本文關(guān)鍵詞： 乳腺癌 Nrf2 阿霉素 耐藥　出處：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：背景化療是乳腺癌治療方案的重要組成部分,能夠殺傷或控制體內(nèi)微小腫瘤病灶。乳腺癌對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性是患者腫瘤復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致治療失敗的主要原因。目前含阿霉素類(lèi)的化療方案使用廣泛,成為乳腺癌患者術(shù)后輔助化療一線藥物。但臨床上阿霉素類(lèi)的耐藥現(xiàn)象發(fā)生率相當(dāng)高。據(jù)研究報(bào)道,Nrf2信號(hào)通路與腫瘤耐藥相關(guān),而Nrf2與乳腺癌阿霉素耐藥的相關(guān)研究較少。因此對(duì)Nrf2與乳腺癌阿霉素耐藥的相關(guān)性進(jìn)行深入研究非常必要。目的通過(guò)Nrf2-siRNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株MCF7/ADR,初步研究Nrf2對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性(增殖、凋亡)的影響,并探索Nrf2的表達(dá)水平與乳腺癌阿霉素耐藥相關(guān)性;應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測(cè)經(jīng)Nrf2-siRNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的MCF-7/ADR細(xì)胞株與對(duì)照組MCF-7/ADR細(xì)胞株之間的基因表達(dá)譜差異,篩選耐藥相關(guān)基因,探討與乳腺癌耐藥相關(guān)的Nrf2潛在下游基因。本研究促進(jìn)對(duì)乳腺癌耐藥機(jī)制的了解,在增加乳腺癌化療敏感性及提高乳腺癌化療療效方面,有較大意義。方法本研究選擇MCF-7/ADR細(xì)胞株作為研究對(duì)象,經(jīng)Nrf2-RNAi成功穩(wěn)定轉(zhuǎn)染MCF7/ADR細(xì)胞株,沉默Nrf2目的基因表達(dá)。通過(guò)熒光顯微鏡下觀察4計(jì)算轉(zhuǎn)染效率并應(yīng)用Real time PCR檢測(cè)siRNA對(duì)Nrf2 mRNA的干擾效率。成功轉(zhuǎn)染后通過(guò)表柔比星(表阿霉素)藥物實(shí)驗(yàn)、MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡;基因芯片檢測(cè)經(jīng)Nrf2-siRNA成功轉(zhuǎn)染后的MCF-7/ADR細(xì)胞株與對(duì)照組細(xì)胞株基因表達(dá)譜的差異,篩選出基因差異倍數(shù)(|FC|)1.5倍的差異基因,結(jié)合生物信息學(xué)及基因差異的顯著性,篩選出與乳腺癌細(xì)胞耐藥相關(guān)的基因。并初步探討差異基因在pathway信號(hào)通路的富集及GO分析(Gene Ontology Analysis)。結(jié)果1、慢病毒成功轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞MCF-7/ADR細(xì)胞,經(jīng)過(guò)穩(wěn)定傳代后,以RT-PCR檢測(cè)干擾組與對(duì)照組Nrf2 mRNA相對(duì)表達(dá)量,結(jié)果發(fā)現(xiàn),相對(duì)于陰性對(duì)照組,干擾組中Nrf2基因敲減效率達(dá)到54.3%,符合表達(dá)譜芯片實(shí)驗(yàn)的要求(p0.05);2、表柔比星作用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Nrf2-shRNA的MCF-7/ADR細(xì)胞(KD)及對(duì)照組細(xì)胞株(NC)后,MTT法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Nrf2-shRNA轉(zhuǎn)染的MCF-7/ADR細(xì)胞較對(duì)比組細(xì)胞在多個(gè)表柔比星藥物濃度中增殖較為緩慢,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、接著以流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩株細(xì)胞的凋亡率,結(jié)果發(fā)現(xiàn)乳腺癌耐藥細(xì)胞株轉(zhuǎn)染Nrf2-siRNA后,對(duì)表柔比星的耐藥性發(fā)生逆轉(zhuǎn),對(duì)表柔比星更敏感,轉(zhuǎn)染Nrf2-siRNA后的細(xì)胞株凋亡率更高(P0.05)4、通過(guò)基因芯片檢測(cè)成功敲除目的基因(穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Nrf2-shRNA)前后MCF-7/ADR細(xì)胞株差異表達(dá)基因,共篩選出具有差異倍數(shù)(|FC|)1.5的基因878個(gè),涉及多種分子功能,參與多個(gè)生物學(xué)過(guò)程。其中表達(dá)上調(diào)的基因341個(gè),表達(dá)下調(diào)的基因537個(gè)。結(jié)合生物信息學(xué)及基因差異顯著性,篩選出與乳腺癌細(xì)胞耐藥相關(guān)的關(guān)鍵基因,下調(diào)的基因主要包括RAC1、ASNS、NRP1以及SNAI2等,上調(diào)的基因主要為PHLPP2等。結(jié)論1.本研究結(jié)果表明,通過(guò)沉默Nrf2基因表達(dá),可提高乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株對(duì)阿霉素的敏感性(P0.05),證實(shí)了Nrf2與乳腺癌阿霉素耐藥性相關(guān)。2.乳腺癌耐藥是一個(gè)及其復(fù)雜的過(guò)程,通過(guò)基因芯片技術(shù)并結(jié)合生物信息學(xué)方法篩選出具有顯著差異性的基因,其中差異較顯著的有RAC1、ASNS、NRP1、SNAI2及PHLPP2等,為Nrf2下游基因的研究提供方向。
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【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1495651