本文關(guān)鍵詞：辛伐他汀逆轉(zhuǎn)KRAS基因突變所致結(jié)腸癌細(xì)胞對(duì)西妥昔單抗的耐藥研究　出處：《大連醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:西妥昔單抗(cetuximab)抗EGFR的治療已經(jīng)被推薦作為晚期結(jié)直腸癌KRAS基因野生型患者的一線治療方案,而KRAS突變型患者對(duì)其治療耐藥。BRAF突變狀態(tài)也可以作為EGFR抑制劑治療的預(yù)測(cè)指標(biāo),突變型患者治療反應(yīng)較差。為了使更多患者從西妥昔單抗靶向治療中獲益,迫切需要解決西妥昔單抗耐藥及提高療效的方法。目前,許多研究發(fā)現(xiàn)辛伐他汀(simvastatin)具有抗腫瘤作用。因此,本實(shí)驗(yàn)旨在研究辛伐他汀能否逆轉(zhuǎn)KRAS基因突變所致的西妥昔單抗耐藥及提高BRAF基因突變者使用西妥昔單抗的有效率,并探討其具體分子機(jī)制。方法:本研究選取含有KRAS基因突變型的DLD-1、LOVO細(xì)胞系及BRAF基因突變型的RKO、HT-29細(xì)胞系作為研究對(duì)象,經(jīng)過正常培養(yǎng)基、西妥昔單抗單藥、辛伐他汀單藥、西妥昔單抗及辛伐他汀兩藥聯(lián)合處理后,主要通過MTT法、AnnexinV/PI雙染法、Western blot法檢測(cè)辛伐他汀在體外克服結(jié)腸癌細(xì)胞對(duì)西妥昔單抗的耐藥、提高療效及具體分子機(jī)制。結(jié)果:1.辛伐他汀聯(lián)合西妥昔單抗處理KRAS基因突變型的人結(jié)腸癌DLD-1細(xì)胞系,可以提高其對(duì)西妥昔單抗的敏感性。然而,辛伐他汀與西妥昔單抗聯(lián)合處理對(duì)BRAF基因突變型的人結(jié)腸癌RKO細(xì)胞系無作用。對(duì)于DLD-1細(xì)胞系,cetuximab單藥處理組較simvastatin聯(lián)合cetuximab處理組細(xì)胞增殖率由0.8821±0.0041減少至0.6987±0.0054,受到明顯抑制(P0.001);LOVO細(xì)胞系兩組細(xì)胞增殖率由0.9065±0.0074減少至0.7198±0.0069,受到明顯抑制(P0.001);而對(duì)于RKO細(xì)胞系,cetuximab單藥組及simvastatin聯(lián)合cetuximab處理組的細(xì)胞增殖率分別為1.039±0.0561及1.013±0.0491,無抑制作用(P0.05),HT-29細(xì)胞系的兩組細(xì)胞增殖率分別為 0.8742±0.0057 及 0.8585±0.0058,無抑制作用(P0.05)。2.simvastatin聯(lián)合cetuximab處理可以促進(jìn)DLD-1細(xì)胞凋亡(P0.05),流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示聯(lián)合加藥組相對(duì)于cetuximab單藥組的總凋亡細(xì)胞比例從9.59%增加至28.22%。而對(duì)于RKO細(xì)胞系,聯(lián)合加藥對(duì)細(xì)胞凋亡無促進(jìn)作用(P0.05),結(jié)果顯示總凋亡細(xì)胞比例相對(duì)于單藥組無明顯增多,分別為5.54%和7.49%。相關(guān)凋亡蛋白表達(dá)結(jié)果顯示對(duì)于DLD-1細(xì)胞系,simvastatin聯(lián)合cetuximab處理組相較與cetuximab單藥組,抗凋亡蛋白Bcl-xl表達(dá)下降,凋亡前蛋白Bad表達(dá)升高。而RKO細(xì)胞系經(jīng)simvastatin聯(lián)合cetuximab處理較cetuximab單藥處理,Bcl-xl及Bad表達(dá)無明顯變化。3.對(duì)于DLD-1細(xì)胞系,simvastatin不同濃度處理后,BRAF及p-ERK1/2的表達(dá)逐漸降低,并且作用濃度越高,BRAF及p-ERK1/2的表達(dá)越低,具有濃度依賴性;simvastatin不同作用時(shí)間處理后,BRAF及p-ERK1/2的表達(dá)逐漸降低,并且作用時(shí)間越長(zhǎng),BRAF及p-ERK1/2的表達(dá)越低,具有時(shí)間依賴性,RAS/RAF/MEK/ERK通路的激活受到抑制。然而對(duì)于RKO細(xì)胞系,經(jīng)不同濃度或不同時(shí)間simvastatin處理后,BRAF及p-ERK1/2的表達(dá)無明顯變化。結(jié)論:1.辛伐他汀可有效地提高KRAS基因突變所致對(duì)西妥昔單抗耐藥人結(jié)腸癌細(xì)胞對(duì)西妥昔單抗的敏感性,抑制細(xì)胞增殖;2.辛伐他汀可促進(jìn)KRAS基因突變所致對(duì)西妥昔單抗耐藥的人結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡,下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-xl表達(dá),上調(diào)凋亡前蛋白Bad表達(dá);3.辛伐他汀克服西妥昔單抗耐藥的作用機(jī)制可能是抑制了RAS/RAF/MEK/ERK信號(hào)通路的激活。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.3

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 Theodore Lytras;Georgios Nikolopoulos;Stefanos Bonovas;;Statins and the risk of colorectal cancer: An updated systematic review and meta-analysis of 40 studies[J];World Journal of Gastroenterology;2014年07期

2 Mazyar Shadman;Polly A Newcomb;John M Hampton;Karen J Wernli;Amy Trentham-Dietz;;Non-steroidal anti-inflammatory drugs and statins in relation to colorectal cancer risk[J];World Journal of Gastroenterology;2009年19期

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本文編號(hào)：1317944