本文關(guān)鍵詞：孕期補充維生素D預防LPS誘發(fā)的小鼠流產(chǎn)　出處：《安徽醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關(guān)文章： 流產(chǎn) 炎癥 細菌脂多糖 維生素D受體 維生素D3

【摘要】：目的探討通過孕期補充維生素D對LPS誘發(fā)小鼠流產(chǎn)的影響。方法健康清潔級ICR小鼠(8-10周齡,其中雄鼠:28~30 g,雌鼠:24~26 g),飼養(yǎng)環(huán)境保持12小時晝夜節(jié)律,溫度維持在20~25℃,濕度維持在50±5%之間。小鼠在此環(huán)境下自由飲水飲食,合籠前進行適應性喂養(yǎng)1周。晚21:00按雌雄比例2:1進行合籠,次日早7:00進行雌鼠陰栓檢查。查到陰栓的雌鼠視為交配成功即孕鼠,記為孕期第0天即GD0。孕鼠在孕期第0天(GD 0)隨機分為4組:對照組,Vit D3組,LPS組和Vit D3+LPS組。Vit D3組和Vit D3+LPS組孕鼠于GD5至GD7每天經(jīng)灌胃給予25μg/kg的維生素D3乳化劑;對照組和LPS組于GD5-7給予等容量單純?nèi)榛瘎?LPS組和Vit D3+LPS組于GD7經(jīng)腹腔注射給予150μg/kg的LPS;對照組和Vit D3組與GD7經(jīng)腹腔注射給予等容量的生理鹽水。GD8剖殺各組孕鼠,記錄每窩孕鼠子宮內(nèi)胚胎著床總數(shù)以及胚胎存活個數(shù)。發(fā)生一個或一個以上胚胎丟失的即胚胎存活數(shù)小于胚胎著床數(shù)的記為流產(chǎn)孕鼠;無胚胎著床數(shù)或胚胎組織碎片的為未懷孕鼠,需將其從實驗中剔除。最后分別計算四個組孕鼠流產(chǎn)率,并進行比較。為研究Vit D3對LPS引起母體內(nèi)炎癥反應的影響,將孕鼠隨機分為六組(對照組,Vit D3組,LPS2h組和Vit D3+LPS 2h組,LPS 6h組和Vit D3+LPS 6h組)。GD7經(jīng)腹腔注射給予150μg/kg LPS和等容量生理鹽水2 h和6 h后分別剖殺各組孕鼠,收集母鼠血清與子宮連胎。用ELISA法檢測孕鼠母體血清中TNF-α、IFN-γ、MIP-2、NO和PGF2α的蛋白水平,用免疫組織化學分析方法檢測子宮蛻膜細胞中COX-2、NF-κB p65和VDR的蛋白表達。結(jié)果在LPS組中經(jīng)LPS處理后引起62.5%(10/16)的孕鼠發(fā)生流產(chǎn);在Vit D3+LPS組中進行了維生素D3預處理后,流產(chǎn)率降低至14.3%(2/14)。通過小鼠流產(chǎn)模型實驗中可得出,孕早期補充維生素D3可一定程度降低LPS誘發(fā)的小鼠流產(chǎn)發(fā)生率。通過ELISA法檢測孕鼠血清中炎性因子TNF-α,IFN-γ,趨化因子MIP-2和NO的蛋白水平。LPS組母鼠血清中TNF-α、IFN-γ、MIP-2和NO的蛋白水平顯著高于對照組;Vit D3+LPS組母鼠血清中TNF-α、IFN-γ、MIP-2和NO的蛋白水平顯著低于LPS組。該實驗結(jié)果表明通過孕早期補充Vit D3可減輕LPS誘導的母體內(nèi)相關(guān)炎癥反應。通過免疫組織化學分析法發(fā)現(xiàn),LPS組母鼠子宮蛻膜細胞中COX-2的表達顯著高于對照組;Vit D3+LPS組中母鼠子宮蛻膜細胞中COX-2的表達顯著低于LPS組。通過ELISA法檢測孕鼠血清中PGF2α的蛋白水平,LPS組母體血清中PGF2α的含量顯著高于對照組;Vit D3+LPS組中母體血清中PGF2α的含量顯著低于LPS組。以上實驗結(jié)果表明,孕早期補充維生素D3可以減少LPS誘導母鼠子宮蛻膜細胞中COX-2的表達并且有效降低母鼠血清中PGF2α的含量。通過ELISA法檢測母體血清中IL-10蛋白含量,實驗結(jié)果顯示單純維生素D3處理組中母體血清中IL-10蛋白含量與對照組相比無顯著差異;LPS處理組中母鼠血清中IL-10的含量顯著高于對照組;Vit D3+LPS組中IL-10含量顯著高于LPS處理組。該結(jié)果表明,維生素D可進一步促進LPS組中孕鼠母體血清中抗炎因子IL-10的升高。通過免疫組織化學法分析,Vit D3組中母鼠子宮蛻膜細胞中VDR的核表達顯著高于LPS組和對照組;LPS組中母鼠子宮蛻膜細胞中NF-κB p65的核表達顯著高于對照組,Vit D3+LPS組中母鼠子宮蛻膜細胞中NF-κB p65的核轉(zhuǎn)運與LPS組相比有所降低。該結(jié)果表明,小鼠灌胃給予維生素D3可以激活子宮蛻膜中VDR的核表達并通過抑制LPS誘導的NF-κB p65在子宮蛻膜細胞中的核轉(zhuǎn)運來減輕母體內(nèi)炎癥反應,從而降低流產(chǎn)發(fā)生率。結(jié)論孕期補充維生素D3可通過抑制LPS誘發(fā)的相關(guān)炎癥反應來降低小鼠流產(chǎn)的發(fā)生率。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R714.21

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Kamal AS Al-Shoumer;Thamer M Al-Essa;;Is there a relationship between vitamin D with insulin resistance and diabetes mellitus?[J];World Journal of Diabetes;2015年08期

，

本文編號：1319843