本文關(guān)鍵詞： 肝郁證 雄性 性腺軸 柴胡疏肝散 五子衍宗丸 作用機(jī)制　出處：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：大量研究表明中醫(yī)證候的現(xiàn)代內(nèi)涵涉及多系統(tǒng)的病理生理變化。肝郁證涉及包括神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫、消化、血液在內(nèi)的多系統(tǒng)異常�；谥嗅t(yī)肝臟與現(xiàn)代生殖系統(tǒng)相關(guān)和臨床肝郁證常涉及男性生殖系統(tǒng)疾病的背景,提出男性肝郁證可能涉及現(xiàn)代性腺功能調(diào)節(jié)異常的概念,在前期束縛肝郁證大鼠模型研究的基礎(chǔ)上,動(dòng)態(tài)觀察了模型大鼠復(fù)制不同階段的肝郁證候及性腺軸的變化;基于方證相關(guān)的原理,比較觀察中醫(yī)疏肝方(柴胡疏肝散)、補(bǔ)腎方(五子衍宗丸)及抗抑郁西藥(鹽酸氟西汀)對(duì)該模型大鼠肝郁證候及性腺功能損傷的防治效應(yīng);并從分子層面進(jìn)一步探查相關(guān)方藥對(duì)肝郁證大鼠睪丸損傷的保護(hù)作用機(jī)制。研究一肝郁證模型大鼠的性腺功能狀態(tài)及其變化方法:健康雄性wistar大鼠60只,體重210±10g,隨機(jī)分為正常對(duì)照組30只和模型組30只。模型組按照每天束縛桶束縛3h,共4周的方法,復(fù)制肝郁證模型;正常對(duì)照組不予處理。分別于實(shí)驗(yàn)第2周末、第3周末、第4周末從正常組和模型組中隨機(jī)抽取10只大鼠,10%水合氯醛(0.30ml/100g體重)腹腔麻醉,經(jīng)腹主動(dòng)脈采血并取睪丸及下丘腦等組織。檢測(cè)指標(biāo):(1)肝郁證相關(guān)的神經(jīng)-內(nèi)分泌指標(biāo):下丘腦5-羥色胺(5-HT)、血清去甲腎上腺素(NE)、血清皮質(zhì)酮(CORT);(2)性腺功能指標(biāo):1)血清性激素:促性腺激素釋放激素(GnRH)、促黃體生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、泌乳素(PRL)、睪酮(T)、雌二醇(E2);2)性腺器官:睪丸濕重及臟器指數(shù)、睪丸HE觀察。每周觀察并記錄各組大鼠一般外觀表征(行為狀態(tài)、活躍程度、情緒反應(yīng)、飲食狀態(tài)等)及體重的變化。結(jié)果:(1)肝郁證模型大鼠中醫(yī)證候?qū)W相關(guān)指標(biāo)的變化:與正常組相比,模型組大鼠第2周、第3周、第4周的行為狀態(tài)、活躍程度、情緒反應(yīng)和飲食情況的評(píng)分均明顯升高,體重1周末～4周末均顯著降低(p0.01);下丘腦5-HT水平2周末明顯降低,3周末和4周末明顯升高(p0.01);血清NE和C0RT水平在2周末～4周末均明顯升高(p0.01或p0.05)。(2)肝郁證模型大鼠性腺功能的變化:與正常組相比,模型組大鼠的血清GnRH在2周末和3周末均明顯增高(p0.01),4周末明顯降低(p0.01);FSH、LH在2周末～4周末均明顯降低(p0.01或p0.05),PRL、E2在2周末～4周末均明顯升高(p0.01或p0.05),T在3周末和4周末明顯降低(p0.01);睪丸重量在2周末～4周末均明顯下降,病理?yè)p傷評(píng)分2周末～4周末明顯升高(p0.01或 p0.05)。結(jié)論:慢性束縛應(yīng)激法復(fù)制4周的肝郁證模型大鼠表現(xiàn)出與中醫(yī)肝郁證類(lèi)似的外觀變化和相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的異常,并伴有性腺軸功能的調(diào)節(jié)異常和睪丸的損傷。隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng),模型大鼠呈現(xiàn)血中GnRH、T、LH和FSH/PRL和E2則分別持續(xù)降低/升高,睪丸病理?yè)p傷逐漸加重的特點(diǎn)。提示下丘腦可能是肝郁證發(fā)展中性腺軸調(diào)節(jié)紊亂的主要部位。研究二疏肝方與補(bǔ)腎方對(duì)肝郁證雄性大鼠性腺功能的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制方法:健康雄性wistar大鼠69只,體重210±10g,隨機(jī)分為正常對(duì)照組12只,造模組57只。正常對(duì)照組不予處理,造模大鼠按照上述方法復(fù)制肝郁證模型。于造模第2周末(即造模第14天)將造模大鼠隨機(jī)分為模型組12只、柴胡疏肝散大劑量組(柴大組)12只、柴胡疏肝散小劑量組(柴小組)12只、氟西汀組(西藥組)9只、五子衍宗丸組(補(bǔ)腎組)12只。其中柴大、小劑量組分別按1.24g/kg和0.31g/kg(相當(dāng)于70kg體重成人用量的2倍和0.5倍)給予柴胡疏肝散,西藥組按1.8mg/kg(相當(dāng)于70kg體重成人用量)給予鹽酸氟西汀,補(bǔ)腎組按1.08g/kg(相當(dāng)于70kg體重成人用量)給予五子衍宗丸。每日1次,連續(xù)灌胃兩周。實(shí)驗(yàn)第4周末處死動(dòng)物及采樣,檢測(cè)指標(biāo):(1)肝郁證相關(guān)指標(biāo):1)外觀行為學(xué)指標(biāo)(同上)和曠場(chǎng)試驗(yàn);2)證候相關(guān)的神經(jīng)-內(nèi)分泌指標(biāo):下丘腦5-HT,血清NE、E、Ach、C0RT。(2)性腺軸相關(guān)指標(biāo):血清GnRH、FSH、LH、T、E、PRL;睪丸濕重及臟器指數(shù)、睪丸HE病理觀察。(3)睪丸生化及分子指標(biāo):1)線(xiàn)粒體 SOD、MDA、CytC 及 8-OHdG;2)睪丸 PKA、ERK、STAR 及 Cypllal。結(jié)果:(1)證候?qū)W變化:1)行為學(xué)變化:與正常組相比,模型組大鼠第2周～第4周的各組行為評(píng)分均明顯升高,體重明顯降低(p0.01);第2周曠場(chǎng)試驗(yàn)中的爬格數(shù)、爬行里程數(shù)及中央格停留時(shí)間均明顯增加(p0.01),第4周曠場(chǎng)試驗(yàn)中的爬格數(shù)、爬行里程數(shù)明顯減少,中央格停留時(shí)間明顯增加(p0.01)。與模型組相比,在第4周末,柴大組和柴小組大鼠的各組行為評(píng)分均明顯降低(p0.01),西藥組大鼠的行為狀態(tài),活躍程度及情緒反應(yīng)評(píng)分明顯下降(p0.01);柴大組和西藥組大鼠爬格數(shù)及爬行里程數(shù)均明顯上升,中央格停留時(shí)間明顯下降(p0.05);柴大組大鼠體重明顯增加(p.0.01),柴小組、西藥組和補(bǔ)腎組體重未見(jiàn)明顯差異。2)神經(jīng)-內(nèi)分泌指標(biāo):與正常組相比,模型組大鼠下丘腦5-HT、血清NE、C0RT均明顯升高(p0.01),Ach明顯降低(p0.01)。與模型組相比,柴大組大鼠下丘腦5-HT、血清NE、C0RT均明顯降低(p0.01),Ach明顯升高(p0.01);柴小組大鼠血清Ach明顯升高,NE明顯降低;西藥組和補(bǔ)腎組大鼠血清NE、E、CORT均明顯降低(p0.01)。(2)性腺軸相關(guān)指標(biāo):與正常組相比,模型組大鼠血中GnRH、LH、T均明顯降低(p0.01),PRL、E2明顯升高,睪丸重量明顯降低,病理?yè)p傷評(píng)分明顯升高(p0.01)。與模型組相比,柴大組大鼠血中 GnRH、LH、T 均明顯升高(p0.01 或 p0.05),PRL、E2 明顯降低(p0.01),睪丸重量明顯升高(p0.01),病理?yè)p傷評(píng)分明顯降低(p0.01);柴小組大鼠血中PRL和E2明顯降低(p0.01);西藥組大鼠血中LH明顯升高(p0.05),PRL和E2明顯降低(p0.01或p0.05);補(bǔ)腎組大鼠血中GnRH明顯升高,E2明顯降低(p0.01或p0.05)。(3)睪丸生化及分子指標(biāo):1)與正常組相比,模型組大鼠睪丸線(xiàn)粒體MDA、CytC、8-OHdG均明顯升高,SOD明顯降低(p0.01或p0.05)。與模型組相比,柴大組大鼠睪丸線(xiàn)粒體MDA、CytC、8-OHdG均明顯降低,SOD明顯升高(p0.01或p0.05);柴小組大鼠睪丸線(xiàn)粒體MDA明顯下降,SOD明顯上升(p0.01或p0.05);西藥組大鼠睪丸線(xiàn)粒體SOD明顯增高(p0.05)。2)與正常組相比,模型組大鼠睪丸PKA、ERK、STAR、Cypllal均明顯下降(p0.01或p0.05)。與模型組相比,柴大組大鼠睪丸PKA、ERK、STAR、Cypllal均明顯上升(p0.01或p0.05),柴小組大鼠睪丸PKA、STAR明顯上升(p0.01),西藥組大鼠睪丸ERK、STAR明顯升高(p0.05),補(bǔ)腎組大鼠睪丸PKA明顯升高(p0.01)。結(jié)論:柴胡疏肝散大、小劑量及西藥(氟西汀)對(duì)束縛肝郁模型大鼠的一般外觀行為學(xué)均有不同程度的改善作用,其中柴胡疏肝散大劑量改善作用明顯,補(bǔ)腎方(五子衍宗丸)的改善作用不明顯。柴胡疏肝散大劑量對(duì)肝郁模型大鼠性腺軸有較好的調(diào)節(jié)作用及減輕睪丸的病理?yè)p傷,其保護(hù)作用可能與減輕線(xiàn)粒體氧化應(yīng)激損傷和調(diào)節(jié)睪酮生成信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。補(bǔ)腎方和西藥對(duì)模型大鼠性腺軸損傷的個(gè)別或部分指標(biāo)有一定的改善作用。該研究結(jié)果為揭示中醫(yī)"疏肝方與肝郁證相關(guān)"的科學(xué)內(nèi)涵提供了一定的生物學(xué)證據(jù),對(duì)認(rèn)識(shí)肝郁證性腺生殖系統(tǒng)的病生理學(xué)機(jī)制、論證中醫(yī)辨證論治中方證相關(guān)(因證用方)經(jīng)驗(yàn)的合理性提供了實(shí)證依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1501958