本文關(guān)鍵詞： 葉黃素 結(jié)腸癌 細(xì)胞增殖 抗氧化酶 p38　出處：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:結(jié)腸癌是一種較為常見的消化道惡性腫瘤,目前在我國的發(fā)病率已經(jīng)位于各大腫瘤發(fā)生率的第四位,消化道腫瘤發(fā)生率的第三位。其發(fā)病極其隱蔽,相當(dāng)多的患者在確診時(shí)已經(jīng)是中晚期。但是,目前針對結(jié)腸癌治療的手段十分單一,主要依靠手術(shù)切除治療,再以放化療藥物輔助治療。而治療結(jié)果并不十分理想,行結(jié)腸切除術(shù)后5年患者存活率僅有50%,并伴極高的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。各種放化療藥物的多次使用不僅給患者的心理造成了極大的痛苦,也給機(jī)體帶來了不可修復(fù)的永久性損傷。因此,尋找天然有效的植物源化合物,用于藥物預(yù)防和治療結(jié)腸癌,減小放、化療的不良反應(yīng),輔助提高患者生存率,具有十分重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。葉黃素,一種天然植物黃體素,作為一種抗氧化的植物化合物,可以幫助機(jī)體猝滅單線態(tài)氧,清除活性氧自由基,阻止其對生物膜的侵害,延緩機(jī)體衰老,并且能夠?qū)寡趸瘧?yīng)激、炎癥和血管生成,對包括皮膚癌、胃癌、前列腺癌、食管癌和乳腺癌等多種癌癥均有抑制作用,對腫瘤的預(yù)防具有重要實(shí)用意義。本實(shí)驗(yàn)旨在探究葉黃素通過調(diào)節(jié)人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞抗氧化酶的高表達(dá)抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用機(jī)制,為結(jié)腸癌的預(yù)防及治療提供新的理論依據(jù)。方法:1.CCK-8法檢測并繪制HT29細(xì)胞連續(xù)8 d生長曲線;2.不同劑量葉黃素對HT29細(xì)胞增殖抑制作用的影響。采用CCK-8法檢測終濃度分別為40、80、120、160 mg·L-1的葉黃素作用于HT29細(xì)胞24、48、72 h后細(xì)胞的增殖情況;3.不同劑量葉黃素對HT29細(xì)胞周期的影響。流式細(xì)胞儀檢測終濃度分別為40、80、160 mg·L-1的葉黃素作用于HT29細(xì)胞48 h后細(xì)胞周期的變化情況;4.不同劑量葉黃素對HT29細(xì)胞中HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表達(dá)水平的影響。終濃度分別為40、80、120、160 mg·L-1的葉黃素作用于HT29細(xì)胞48 h后,分別采用RT-q PCR技術(shù)和Western blot技術(shù)檢測細(xì)胞中HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表達(dá)水平的變化情況;5.抑制p38MAPK通路探究葉黃素對HT29細(xì)胞中Nrf2/ARE通路下游HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表達(dá)水平的變化。p38MAPK抑制劑SB203580作用于HT29細(xì)胞1 h,加入葉黃素48 h后,分別采用RT-q PCR技術(shù)和Western blot技術(shù)檢測細(xì)胞中HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表達(dá)水平的變化情況。結(jié)果:1.CCK-8法檢測結(jié)果表明:葉黃素顯著抑制HT29細(xì)胞的增殖,并存在時(shí)間-效應(yīng)和劑量-效應(yīng)關(guān)系(P0.01)。2.流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果表明:不同劑量葉黃素處理HT29細(xì)胞48 h后,HT29細(xì)胞周期受到明顯阻滯,處于G0/G1期的細(xì)胞數(shù)量顯著增加,S期比例顯著下調(diào),表明葉黃素可以將細(xì)胞生長阻斷在G0/G1期。3.RT-q PCR技術(shù)和Western blot技術(shù)檢測結(jié)果顯示:不同劑量葉黃素處理HT29細(xì)胞48 h后,細(xì)胞中抗氧化酶HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表達(dá)水平與陰性對照組相比顯著上調(diào),且具有劑量-效應(yīng)關(guān)系(P0.05),說明葉黃素可以同時(shí)在m RNA轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平上調(diào)HO-1、NQO1、SOD2基因的表達(dá)。4.RT-q PCR技術(shù)和Western blot技術(shù)檢測結(jié)果顯示:葉黃素聯(lián)合p38MAPK抑制劑SB203580作用HT29細(xì)胞48 h后,SB203580加葉黃素組HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表達(dá)水平較單獨(dú)葉黃素組明顯下調(diào)(P0.05),表明抑制劑SB203580顯著抑制葉黃素對細(xì)胞中HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表達(dá)水平的上調(diào)作用。結(jié)論:葉黃素對HT29細(xì)胞的增殖具有明顯抑制作用,其機(jī)制可能是通過阻滯HT29細(xì)胞周期,并作用于p38MAPK通路,在基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平介導(dǎo)Nrf2/ARE通路并激活其下游抗氧化酶HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白的高表達(dá),介以對抗腫瘤細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激狀態(tài),抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展。
[Abstract]:Objective : To study the effect of xanthophylls on the proliferation of HT29 cells and to provide a new theoretical basis for the prevention and treatment of colon cancer . The expression level of HO - 1 , NQO1 , SOD2 mRNA and protein in HT29 cells was significantly lower than that of negative control group ( P0.01 ) . The mechanism may be by blocking the cell cycle of HT29 and acting on the p38MAPK pathway , mediating the expression of Nrf2 / AR at the level of gene transcription and protein expression , and activating the high expression of the downstream antioxidant enzymes HO - 1 , NQO1 , SOD2 m RNA and protein to counter the oxidative stress state in tumor cells and inhibit the development of tumor .

【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R96

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本文編號：1479251