發(fā)布時(shí)間：2017-12-20 06:27

  本文關(guān)鍵詞：四環(huán)素類抗生素多西環(huán)素對(duì)人骨髓瘤細(xì)胞的抑制作用以及相應(yīng)機(jī)制的研究　出處：《江蘇大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的多西環(huán)素(Doxycycline,DOX)是一常用的四環(huán)素類抗生素,其對(duì)多發(fā)性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)細(xì)胞的抑制作用目前尚未有報(bào)道。本研究探討DOX對(duì)MM細(xì)胞株H929和U266細(xì)胞增殖的影響及相關(guān)機(jī)制。方法1、MTT法觀察DOX對(duì)H929和U266細(xì)胞增殖的影響。共設(shè)1.25mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L六個(gè)不同的DOX濃度梯度,并設(shè)24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn);選用無DOX處理的作為陰性對(duì)照組,同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組。檢測(cè)各組不同時(shí)間點(diǎn)吸光度值,計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率。2、Western Blot法檢測(cè)DOX處理H929和U266細(xì)胞后PARP、p-Stat1、pAkt、p-Erk1/2表達(dá)。實(shí)驗(yàn)分成四組:1)對(duì)照組A:無DOX處理組。2)實(shí)驗(yàn)組B:2.5mg/L的DOX處理MM細(xì)胞株3d。3)實(shí)驗(yàn)組C:5mg/L的DOX處理MM細(xì)胞株3d。4)實(shí)驗(yàn)組D:10mg/L的DOX處理MM細(xì)胞株3d。3、MTT法測(cè)定DOX聯(lián)合Akt信號(hào)通路抑制劑哌立福辛(Perifosine)或單獨(dú)Perifosine對(duì)U266細(xì)胞增殖的影響。對(duì)于聯(lián)合處理組先單獨(dú)用Perifosine處理U266細(xì)胞4h后,換不含Perifosine的、含5mg/L DOX的培養(yǎng)液處理3d。檢測(cè)吸光度值,計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率,研究Perifosine是否影響DOX對(duì)U266細(xì)胞株的增殖抑制作用。4、Western Blot法檢測(cè)Perifosine處理U266細(xì)胞后p-Akt的表達(dá)。設(shè)Perifosine處理U266細(xì)胞株4h后立即檢測(cè)組;先Perifosine處理4h后,換不含抑制的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)3d組;持續(xù)5μM的Perifosine處理U266細(xì)胞株3d組;陰性對(duì)照組。檢測(cè)各組U266細(xì)胞p-Akt蛋白的表達(dá)水平,研究Perifosine抑制Akt作用是否可逆。5、Western Blot法檢測(cè)DOX聯(lián)合Perifosine或單獨(dú)處理U266細(xì)胞后對(duì)pAkt表達(dá)的影響。設(shè)單獨(dú)5mg/L的DOX處理3d組和Perifosine處理4h后,再單獨(dú)DOX處理3d組;以無任何藥物處理組為陰性對(duì)照組。檢測(cè)各組U266細(xì)胞pAkt表達(dá)水平,研究Perifosine是否可以抑制DOX上調(diào)p-Akt表達(dá)的作用。6、Real-time-PCR法測(cè)定DOX處理U266細(xì)胞后c-Jun和c-Fos基因表達(dá)。A組、B組、C組和D組細(xì)胞在DOX處理結(jié)束后,提取各組總RNA,測(cè)定四組細(xì)胞中c-Jun和c-Fos表達(dá)水平。結(jié)果1、不同濃度DOX分別作用MM細(xì)胞不同時(shí)間后,MTT結(jié)果表明隨著DOX濃度和時(shí)間的增加,H929和U266細(xì)胞增殖抑制率增加(P0.05),提示DOX可抑制MM細(xì)胞株H929和U266細(xì)胞的增殖,并且這種抑制作用呈現(xiàn)時(shí)間-劑量依賴關(guān)系。2、與對(duì)照組比較,DOX處理后可抑制H929和U266細(xì)胞p-Erk1/2表達(dá)(P0.05),上調(diào)H929細(xì)胞中p-Stat1表達(dá)(P0.05),而對(duì)U266細(xì)胞p-Stat1的表達(dá)和這兩種細(xì)胞株P(guān)ARP的表達(dá)無明顯改變;2.5和5mg/L濃度的DOX可以上調(diào)MM細(xì)胞株p-Akt的表達(dá)(P0.05),這一上調(diào)作用可以被Akt通路抑制劑Perifosine所阻斷,并且這種抑制Akt的作用呈現(xiàn)不可逆性。此外,MTT結(jié)果還提示Perifosine可增強(qiáng)DOX對(duì)U266細(xì)胞株的增殖抑制作用。3、Real-time-PCR結(jié)果表明:DOX處理U266細(xì)胞后c-Fos基因mRNA表達(dá)水平下調(diào)(P0.05)。結(jié)論1、DOX對(duì)H929和U266細(xì)胞的增殖有抑制作用,并且其抑制作用有明顯的時(shí)間劑量依賴性。2、DOX可以影響MM細(xì)胞中與細(xì)胞增殖有關(guān)的Erk、Stat、Akt信號(hào)通路。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R733.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1311078