本文關(guān)鍵詞：用于修復(fù)放射性腸纖維化的MMP-3基因修飾干細(xì)胞的研究　出處：《長春工業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目前,人類腫瘤的發(fā)生率極高,放射治療是其重要的醫(yī)學(xué)治療手段,然而對于腹腔、盆腔等身體部位,這種治療方式會(huì)產(chǎn)生一定的副作用,一定的輻射強(qiáng)度下會(huì)引發(fā)放射性腸炎,繼而引起腸道內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)成分(ECM)的過度沉積,發(fā)生放射性纖維化,腸纖維化的發(fā)生和發(fā)展嚴(yán)重影響患者愈后水平和生活質(zhì)量�；|(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)可以降解ECM,是重塑組織結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵酶,進(jìn)而修復(fù)腸道組織。然而體內(nèi)的MMP-3表達(dá)十分有限,機(jī)體不能主動(dòng)修復(fù)完全,因而大量表達(dá)MMP-3可以作為放射性腸纖維化修復(fù)實(shí)驗(yàn)研究的靶點(diǎn)。本研究以小鼠軟骨RNA為模板,克隆MMP-3基因,構(gòu)建EGFP標(biāo)記的MMP-3慢病毒表達(dá)載體(LV-MMP-3-EGFP),修飾小鼠胚胎干細(xì)胞(ES)和骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSCs);給予10GyX射線照射成纖維細(xì)胞(3T3),構(gòu)建纖維化模型,將轉(zhuǎn)染后的干細(xì)胞與纖維化細(xì)胞共培養(yǎng),熒光顯微鏡下觀察GFP綠色熒光蛋白,及共培養(yǎng)后纖維化細(xì)胞的形態(tài)變化,并用Western Blot檢測MMP-3和TGF-β蛋白表達(dá)�，F(xiàn)已成功構(gòu)建慢病毒表達(dá)載體LV-MMP-3-EGFP,且成功轉(zhuǎn)染GP2-293T細(xì)胞,ES細(xì)胞和BM-MSCs細(xì)胞;病毒感染的ES細(xì)胞中MMP-3蛋白表達(dá)高于對照組;病毒感染的ES細(xì)胞與3T3細(xì)胞共培養(yǎng)后,實(shí)驗(yàn)組與對照組中TGF-β蛋白表達(dá)無顯著變化;病毒感染的BM-MSCs細(xì)胞與10 Gy X射線照射后的3T3細(xì)胞共培養(yǎng)后,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞密度發(fā)生變化。此結(jié)果表明LV-MMP-3-EGFP修飾的干細(xì)胞能夠大量表達(dá)MMP-3蛋白,對放射后3T3細(xì)胞的異常增殖產(chǎn)生了抑制作用,細(xì)胞形態(tài)向正常形態(tài)發(fā)展,纖維化細(xì)胞發(fā)生修復(fù),但是對3T3細(xì)胞中TGF-β表達(dá)沒有顯著影響。本研究為放射性腸纖維化的臨床實(shí)驗(yàn)研究提供了理論基礎(chǔ)和新的方向。
【學(xué)位授予單位】：長春工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R730.55

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1326175