本文關(guān)鍵詞：Sohlh2通過下調(diào)HIF1α抑制缺氧誘導(dǎo)上皮性卵巢癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)化轉(zhuǎn)變

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【摘要】：研究背景:在所有婦科相關(guān)腫瘤類型引起的致死病因中,卵巢癌位于第一位。正常卵巢位于女性盆腔深處,臨床上早期篩查手段效率低,卵巢癌患者確診腫瘤時(shí),多數(shù)已處于臨床晚期,故5年存活率常低于30%。上皮性卵巢癌作為卵巢癌中最常見的一種類型,多在臨床發(fā)現(xiàn)時(shí),已浸潤轉(zhuǎn)移至盆腔或腹腔其他部位,因此現(xiàn)如今常規(guī)的治療手段,如手術(shù)切除治療、化療或放療,效果并不理想。因此闡明上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展的分子調(diào)控機(jī)制,尤其是探討上皮性卵巢癌遠(yuǎn)處浸潤轉(zhuǎn)移機(jī)制對(duì)于上皮性卵巢癌的早期診斷以及治療有指導(dǎo)性意義。缺氧是公認(rèn)的腫瘤所處的微環(huán)境,是由于腫瘤細(xì)胞的無節(jié)制增長導(dǎo)致組織缺氧,進(jìn)而形成一個(gè)酸性的腫瘤微環(huán)境。尤其在實(shí)體腫瘤結(jié)構(gòu)中,缺氧部位可橫穿整個(gè)腫瘤組織。文獻(xiàn)報(bào)道,缺氧誘導(dǎo)因子(Hypoxia inducible factor,HIF)是缺氧誘導(dǎo)的重要分子,HIF可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)化轉(zhuǎn)變和遠(yuǎn)處侵襲轉(zhuǎn)移。其中,缺氧誘導(dǎo)因子1α(Hypoxia inducible factor1 α,HIF1 α)調(diào)控腫瘤酸性微環(huán)境中碳酸酐酶9(Carbonic anhydrase,CA9)的表達(dá),通過調(diào)控CO2水和反應(yīng),調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞內(nèi)外pH值,使得腫瘤細(xì)胞能夠適應(yīng)缺氧和缺氧所導(dǎo)致的酸性環(huán)境,在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和浸潤、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)揮重要作用。上皮-間質(zhì)化轉(zhuǎn)變(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)進(jìn)程對(duì)于腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及后期進(jìn)展的作用十分重要,其中就包括上皮性卵巢癌細(xì)胞。EMT可賦予上皮細(xì)胞間質(zhì)細(xì)胞表型,導(dǎo)致細(xì)胞之間的粘附性降低、能動(dòng)性增高,從而獲得侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的能力。而缺氧環(huán)境可進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的EMT。抑制缺氧誘導(dǎo)的EMT可能是抑制腫瘤侵襲遷移的重要機(jī)制。Sohlh2(Spermatogenesis and oogenesis basic helix-loop-helix(bHLH)transcription factor 2)是bHLH家族的一個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄因子。實(shí)驗(yàn)室前期研究顯示,Sohlh2在卵巢表面上皮和輸卵管上皮中表達(dá)較高,但其在上皮性卵巢癌組織中表達(dá)水平則明顯降低。過表達(dá)Sohlh2,可通過調(diào)控不同分子機(jī)制抑制上皮性卵巢癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。這一結(jié)果表明Sohlh2是一個(gè)新.的抑癌基因。另外,最新研究發(fā)現(xiàn)Sohlh2可通過下調(diào)IL-8抑制人乳腺癌細(xì)胞的EMT。但是,Sohlh2對(duì)于缺氧誘導(dǎo)的上皮性卵巢癌EMT的作用及作用機(jī)制需進(jìn)一步探討。本實(shí)驗(yàn)通過體外培養(yǎng)上皮性卵巢癌細(xì)胞,利用化學(xué)乏氧劑氯化鈷,模擬腫瘤細(xì)胞所處的缺氧微環(huán)境;通過Sohlh2基因轉(zhuǎn)染和RNA干擾,利用劃痕、Transwell遷移、Matrigel侵襲、免疫熒光染色、Western Blot等實(shí)驗(yàn)技術(shù),檢測(cè)Sohlh2在缺氧引起的上皮性卵巢癌細(xì)胞EMT及侵襲遷移中的作用,并進(jìn)一步探討其作用機(jī)制,以期可以為臨床上該類腫瘤的治療發(fā)現(xiàn)新的方向。方法施1.檢測(cè)Sohlh2在缺氧狀態(tài)下對(duì)上皮性卵巢癌細(xì)胞遷移侵襲的影響。體外培養(yǎng)人上皮性卵巢癌細(xì)胞株HO8910和SKOV3,采用基因轉(zhuǎn)染及RNA干擾技術(shù),過表達(dá)或敲減Sohlh2基因。將細(xì)胞分為以下幾組:①①HO8910-pEGFP組;②HO8910-pSohlh2 組;③SKOV3-Con 組;④SKOV3-pShSohlh2 組,①②組細(xì)胞通過G418篩選,③④組細(xì)胞通過puromycin篩選,篩選時(shí)間為兩周,構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)的Sohlh2過表達(dá)以及Sohlh2敲減細(xì)胞系。四組細(xì)胞中加入100μ M CoCl2缺氧處理48h。采用劃痕、Transwell遷移、Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn),檢測(cè)Sohlh2在缺氧狀態(tài)的上皮性卵巢癌細(xì)胞遷移侵襲中的作用。2.檢測(cè)Sohlh2對(duì)缺氧誘導(dǎo)的上皮性卵巢癌細(xì)胞上皮間質(zhì)化轉(zhuǎn)變過程的作用。采用 Western Blot 技術(shù),檢測(cè) H08910-pEGFP 組、HO8910-pSohlh2 組、SKOV3-Con組、SKOV3-pShSohlh2組細(xì)胞經(jīng)過100μM CoCl2缺氧處理48h后,上皮間質(zhì)化轉(zhuǎn)變標(biāo)志物E-cadherin、Vimentin、N-cadherin和Sohlh2蛋白表達(dá)水平的變化;采用免疫熒光技術(shù),檢測(cè)H08910-pEGFP組和HO8910-pSohlh2組細(xì)胞經(jīng)過缺氧處理后E-cadherin和Vimentin的蛋白表達(dá)水平的變化。3.探討Sohlh2在缺氧誘導(dǎo)的上皮性卵巢癌細(xì)胞EMT中的作用機(jī)制。將 HO8910-pEGFP 組、HO8910-pSohlh2 組、SKOV3-Con 組、SKOV3-pShSohlh2 組細(xì)胞分別在正常氧氣含量(25%02)及缺氧狀態(tài)(100μ MCoC12)下進(jìn)行培養(yǎng),采用Western Blot技術(shù),檢測(cè)HIF1 α和CA9的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.經(jīng)過缺氧處理48h后,與HO8910-pEGFP組相比,HO8910-pSohlh2組48小時(shí)細(xì)胞遷移的距離明顯縮短(P0.05);Transwell遷移和Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:HO8910-pSohlh2組遷移、侵襲的細(xì)胞數(shù)明顯減少(P0.05)。經(jīng)過缺氧處理48h后,與SKOV3-Con組相比,SK0V3-pShSohlh2組48小時(shí)細(xì)胞遷移的距離明顯增加(PO.05);Transwell遷移和Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:SKOV3-pShSohlh2組遷移、侵襲的細(xì)胞數(shù)明顯增多(P0.05)。2.免疫熒光結(jié)果顯示:經(jīng)過缺氧處理48h后,與HO8910-pEGFP組相比,HO8910-pSohlh2組上皮性標(biāo)志物E-cadherin蛋白表達(dá)明顯增加,Vimentin蛋白表達(dá)降低。3.經(jīng)過缺氧處理后,與HO8910-pEGFP組對(duì)比,上皮性標(biāo)志物蛋白E-cadherin表達(dá)明顯升高,間質(zhì)性標(biāo)志物Vimentin和N-cadherin蛋白表達(dá)明顯降低;與SKOV3-Con組相比,SKOV3-pShSohlh2組上皮性標(biāo)志物蛋白E-cadherin表達(dá)明顯減少,Vimentin和N-cadherin表達(dá)升高。4.在正常氧氣含量及缺氧狀態(tài)下培養(yǎng)HO8910-pEGFP組和HO8910-pSohlh2組細(xì)胞,缺氧狀態(tài)下HO8910細(xì)胞HIF1 α和CA9的蛋白表達(dá)明顯高于正常氧氣含量培養(yǎng)細(xì)胞的蛋白表達(dá)量;在正常氧氣含量和缺氧狀態(tài)下,與HO8910-pEGFP組對(duì)比,HO8910-pSohlh2組HIF1 α和CA9的蛋白表達(dá)量均明顯降低。在正常氧氣含量及缺氧狀態(tài)下培養(yǎng)SKOV3-Con組和SKOV3-pShSohlh2組,缺氧狀態(tài)下SKOV3細(xì)胞HIF1 α和CA9的蛋白表達(dá)量較正常氧氣含量培養(yǎng)細(xì)胞的蛋白表達(dá)量高;在正常氧氣含量和缺氧狀態(tài)下,與SKOV3-Con組相比,SKOV3-pShSohlh2組HIF1 α和CA9的蛋白表達(dá)量均明顯增加。結(jié)論:1.Sohlh2可抑制缺氧狀態(tài)下上皮性卵巢癌細(xì)胞的遷移侵襲;2.Sohlh2可抑制缺氧狀態(tài)下上皮性卵巢癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)化轉(zhuǎn)變;3.Sohlh2可能是通過下調(diào)HIF1 α/CA9信號(hào)通路抑制缺氧狀態(tài)下上皮性卵巢癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)化轉(zhuǎn)變。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.31

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 趙榮志;吳志浩;周清華;;上皮細(xì)胞間質(zhì)化與腫瘤的轉(zhuǎn)移[J];中國肺癌雜志;2011年07期

2 ;Expression and significance of PTEN, hypoxia-inducible factor-1 alpha in colorectal adenoma and adenocarcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2003年03期

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本文編號(hào)：1303961