本文關(guān)鍵詞：衰老小鼠睪丸睪酮合成功能障礙的機(jī)制研究　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景當(dāng)前人口老齡化激發(fā)人們對于衰老以及衰老相關(guān)疾病研究的極大興趣。臨床資料表明男性衰老過程中血清睪酮水平下降與性腺機(jī)能減退等疾病發(fā)病相關(guān)。目的探討衰老相關(guān)的睪酮水平降低的機(jī)制及睪丸組織和附睪脂肪組織氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對睪丸間質(zhì)Leydig細(xì)胞睪酮合成功能的影響。方法安徽醫(yī)科大學(xué)動物中心購買不同年齡段的C57BL/6J雄性小鼠,分3組:(1)3個月齡組(young組,n=8),(2)12個月齡組(middle-aged組,n=8),(3)24個月齡組(aged組,n=8)。處死并解剖小鼠后,一側(cè)睪丸組織做成石蠟切片,免疫組織化學(xué)法觀察F4/80標(biāo)記的巨噬細(xì)胞浸潤情況和3β-HSD的表達(dá)情況;Western blotting分別檢測附睪脂肪組織中NF-k B,GRP78和抗氧化物GPx4,Mn SOD,睪丸組織中合成睪酮相關(guān)蛋白/酶,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激分子GRP78,以及SIRT1和抗氧化物Mn SOD,GPx4的蛋白表達(dá)情況;Real-time RT-PCR檢測睪丸組織中合成睪酮相關(guān)蛋白/酶m RNA的表達(dá),抗氧化物和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激分子m RNA的表達(dá)情況。結(jié)果1.組織學(xué)變化:使用抗3β-HSD單克隆抗體標(biāo)記Leydig細(xì)胞免疫組化染色結(jié)果顯示,Leydig細(xì)胞數(shù)量在三組中沒有顯著差異,而利用圖像分析軟件IPP6.0分析平均光密度發(fā)現(xiàn)3β-HSD在aged組表達(dá)強(qiáng)度明顯低于young組(p0.01)。巨噬細(xì)胞特異性抗體F4/80進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示aged組睪丸組織中的巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯高于young組(p0.01)。2.衰老相關(guān)睪酮合成蛋白酶降低:在睪丸組織中,St AR和P450scc表達(dá)水平在middle-aged組要顯著低于young組(p0.05),在aged組持續(xù)下降。Cyp17a的m RNA表達(dá)水平與young組相比middle-aged組呈現(xiàn)下降趨勢,在aged組中出現(xiàn)顯著的下降(p0.05)。Hsd17b的m RNA表達(dá)水平middle-aged組和aged組較young組呈顯著下降(p0.05)。3.衰老過程中小鼠睪丸組織抗氧化系統(tǒng)功能降低:SIRT1蛋白表達(dá)從middle-aged組開始降低,到aged組降低的程度有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。同時與young組比較,aged組和middle-aged組中Sirt1的m RNA水平明顯降低(p0.05)。在睪丸組織中,Mn SOD和GPx4蛋白的表達(dá)middle-aged組低于young組(p0.05),aged組較middle-aged組繼續(xù)下降(p0.05)。Sod2和Gpx4的m RNA水平在aged組和middle-aged組中要明顯低于young組(p0.05)。4.衰老小鼠睪丸組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志表達(dá)上調(diào):middle-aged組GRP78蛋白的表達(dá)較young組顯著升高,aged組較middle-aged組顯著增高(p0.05)。Grp78和Chop的m RNA水平表現(xiàn)相似的趨勢。5.衰老小鼠附睪脂肪組織抗氧化系統(tǒng)功能降低,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志和NF-k B表達(dá)上調(diào):aged組抗氧化物Mn SOD和GPx4的表達(dá)低于young組(p0.05),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志GRP78和促炎因子NF-k B在aged組中表達(dá)顯著增高(p0.05)。結(jié)論本課題研究結(jié)果表明老年小鼠睪丸組織睪酮合成相關(guān)蛋白/酶表達(dá)減少與衰老相關(guān)睪酮水平降低有關(guān),睪丸組織和附睪脂肪組織中存在的氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及炎性反應(yīng)可能是引起衰老相關(guān)的睪丸Leydig細(xì)胞睪酮合成能力減低的因素之一。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R339.38

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本文編號：1314649