本文關(guān)鍵詞：降膽固醇乳酸菌的篩選及其對(duì)高脂飲食小鼠的影響　出處：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：近年來(lái)隨著人們生活水平的不斷提高和日常飲食結(jié)構(gòu)的改變,膽固醇攝入過(guò)高已經(jīng)導(dǎo)致了種種健康問(wèn)題,例如心腦血管疾病,因此降低人體中的膽固醇含量對(duì)人類(lèi)的健康非常重要。本研究的主要內(nèi)容是從泡菜、酸奶、發(fā)酵香腸等傳統(tǒng)發(fā)酵食品中分離純化出多株乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB),并通過(guò)體外降膽固醇實(shí)驗(yàn)進(jìn)行篩選,挑選出其中降膽固醇效果較好的幾株菌進(jìn)行酸耐受性、膽鹽耐受性以及細(xì)胞吸附能力的測(cè)定,并從中篩選出一株綜合性能較好的菌株作為目標(biāo)菌株。然后,對(duì)目標(biāo)菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生理生化及遺傳學(xué)鑒定,并檢測(cè)目標(biāo)菌株對(duì)高脂飲食小鼠的影響,為菌株的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用奠定科學(xué)的理論基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)利用梯度稀釋、平板劃線(xiàn)等方法從樣品中分離純化得到具有產(chǎn)酸能力、革蘭氏陽(yáng)性和過(guò)氧化氫酶陰性的79株乳酸菌菌株。(2)體外降膽固醇能力的測(cè)定。將活化的各菌株接種到高膽固醇培養(yǎng)基(MRS-CHO,含100μg/m L膽固醇、0.2%膽鹽、0.1%巰基乙酸鈉)中厭氧培養(yǎng),利用鄰苯二甲醛方法測(cè)定上清液中膽固醇的含量,計(jì)算膽固醇的去除率。篩選結(jié)果顯示菌株LPN5、LP130、LP96、LPZ、LPB、LP37、LP157、LP183、LPN21和LP192B具有較強(qiáng)的降膽固醇能力,這10株菌株通過(guò)16S rDNA序列分析進(jìn)行了初步鑒定,其中菌株LPN5、LP130、LP96、LPZ和LPB屬于植物乳桿菌,LP37、LP157、LP183、LPN21和LP192B屬于戊糖片球菌。(3)酸耐受性、膽鹽耐受性以及細(xì)胞吸附能力的測(cè)定。將活化后的菌株分別接種到含有0.1%、0.2%、0.3%膽鹽的MRS培養(yǎng)基和pH3.0的MRS培養(yǎng)基中培養(yǎng)3h,計(jì)算菌株的存活率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)這十株菌對(duì)酸(pH3.0)的耐受性都較好(存活率在80%以上);菌株LP96和LP157對(duì)膽鹽的耐受性最高,在含有0.3%膽鹽的培養(yǎng)基中存活率分別為25.07%、25.36%;菌株LP37、LPN21、LP96對(duì)細(xì)胞的吸附能力較強(qiáng),在每個(gè)細(xì)胞上平均吸附的菌體數(shù)分別為145.67、140.26、73.21。綜合分析以上結(jié)果,菌株LP96的綜合性質(zhì)比較好,被選作目標(biāo)菌株進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。(4)目標(biāo)菌株的鑒定。通過(guò)進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生理生化和遺傳學(xué)鑒定,目標(biāo)菌株LP96被鑒定為植物乳桿菌。(5)菌株LP96體外降膽固醇機(jī)制的初步研究。將不同狀態(tài)下的LP96菌體進(jìn)行降膽固醇主要作用的分析,研究不同培養(yǎng)基中培養(yǎng)的LP96對(duì)超聲波的抗性,結(jié)果表明不同狀態(tài)下的菌體降膽固醇的機(jī)制不同,培養(yǎng)基中的膽固醇可以提高菌體對(duì)超聲波的抗性。(6)目標(biāo)菌株對(duì)高脂飲食小鼠的影響。將菌株LP96活化后,制成不同濃度的菌懸液,每天按照小鼠的分組進(jìn)行處理。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行6周,實(shí)驗(yàn)中每周稱(chēng)量小鼠體重。在實(shí)驗(yàn)的最后一天,小鼠禁食12h后被處死,收集血液、肝臟、腎臟、脾臟和盲腸里的新鮮糞便等樣品。將樣品收集處理后,測(cè)定各個(gè)樣品的指標(biāo):血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、過(guò)氧化氫酶(CAT)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)的含量,肝組織的TC、TG的含量,新鮮糞便里的大腸桿菌、乳酸菌、雙歧桿菌的活菌數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明菌株LP96可以降低血清中TG、TC和LDL-C的含量,可以有效降低肝臟的TG、TC含量,可以有效提高血液的抗氧化能力,提高腸道維持菌群平衡的能力。(7)目標(biāo)菌株的發(fā)酵性能測(cè)定。測(cè)定菌株LP96在脫脂乳中的酸度、pH、活菌數(shù)和蛋白質(zhì)降解能力的變化情況,結(jié)果表明LP96在脫脂乳中具有發(fā)酵潛能。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R371

【參考文獻(xiàn)】

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