發(fā)布時間：2017-12-23 09:09

  本文關(guān)鍵詞：人乳頭瘤病毒33亞型L1蛋白的重組表達及免疫原性鑒定　出處：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 宮頸癌 人乳頭瘤病毒 重組表達系統(tǒng) L1重組蛋白 病毒樣顆粒

【摘要】：宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率僅比乳腺癌低。該病的發(fā)生與人乳頭瘤病毒(Human papillomavius,HPV)的感染關(guān)系很密切。HPV屬于乳頭瘤病毒科(Papillomaviridae)、乳頭瘤空泡病毒A屬,是一類沒有囊膜的雙鏈小分子DNA病毒。該病毒種屬特異性嚴(yán)格,主要感染人的皮膚和粘膜組織,并引起相應(yīng)部位上皮組織的增生性病變。HPV病毒的主要衣殼蛋白L1可以自組裝成病毒樣顆粒(virus-like particles,VLPs),該顆粒結(jié)構(gòu)與天然病毒顆粒相似,能夠誘導(dǎo)機體發(fā)生免疫反應(yīng)產(chǎn)生保護性抗體,因此體外表達的L1蛋白自組裝形成的VLPs可以作為HPV預(yù)防性疫苗使用。目前已上市的HPV預(yù)防性疫苗主要來源于昆蟲細胞或酵母細胞,但是其生產(chǎn)工藝復(fù)雜,免疫成本高,因此新的更為經(jīng)濟的HPV L1蛋白的制備方法是目前HPV疫苗研究的熱點。本研究分別采用水稻胚乳表達系統(tǒng)和大腸桿菌表達系統(tǒng)對HPV33 L1蛋白進行表達,旨在尋找一種更為經(jīng)濟的HPV33 L1蛋白的制備方法。本研究結(jié)合水稻胚乳生物反應(yīng)器的優(yōu)點,將HPV33 L1基因轉(zhuǎn)入植物表達系統(tǒng),成功構(gòu)建含有HPV33 L1基因的植物表達載體,這為實現(xiàn)HPV33 L1蛋白在水稻胚乳表達系統(tǒng)中的表達奠定了基礎(chǔ)。同時,本研究成功構(gòu)建含有HPV33 L1基因的原核重組表達載體PE-HPV33-L1,采用化學(xué)轉(zhuǎn)化法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌感受態(tài)細胞BL21制備重組表達菌株,然后通過優(yōu)化誘導(dǎo)劑IPTG的濃度、誘導(dǎo)時間以及誘導(dǎo)溫度等條件,篩選出最佳誘導(dǎo)條件。在IPTG濃度0.3 mmol/L、溫度18℃、培養(yǎng)時間16 h條件下,L1重組蛋白在大腸桿菌中的可溶性表達量最高,約240mg/L,經(jīng)Ni-NTA親和色譜法純化可獲得純度達90%的目的蛋白。電鏡檢測結(jié)果顯示HPV33 L1蛋白在體外能自發(fā)形成VLPs,用純化的HPV33 VLPs免疫昆明鼠,然后用酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-linked imumunosorbent assay,ELISA)分析免疫效果,結(jié)果顯示小鼠免疫后血清效價約達1:89600,這說明通過大腸桿菌獲得的HPV33 L1 VLPs能有效刺激機體產(chǎn)生高滴度的特異性抗體,為HPV33疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R373

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本文編號：1323268