發(fā)布時(shí)間：2018-03-04 12:49

  本文選題：白頭翁　切入點(diǎn)：五環(huán)三萜皂苷　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：白頭翁(Pulsatilla chinensis(Bge.)Regel)為毛茛科(Ranunculaceae)白頭翁屬(Pulsatilla)植物,是常用的傳統(tǒng)中藥之一,具有清熱解毒、燥濕殺蟲和涼血止痢等功效。臨床上被廣泛地用于細(xì)菌性痢疾、阿米巴痢疾、陰道滴蟲、細(xì)菌感染和惡性腫瘤等疾病的治療。白頭翁在我國河北、內(nèi)蒙古、陜西、甘肅、安徽、河南以及湖北等省均有廣泛分布,且不同產(chǎn)地的白頭翁化學(xué)成分存在明顯差異。因此,定量和定性分析白頭翁中主要的有效成分對(duì)于藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)十分重要。中藥作為復(fù)雜成分體系,其質(zhì)量控制研究需圍繞“多成分”、“多靶點(diǎn)”的特點(diǎn)。故本研究建立了液質(zhì)聯(lián)用(UPLC-ESI-MS/MS)技術(shù)結(jié)合組織破碎法同時(shí)測定白頭翁中12個(gè)主要化學(xué)成分含量的方法,并采用主成分分析方法對(duì)不同產(chǎn)地的白頭翁進(jìn)行質(zhì)量分析,為白頭翁藥材的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。建立UPLC-Q-TOF-MS/MS法分析總結(jié)五環(huán)三萜皂苷類成分及其同分異構(gòu)體的質(zhì)譜裂解規(guī)律,并且結(jié)合全面、系統(tǒng)的五環(huán)三萜皂苷類化合物的定性分析策略,快速識(shí)別和鑒定白頭翁中五環(huán)三萜皂苷類化合物以及同分異構(gòu)體。最終鑒定出22個(gè)五環(huán)三萜皂苷類化合物,并且區(qū)分兩大類、11對(duì)同分異構(gòu)體。本研究為闡明中藥材質(zhì)量差異提供了有效的技術(shù)手段,并為富含五環(huán)三萜皂苷類成分中藥的質(zhì)量控制提供理論依據(jù),從而為全面深入地研究中藥活性化學(xué)成分與中藥藥效的相關(guān)性奠定基礎(chǔ)。白樺脂酸(Betulinic acid,BA)是一種五環(huán)三萜類有機(jī)酸,為白頭翁中主要活性成分之一。藥理學(xué)研究表明其對(duì)HIV-1型感染具有抑制作用,并且具有抗腫瘤活性。本實(shí)驗(yàn)建立借助UPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)鑒定白樺脂酸體內(nèi)外代謝物的檢測方法,并將其運(yùn)用于給藥大鼠糞便及微生物轉(zhuǎn)化的代謝物鑒定,并推斷其代謝途徑,探尋白樺脂酸在體內(nèi)的代謝過程,為白頭翁中五環(huán)三萜皂苷類成分的體內(nèi)代謝研究提供理論依據(jù)。第一部分液質(zhì)聯(lián)用法同時(shí)測定白頭翁藥材中12種主要化學(xué)成分及其主成分分析目的:建立UPLC-ESI-MS/MS方法同時(shí)測定白頭翁藥材中β-蛻皮甾酮、筋骨草甾酮C、常春藤皂苷C、刺人參皂苷S、白頭翁皂苷C、23-羥基羽扇豆-20(29)-烯-28-酸-3-O-[阿拉伯糖基-吡喃鼠李糖基]-28-O-[吡喃葡萄糖酯苷](C47H76O17)、白頭翁皂苷B4、常春藤皂苷B、白頭翁皂苷A3、α-常春藤皂苷、23-羥基白樺脂酸和常春藤皂苷元12種成分的含量,并采用主成分分析方法(PCA)對(duì)不同產(chǎn)地白頭翁進(jìn)行質(zhì)量分析,為白頭翁藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立和質(zhì)量控制提供依據(jù)。方法:采用Phenomenex Kinetex-C18色譜柱(100×3 mm,2.6mm),流動(dòng)相為甲醇含0.1%甲酸-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脫,流速為0.4m L/min,柱溫為40oC。采用電噴霧離子源進(jìn)行正、負(fù)離子模式掃描,多反應(yīng)監(jiān)測模式進(jìn)行定量測定。離子源溫度為150oC,毛細(xì)管電壓為2.0 k V,脫溶劑氣溫度為500oC,脫溶劑氣流量為800 L/Hr,錐孔氣流量為150L/Hr,霧化氣壓力為7.0 Bar,接口處加熱。結(jié)果:12種主要化學(xué)成分的峰面積和濃度在測定濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,儀器重復(fù)性、日內(nèi)和日間精密度、溶液穩(wěn)定性均符合要求。平均加樣回收率為97.6-104.2%,RSD小于4.7%。定量分析結(jié)果顯示,不同產(chǎn)地的33批白頭翁藥材中均含有刺人參皂苷S,然而其在不同產(chǎn)地藥材中的含量具有明顯的差異。PCA結(jié)果顯示,33批樣品在主成分空間中聚集成兩大類,表明產(chǎn)地對(duì)藥材的質(zhì)量差異產(chǎn)生一定的影響。結(jié)論:本研究建立的分析方法具有操作簡便、快速、專屬性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢,可應(yīng)用于白頭翁藥材中多種活性成分的同時(shí)定量測定。同時(shí),PCA法可為白頭翁藥材分類和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù),有助于合理、規(guī)范地指導(dǎo)中醫(yī)臨床用藥。第二部分基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)快速鑒定白頭翁中五環(huán)三萜皂苷類化合物目的:研究并總結(jié)五環(huán)三萜皂苷類化合物在正負(fù)離子模式下的電噴霧質(zhì)譜裂解規(guī)律,建立全面、系統(tǒng)的化合物鑒定分析策略,鑒定白頭翁中五環(huán)三萜皂苷化學(xué)成分及同分異構(gòu)體。方法:首先采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù),電噴霧離子源正、負(fù)離子模式下一級(jí)質(zhì)譜掃描、母離子掃描和子離子掃描模式,研究了8個(gè)具有代表性的五環(huán)三萜皂苷類成分對(duì)照品的質(zhì)譜裂解途徑,總結(jié)其規(guī)律。結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn),建立白頭翁屬植物五環(huán)三萜皂苷化合物的質(zhì)譜庫。通過對(duì)化合物精確質(zhì)量數(shù)、碎片離子信息和保留時(shí)間分析,鑒定白頭翁中五環(huán)三萜皂苷類化學(xué)成分。色譜柱為Agilent Poroshell 120 SB-C18色譜柱(2.1 mm×100mm,2.7μm),柱前具有配套的預(yù)柱;柱溫為40oC;流動(dòng)相為水-0.1%甲酸(A)~甲醇-0.1%甲酸(B),流速為0.3 m L/min,采用梯度洗脫方式,進(jìn)樣前預(yù)平衡10 min,進(jìn)樣量為5μL。結(jié)果:通過與對(duì)照品的色譜行為、精確質(zhì)量數(shù)和二級(jí)碎片信息對(duì)比,分別對(duì)8個(gè)五環(huán)三萜皂苷色譜峰進(jìn)行歸屬。峰3、4、7、14、17、18、21和22分別被鑒定為白頭翁皂苷B4、常春藤皂苷C、白頭翁皂苷C、常春藤皂苷B、白頭翁皂苷A3、α-常春藤皂苷、23-羥基白樺脂酸和常春藤皂苷元。同時(shí),基于化合物鑒定分析策略推斷出22個(gè)(11對(duì))五環(huán)三萜皂苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)。結(jié)論:本研究所建立的UPLC-Q-TOF-MS/MS方法靈敏度高、專屬性強(qiáng),其分析策略可為白頭翁屬其他植物以及傳統(tǒng)中藥化學(xué)成分的定性分析鑒定提供有力的技術(shù)支持,對(duì)控制中藥材質(zhì)量具有十分重要的意義。第三部分UPLC-Q-TOF-MS/MS法鑒定白樺脂酸大鼠體內(nèi)外代謝物目的:采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)對(duì)大鼠口服給予白樺脂酸后糞便中的代謝產(chǎn)物及腸道菌微生物轉(zhuǎn)化的代謝產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,并推測其代謝途徑。方法:首先,采用液-液萃取方法對(duì)生物樣品進(jìn)行預(yù)處理,UPLC-Q-TOF-MS/MS方法采集數(shù)據(jù)。第二步,運(yùn)用Metabolite Pilot 1.5軟件中的多種數(shù)據(jù)后處理技術(shù)(提取離子流色譜、多重質(zhì)量虧損過濾、碎片離子過濾和中性丟失過濾)對(duì)采集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行準(zhǔn)確快速的提取和識(shí)別,獲得代謝物的精確質(zhì)量數(shù)、元素組成和MS/MS質(zhì)譜圖。最后根據(jù)精確質(zhì)量數(shù)、相關(guān)的生物代謝轉(zhuǎn)化規(guī)律和白樺脂酸的裂解規(guī)律,對(duì)白樺脂酸的代謝產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)推斷并且利用Clog P值輔助區(qū)分同分異構(gòu)體。結(jié)果:基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù),大鼠口服給予白樺脂酸后糞便樣品及腸道菌微生物轉(zhuǎn)化樣品中除母藥外共檢測到46個(gè)代謝物,腸道菌微生物轉(zhuǎn)化樣品檢測到20個(gè)代謝物,大鼠糞便樣品檢測到35個(gè)代謝物,有7個(gè)代謝物在兩種生物樣品中均能檢測到。結(jié)論:本研究采用UPLC-Q-TOF-MS/MS檢測技術(shù),成功地識(shí)別和鑒定了大鼠口服給予白樺脂酸后糞便中的代謝物及腸道菌微生物轉(zhuǎn)化的代謝物,為白樺脂酸在體內(nèi)的代謝過程和藥理作用機(jī)制的闡明奠定了基礎(chǔ)。該方法快速、靈敏,可用于其他單體成分和中藥材進(jìn)入體內(nèi)的代謝物分析。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284.1;R285.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王鵬旭;趙麗珠;齊文;申慧玲;周春衛(wèi);袁丹;;異去氫鉤藤堿在人和大鼠腸道菌群中代謝產(chǎn)物的鑒定[J];沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2016年05期

2 寧張弛;劉振麗;宋志前;王淳;曾鴻蓮;趙思宇;舒一崧;董運(yùn)茁;劉元艷;;HPLC-QqQ-MS測定珠子參中5種皂苷類成分的含量[J];中國中藥雜志;2016年05期

3 楊林軍;謝彥云;李志鋒;李偉;何明珍;吳蓓;馮育林;楊世林;;UPLC/Q-TOF-MS/MS分析中華常春藤中的化學(xué)成分[J];中草藥;2016年04期

4 劉亞麗;宋永貴;魏韶鋒;張凌;楊世林;王萌;蘇丹;;UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS分析白頭翁皂苷B_3在大鼠腸道菌群中的代謝產(chǎn)物[J];中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2015年23期

5 詹雪艷;張燕玲;張加余;譚鵬;冀嬌嬌;董潔;劉永剛;;積雪草苷和羥基積雪草苷的電噴霧質(zhì)譜裂解機(jī)制研究[J];質(zhì)譜學(xué)報(bào);2015年04期

6 唐瑤;陳洋;曹婉鑫;;三萜皂苷結(jié)構(gòu)及應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];安徽化工;2015年02期

7 梁起棟;何明珍;歐陽輝;黃文平;郭宜城;馮育林;周欣;黃何松;楊世林;;超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法分析α-常春藤皂苷在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物[J];中草藥;2014年13期

8 馬慧;宋少江;劉菲菲;張艷;彭纓;;高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定遼東id木不同部位中5種皂苷類成分的含量[J];色譜;2014年07期

9 俞冰薈;饒毅;楊世林;魏惠珍;馮育林;金浩鑫;劉圓;;白頭翁提取物中總皂苷及皂苷類成分的測定[J];中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2014年15期

10 郭宜城;歐陽輝;何明珍;梁起棟;宋永貴;饒小勇;周欣;葉喜德;馮育林;楊世林;;UPLC/Q-TOF-MS/MS鑒定西南銀蓮花中的皂苷類成分[J];中草藥;2014年10期

，

本文編號(hào)：1565726