象于7天時更為顯著,運用益氣活血方可以減輕心肌細(xì)胞凋亡。28天時雖然凋亡現(xiàn)象不顯著,但益氣活血方仍呈現(xiàn)減輕心肌細(xì)胞凋亡的作用的趨勢。結(jié)論1益氣活血方可有效改善心肌梗死大鼠心臟結(jié)構(gòu)與功能變化,提高大鼠心肌細(xì)胞抗氧化能力,抑制心肌梗死后心室重構(gòu)早期心肌細(xì)胞凋亡。2心肌細(xì)胞線粒體自噬現(xiàn)象隨時間節(jié)點改變,益氣活血方于不同時間節(jié)點分別抑制與促進(jìn)自噬,發(fā)揮心肌保護作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1625514