本文關(guān)鍵詞：巖藻聚糖硫酸酯的腸吸收及其藥代動(dòng)力學(xué)初步研究　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：巖藻聚糖硫酸酯多來(lái)源于褐藻和海洋無(wú)脊椎動(dòng)物中,是一類富含巖藻糖的硫酸雜多糖。目前,關(guān)于巖藻聚糖硫酸酯的生物學(xué)活性已有廣泛研究,其生物學(xué)活性主要包括:抗腫瘤、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗血栓、免疫調(diào)節(jié)、肝臟及腎臟保護(hù)功能。雖然對(duì)巖藻聚糖硫酸酯的生物學(xué)活性已有較多研究,但巖藻聚糖硫酸酯的口服吸收情況卻鮮有報(bào)道。通常認(rèn)為多糖作為一種大分子物質(zhì)很難被口服吸收利用,然而,近年來(lái)的一些研究表明裙帶菜來(lái)源的巖藻聚糖硫酸酯、海蘊(yùn)來(lái)源的巖藻聚糖硫酸酯、茶樹(shù)花多糖等大分子多糖均可以通過(guò)口服被吸收利用。然而,海帶來(lái)源的巖藻聚糖硫酸酯是否能被口服吸收?口服吸收率如何?吸收機(jī)制是什么?至今未見(jiàn)報(bào)道。我國(guó)海帶資源豐富,對(duì)海帶來(lái)源的巖藻聚糖硫酸酯進(jìn)行吸收及其藥代動(dòng)力學(xué)研究不僅有利于海帶資源的高值化開(kāi)發(fā),而且為巖藻聚糖硫酸酯在保健品和藥品中的應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)采用FITC熒光標(biāo)記的方式建立了一種新型巖藻聚糖硫酸酯含量測(cè)定的方法,然后以FITC-巖藻聚糖硫酸酯為原料,通過(guò)單向灌流法在體腸吸收實(shí)驗(yàn)和Caco-2細(xì)胞transwell小室模型實(shí)驗(yàn)對(duì)巖藻聚糖硫酸酯的吸收情況及其機(jī)制進(jìn)行探討,并對(duì)其在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征進(jìn)行初步探究,具體研究?jī)?nèi)容包括以下幾個(gè)方面:1、熒光標(biāo)記巖藻聚糖硫酸酯可以提高含量測(cè)定方法的靈敏度和特異性采用FITC將巖藻聚糖硫酸酯標(biāo)記,提高其檢測(cè)的靈敏度和特異性,并用熒光分光光度計(jì)和高效液相色譜確證了標(biāo)記實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。在熒光標(biāo)記的基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)利用高效液相色譜,并使用熒光檢測(cè)器,建立了外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法測(cè)定巖藻聚糖硫酸酯含量的方法,并分別對(duì)其方法學(xué)進(jìn)行了研究,結(jié)果表明外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法測(cè)定巖藻聚糖硫酸酯含量的方法均符合中國(guó)藥典的規(guī)定,且外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法的檢測(cè)限分別為0.05μg/mL和0.5 μg/mL,可以滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需的檢測(cè)靈敏度。2、巖藻聚糖硫酸酯可以被腸道吸收分別選取10 cm長(zhǎng)度的十二指腸、空腸和回腸,將其兩端剪開(kāi)一個(gè)小口并插管。以0.01 mg/mL、0.1 mg/mL和1 mg/mL三種濃度的巖藻聚糖硫酸酯進(jìn)行單向灌流,通過(guò)檢測(cè)流出液中巖藻聚糖硫酸酯的減少量以判斷其在大鼠不同腸段的吸收情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,巖藻聚糖硫酸酯在空腸中吸收最好,回腸次之,十二指腸最差,說(shuō)明巖藻聚糖硫酸酯主要吸收部位為空腸和回腸。另外,高濃度的巖藻聚糖硫酸酯的表觀滲透系數(shù)比低濃度低,存在高濃度抑制現(xiàn)象,說(shuō)明巖藻聚糖硫酸酯的吸收可能是依賴于載體的轉(zhuǎn)運(yùn)。3、巖藻聚糖硫酸酯通過(guò)胞吞的形式被Caco-2細(xì)胞吸收建立了 Caco-2細(xì)胞transwell小室模型,并用TEER電阻儀檢測(cè)了細(xì)胞模型的緊密性。采用Caco-2細(xì)胞transwell小室模型檢測(cè)了巖藻聚糖硫酸酯在腸道細(xì)胞中的吸收和外排作用,結(jié)果表明該藥物在小室模型中吸收量總體較少,但可以檢測(cè)到其吸收值,且吸收作用大于外排作用,推斷巖藻聚糖硫酸酯可以通過(guò)腸道進(jìn)入血液循環(huán)。此外,本實(shí)驗(yàn)還通過(guò)Caco-2細(xì)胞transwell小室模型探究了轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間、樣品濃度、轉(zhuǎn)運(yùn)溫度以及抑制劑對(duì)其吸收的影響。轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間對(duì)巖藻聚糖硫酸酯吸收的影響實(shí)驗(yàn),選用30、60、90、120、180、240 min作為吸收研究的時(shí)間點(diǎn),結(jié)果表明,在吸收時(shí)間達(dá)到120min時(shí),表觀滲透系數(shù)達(dá)到最大值,其后的吸收過(guò)程逐漸趨于平穩(wěn)。樣品濃度對(duì)巖藻聚糖硫酸酯的影響實(shí)驗(yàn),分別研究了0.01 mg/mL、0.1 mg/mL和1 mg/mL三種濃度的巖藻聚糖硫酸酯的轉(zhuǎn)運(yùn)情況,結(jié)果表明高濃度巖藻聚糖硫酸酯的吸收率明顯低于低濃度巖藻聚糖硫酸酯的吸收率,說(shuō)明巖藻聚糖硫酸酯的吸收可能是依賴于載體的轉(zhuǎn)運(yùn)。轉(zhuǎn)運(yùn)溫度對(duì)巖藻聚糖硫酸酯吸收的影響實(shí)驗(yàn),溫度分別選用了 4℃和37℃,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,巖藻聚糖硫酸酯在37℃下可以被腸道吸收,而在4℃條件下,幾乎不被吸收,說(shuō)明巖藻聚糖硫酸酯的吸收是一個(gè)耗能過(guò)程。網(wǎng)格蛋白抑制劑對(duì)巖藻聚糖硫酸酯吸收的影響實(shí)驗(yàn),通過(guò)加入網(wǎng)格蛋白抑制劑鹽酸氯丙嗪抑制網(wǎng)格蛋白的功能,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,加入抑制劑后巖藻聚糖硫酸酯幾乎沒(méi)有被吸收,推測(cè)巖藻聚糖硫酸酯可能通過(guò)網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的胞吞作用被腸道吸收。4、巖藻聚糖硫酸酯的藥代動(dòng)力學(xué)特征將巖藻聚糖硫酸酯配制成10 mg/mL的樣品溶液,按照大鼠體重給藥,大鼠口服給藥采用灌胃給藥的方式,給藥劑量為20 mg/kg,靜脈給藥采用尾靜脈注射給藥的方式,給藥劑量為6 mg/kg。在口服給藥和靜脈給藥的0、0.5、1、2、3、4、6、12和24h后,將0.3 mL血液從尾靜脈中連續(xù)取出,并收集到具有0.45 mg EDTA的抗凝管中。通過(guò)10%的三氯乙酸沉淀蛋白和無(wú)水乙醇醇沉多糖的方式對(duì)血漿樣品進(jìn)行含量測(cè)定前處理,并采用高效液相色譜內(nèi)標(biāo)法檢測(cè)巖藻聚糖硫酸酯的含量。結(jié)果表明巖藻聚糖硫酸酯在2 右可以達(dá)到最高血藥濃度7.33 μg/mL,其口服生物利用度為2.67%。綜上所述,本課題以FITC-巖藻聚糖硫酸酯為原料,通過(guò)細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明海帶來(lái)源的巖藻聚糖硫酸酯可以被腸道吸收,且在細(xì)胞層面的吸收作用大于外排作用,其吸收機(jī)制可能為依賴于網(wǎng)格蛋白的胞吞作用。藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)表明巖藻聚糖硫酸酯能夠進(jìn)入血液循環(huán),口服生物利用度為2.67%。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

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