本文關(guān)鍵詞： 非小細(xì)胞肺癌 miRNA miR-191 預(yù)后 遷移 侵襲　出處：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:現(xiàn)有研究表明mi RNA在多種惡性腫瘤中存在不一樣水平的表達(dá)異常。本研究旨在探究非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中相關(guān)的miRNA,如miR-195、miR-145、miR-140-3p、mi R-191、miR-126等是否存在表達(dá)異常,并選擇在NSCLC中存在表達(dá)異常的miRNA,分析其與患者臨床病理特性的關(guān)系及對(duì)患者總生存期的影響;通過體外實(shí)驗(yàn)初步探究相關(guān)miRNA(miR-191)對(duì)A549人肺腺癌細(xì)胞的遷移、侵襲等細(xì)胞功能的影響。方法:第一部分查閱相關(guān)文獻(xiàn),確定mi R-195、miR-145、mi R-140-3p、miR-191、miR-126等可能與NSCLC相關(guān)的micro RNA作為研究對(duì)象。采用實(shí)時(shí)熒光相對(duì)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)技術(shù)檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者的癌組織及癌旁組織中miRNA的表達(dá)的差異性,初步分析各miRNA的表達(dá)量與非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)性,根據(jù)分析結(jié)果初步篩選出可能與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)的miRNA,根據(jù)篩選結(jié)果擴(kuò)大樣本驗(yàn)證初步篩選的結(jié)論,并收集標(biāo)本對(duì)應(yīng)患者的臨床病理特征資料及電話隨訪其生存情況,進(jìn)一步分析所選miRNA與非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)性。第二部分憑據(jù)第一步篩選結(jié)果,我們確定mi R-191為我們進(jìn)一步研究的對(duì)象,采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法將miRNA-NC、miR-191 inhibitor轉(zhuǎn)入A549細(xì)胞中,并根據(jù)結(jié)果分為三組,空白組(Mock)、陰性對(duì)照組(NC)、實(shí)驗(yàn)組(miR-191 inhibitor),并對(duì)各組A549細(xì)胞進(jìn)行一下研究:(1)劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞24h后的遷移能力的改變;(2)transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的侵襲能力的改變。結(jié)果:第一部分初步篩選中我們對(duì)34例nsclc患者的腫瘤組織及對(duì)應(yīng)的癌旁組織進(jìn)行rt-qpcr檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)mir-195、mir-145、mir-140-3p等mirna在腫瘤組織中的表達(dá)量與癌旁組織的表達(dá)量無明顯改變(p0.05);而相對(duì)于腫瘤組織,mir-191、mir-126兩者表達(dá)量存在差異(p0.05)。增加檢測(cè)樣本后,我們發(fā)現(xiàn)其差別趨勢(shì)仍存在,相對(duì)于癌旁組織中的表達(dá)量,mir-191在腫瘤組織的表達(dá)上調(diào)(p0.05);mir-126在腫瘤組織中的表達(dá)下調(diào)(p0.05)。收集患者臨床病理特征資料,電話隨訪患者生存狀況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后發(fā)現(xiàn):在腫瘤組織分化程度較低的和(或)存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中mir-191的表達(dá)量升高更明顯(p0.05),另外mir-191的表達(dá)量較高的患者較mir-191的表達(dá)量較低的患者的總生存期更短(p0.05);而在mir-126的臨床病理特征分析及患者總生存期的研究中并未發(fā)現(xiàn)這種不同(p0.05)。第二部分通過組織rt-qpcr檢測(cè)及相關(guān)數(shù)據(jù)分析后,我們選擇mir-191作為我們的研究對(duì)象,采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法順利將mirna-nc、mir-191inhibitor轉(zhuǎn)入a549細(xì)胞中,并根據(jù)結(jié)果分為三組,空白組(mock組)、陰性對(duì)照組(nc組)、實(shí)驗(yàn)組(mir-191inhibitor組),分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)后發(fā)現(xiàn)相對(duì)于mock組、nc組,實(shí)驗(yàn)組的mir-191的表達(dá)量下調(diào)約98%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(p0.05),而mock組和nc組中mir-191的表達(dá)量無明顯的差異(p0.05)。成功沉默mir-191后,我們采用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)沉默后的a549細(xì)胞遷移能力的改變,與空白對(duì)照(mock)及陰性對(duì)照(mir-nc)相比,沉默mir-191后a549細(xì)胞的劃痕愈合的距離顯著減小,劃痕愈合的時(shí)間顯著變長,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。采用transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)a549細(xì)胞的侵襲能力改變,發(fā)現(xiàn)相比與mock組(124.00+6.56)、mir-nc組(123.00+9.95),mir-191inhibitor組(38.33+5.69)穿過半透膜的細(xì)胞數(shù)目明顯減少,細(xì)胞侵襲能力被削弱,差異含有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:1、mi RNA在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生及發(fā)展中扮演著重要的角色,其中miR-191在非小細(xì)胞肺癌患者中表達(dá)上調(diào),與組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和患者生存期有關(guān),miR-191在組織分化程度較低者,存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者表達(dá)量更高,且miR-191高表達(dá)者總生存期更短。而miR-126在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)成下調(diào)趨勢(shì),并且它的表達(dá)量與患者的臨床病理特征及患者的總生存期無明顯的關(guān)系(p0.05)。2、根據(jù)組織實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,我們選擇miR-191作為研究對(duì)象,在體外實(shí)驗(yàn)中,沉默miR-191后,A549細(xì)胞的遷移能力減弱(p0.05),侵襲能力減弱(p0.05)。它已被證明,miR-191是非小細(xì)胞肺癌的癌基因,它可以通過增加腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移能力的方式促進(jìn)疾病的發(fā)展。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 張景航;楊曉煜;李敏;黃欣;劉翠苓;高子芬;;MicroRNA-191在T淋巴母細(xì)胞性白血病/淋巴瘤中的表達(dá)及其作用機(jī)制研究[J];中華血液學(xué)雜志;2016年04期

2 郭迪;李宏云;楊華;;miRNA-152表達(dá)與NSCLC對(duì)順鉑耐藥的關(guān)系及其機(jī)制研究[J];重慶醫(yī)學(xué);2016年10期

3 李芳瓊;王偉;張捷;孟冠敏;劉琴;趙桂芝;;基于qRT-PCR檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者血漿miR-205方法的建立及臨床應(yīng)用[J];中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2016年06期

4 孫國棟;鄭名華;田南南;楊建新;;miRNA-191對(duì)人乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲的影響[J];廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào);2015年01期

5 王永生;張頡;陳墨;李冰;況鵬;李嘉瑜;任勝祥;唐亮;周彩存;;人肺腺癌吉非替尼耐藥細(xì)胞株中微小RNA的表達(dá)譜[J];腫瘤;2012年01期

6 ;Identification of plasma microRNA-21 as a biomarker for early detection and chemosensitivity of non-small cell lung cancer[J];癌癥;2011年06期

7 李為民;陳勃江;;重視肺癌危險(xiǎn)因素 提高肺癌早期診斷水平[J];西部醫(yī)學(xué);2009年09期

8 徐衛(wèi);李建勇;陸鳳翔;;液相雜交檢測(cè)B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系miR-28的表達(dá)[J];中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2006年02期

9 管忠震,張力,李龍蕓,蔣國梁,劉敘儀,儲(chǔ)大同,趙洪云,李瑋;吉非替尼治療局部晚期或轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌在中國的臨床研究[J];癌癥;2005年08期

，

本文編號(hào)：1466241