本文關(guān)鍵詞：自噬在姜黃素誘導(dǎo)的喉癌Hep-2細(xì)胞增殖抑制中的作用　出處：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：姜黃素是姜黃的主要成分,因其抗癌和抗炎的特點(diǎn)而廣為人知。研究表明,姜黃素是廣譜抗腫瘤藥,對(duì)多種惡性腫瘤有抑制作用。此外,臨床前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和第一階段臨床試驗(yàn)證明姜黃素具有極小的毒性,即使是相對(duì)較高的劑量(12 g/天)也沒(méi)有出現(xiàn)明顯不良反應(yīng)。大多數(shù)化療藥物發(fā)揮其作用的機(jī)制是促進(jìn)細(xì)胞凋亡,而有研究表明自噬在癌癥治療中也發(fā)揮作用。姜黃素可以誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞發(fā)生自噬現(xiàn)象,而自噬在姜黃素誘導(dǎo)的喉癌細(xì)胞增殖抑制中的作用還未見(jiàn)報(bào)道,本研究以人喉癌Hep-2細(xì)胞作為研究對(duì)象,探究(1)不同濃度的姜黃素對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞的增殖抑制作用以及對(duì)自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響;(2)自噬在姜黃素誘導(dǎo)的喉癌細(xì)胞凋亡中的作用。研究方法1.MTT法檢測(cè)不同濃度的姜黃素以及3-MA處理的人喉癌Hep-2細(xì)胞的增殖抑制率,體外評(píng)價(jià)姜黃素以及3-MA對(duì)Hep-2的增值抑制作用。2.用一定濃度的姜黃素處理細(xì)胞后,Western blots檢測(cè)細(xì)胞自噬相關(guān)的蛋白(Beclin1,LC3)表達(dá)的變化,以此分析姜黃素對(duì)Hep-2細(xì)胞自噬的影響。3.使用5m M自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤預(yù)處理Hep-2細(xì)胞2h后,用40μM的姜黃素處理細(xì)胞,MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力,并與姜黃素單獨(dú)處理組比較,體外評(píng)價(jià)姜黃素聯(lián)合使用自噬抑制劑3-MA后,對(duì)Hep-2細(xì)胞的增殖抑制作用。4.通過(guò)Annexin VFITC/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)使用3-MA預(yù)處理組以及姜黃素單獨(dú)處理組對(duì)Hep-2細(xì)胞的凋亡率。5.熒光染料吖啶橙(AO)染色法定性的觀察使用3-MA預(yù)處理組以及單獨(dú)使用姜黃素組細(xì)胞自噬水平的變化。6.Western blot檢測(cè)3-MA預(yù)處理組自噬相關(guān)蛋白LC3、Beclin1,以及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2,Bax的表達(dá)水平,并與姜黃素單獨(dú)處理組以及3-MA單獨(dú)處理組相比較。研究結(jié)果1.MTT結(jié)果顯示:隨著姜黃素以及3-MA濃度的升高以及處理時(shí)間的增加,對(duì)喉癌Hep-2的抑制作用逐漸增加,呈時(shí)間-劑量-依賴性的抑制Hep-2細(xì)胞的體外增殖。2.Western blots結(jié)果顯示,隨著姜黃素濃度的升高,自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3Ⅱ的表達(dá)量升高,提示細(xì)胞自噬水平升高,并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.MTT結(jié)果顯示:使用自噬抑制劑3-MA預(yù)處理Hep-2細(xì)胞后,再以一定濃度姜黃素處理細(xì)胞,與姜黃素單獨(dú)處理組以及3-MA單獨(dú)組處理相比,喉癌細(xì)胞活力明顯下降。4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,使用3-MA預(yù)處理細(xì)胞組與單獨(dú)使用姜黃素組相比,細(xì)胞凋亡率明顯增多。5.AO吖啶橙染色法結(jié)果顯示,使用3-MA預(yù)處理可降低姜黃素引起自噬現(xiàn)象。6.Western blot結(jié)果顯示使用3-MA預(yù)處理喉癌Hep-2細(xì)胞后,Bcl-2以及Bclin-1表達(dá)水平降低,Bax蛋白表達(dá)水平升高,LC3表達(dá)減少。結(jié)論1.姜黃素能呈時(shí)間-劑量-依賴性抑制喉癌Hep-2細(xì)胞增殖,同時(shí)誘導(dǎo)喉癌Hep-2細(xì)胞發(fā)生自噬。2.使用自噬抑制劑3-MA抑制自噬后,可增強(qiáng)姜黃素對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞系的凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)
[Abstract]:Curcumin is the main ingredient of turmeric, known for its characteristics of anticancer and anti-inflammatory. Studies show that curcumin is a broad-spectrum anti-tumor drug, has inhibitory effect on many malignant tumors. In addition, preclinical animal experiments and the first phase of clinical trials proved that curcumin has minimal toxicity, even at relatively high doses (12 g/ day) there is no obvious adverse reaction mechanism. Most chemotherapy drugs play its role is to promote cell apoptosis, and studies have shown that autophagy also plays a role in the treatment of cancer. Curcumin can induce autophagy in tumor cells, and the role of autophagy in laryngeal carcinoma cell proliferation induced by curcumin inhibition has not been reported. In this study, people Hep-2 cancer cells as the research object, to explore (1) inhibition of different concentrations of curcumin on proliferation of human laryngeal carcinoma Hep-2 cells and the related protein expression of autophagy As the influence; (2) the role of autophagy in laryngeal cancer cell apoptosis induced by curcumin in 1.MTT assay. Methods different concentrations of curcumin and the proliferation of 3-MA treated human laryngeal carcinoma Hep-2 cell inhibitory rate was evaluated in vitro inhibition value.2. curcumin and 3-MA on Hep-2 with a certain concentration of curcumin in cells treated by Western blots detection of autophagy related proteins (Beclin1, LC3) expression changes, in order to analyze the effect of curcumin on autophagy in Hep-2 cells using.3. 5m M autophagy inhibitor 3- methyladenine pretreatment Hep-2 2H cells after treatment with curcumin 40 M cells, the cell viability was measured by MTT, and curcumin treatment group, in vitro evaluation of curcumin combined use of autophagy inhibitor 3-MA on the proliferation of Hep-2 cells after inhibition of.4. by Annexin VFITC/PI flow cytometry using 3-MA pretreatment group and ginger Emodin treatment alone group of apoptosis rate of Hep-2 cells.5. fluorescent dye acridine orange (AO) staining qualitative observation using 3-MA pretreatment group and the changes of.6.Western blot using autophagy in curcumin group separate detection of 3-MA pretreatment group of autophagy related protein LC3, Beclin1, and apoptosis related protein Bcl-2, Bax expression, and with curcumin treatment group and 3-MA treatment group compared separately. The results showed that 1.MTT and 3-MA increased with curcumin concentration and treatment time, inhibition on Hep-2 gradually increased, the proliferation of.2.Western blots results showed time dose dependent inhibition of Hep-2 cells showed that with increasing concentration of curcumin the expression of autophagy related protein Beclin1, LC3 II increased, elevated levels of autophagy, and has statistical significance.3.MTT results show: Pretreatment with Hep-2 cell autophagy inhibitor 3-MA, and then to a certain concentration of curcumin treated cells compared with curcumin treatment group and 3-MA alone group,.4. significantly decreased activity of laryngeal carcinoma cells by flow cytometry showed that 3-MA cells pretreated with curcumin group and single group, the apoptosis rate increased significantly.5.AO acridine orange staining results showed that 3-MA pretreatment could reduce the curcumin induced autophagy in.6.Western blot results showed that the pretreatment with 3-MA laryngeal carcinoma cells Hep-2, Bcl-2 and Bclin-1 expression decreased, Bax protein expression increased, LC3 expression decreased. Conclusion curcumin can 1. a time - dose - dependent inhibition of proliferation of Hep-2 cells. At the same time inducing laryngeal cancer Hep-2 cell autophagy.2. using autophagy inhibitor 3-MA inhibiting autophagy, can enhance the effect of curcumin on laryngeal cancer cell line Hep-2. Induction effect

【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285

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本文編號(hào)：1361552