發(fā)布時間：2017-12-24 00:34

  本文關(guān)鍵詞：用于修復(fù)放射性腸纖維化的MMP-3基因修飾干細胞的研究　出處：《長春工業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 基質(zhì)金屬蛋白酶3 干細胞 慢病毒載體 放射 纖維化

【摘要】：目前,人類腫瘤的發(fā)生率極高,放射治療是其重要的醫(yī)學(xué)治療手段,然而對于腹腔、盆腔等身體部位,這種治療方式會產(chǎn)生一定的副作用,一定的輻射強度下會引發(fā)放射性腸炎,繼而引起腸道內(nèi)細胞外基質(zhì)成分(ECM)的過度沉積,發(fā)生放射性纖維化,腸纖維化的發(fā)生和發(fā)展嚴重影響患者愈后水平和生活質(zhì)量。基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)可以降解ECM,是重塑組織結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵酶,進而修復(fù)腸道組織。然而體內(nèi)的MMP-3表達十分有限,機體不能主動修復(fù)完全,因而大量表達MMP-3可以作為放射性腸纖維化修復(fù)實驗研究的靶點。本研究以小鼠軟骨RNA為模板,克隆MMP-3基因,構(gòu)建EGFP標記的MMP-3慢病毒表達載體(LV-MMP-3-EGFP),修飾小鼠胚胎干細胞(ES)和骨髓來源間充質(zhì)干細胞(BM-MSCs);給予10GyX射線照射成纖維細胞(3T3),構(gòu)建纖維化模型,將轉(zhuǎn)染后的干細胞與纖維化細胞共培養(yǎng),熒光顯微鏡下觀察GFP綠色熒光蛋白,及共培養(yǎng)后纖維化細胞的形態(tài)變化,并用Western Blot檢測MMP-3和TGF-β蛋白表達。現(xiàn)已成功構(gòu)建慢病毒表達載體LV-MMP-3-EGFP,且成功轉(zhuǎn)染GP2-293T細胞,ES細胞和BM-MSCs細胞;病毒感染的ES細胞中MMP-3蛋白表達高于對照組;病毒感染的ES細胞與3T3細胞共培養(yǎng)后,實驗組與對照組中TGF-β蛋白表達無顯著變化;病毒感染的BM-MSCs細胞與10 Gy X射線照射后的3T3細胞共培養(yǎng)后,實驗組細胞形態(tài)和細胞密度發(fā)生變化。此結(jié)果表明LV-MMP-3-EGFP修飾的干細胞能夠大量表達MMP-3蛋白,對放射后3T3細胞的異常增殖產(chǎn)生了抑制作用,細胞形態(tài)向正常形態(tài)發(fā)展,纖維化細胞發(fā)生修復(fù),但是對3T3細胞中TGF-β表達沒有顯著影響。本研究為放射性腸纖維化的臨床實驗研究提供了理論基礎(chǔ)和新的方向。
【學(xué)位授予單位】：長春工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R730.55

【參考文獻】

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本文編號：1326175