本文關(guān)鍵詞：新型2-甲氧基雌二醇衍生物抗腫瘤血管生成活性的研究

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【摘要】：目的研究2-ME及其衍生物的抗血管生成作用,從衍生物中,篩選具有抗血管生成活性好,并且毒性小的新型化合物,為臨床上治療癌癥聯(lián)合輔助用藥提供研究依據(jù)。方法1.利用體內(nèi)抗血管生成模型雞胚尿囊膜法,篩選2-ME衍生物;2.采用MTT法檢測篩選出的化合物GHY對多種細(xì)胞的細(xì)胞毒作用;3.采用劃痕實(shí)驗(yàn),檢測化合物GHY在體外對HUVEC和MCF-7細(xì)胞的遷移的影響;4.運(yùn)用Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn),檢測化合物GHY對HUVEC和MCF-7細(xì)胞的遷移和侵襲的影響;5.采用Western blot法考察相關(guān)蛋白,確定化合物GHY抑制遷移侵襲作用的分子機(jī)制;6.利用裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn),考察化合物體內(nèi)抗腫瘤活性的研究,并檢測血清中與肝功能相關(guān)的酶以及對內(nèi)臟組織HE染色,評價(jià)化合物毒性。結(jié)果1.雞胚尿囊膜實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,衍生物中GHY等化合物在血管數(shù)及血管面積上與對照組比較,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.用2-ME和化合物GHY分別處理HUVEC細(xì)胞、GES細(xì)胞、MCF-7細(xì)胞、MGC-803細(xì)胞、PC-3細(xì)胞48h和72h,MTT結(jié)果顯示,2-ME對多種細(xì)胞均有細(xì)胞毒作用,而化合物GHY則未表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞毒作用,其中GHY對HUVEC細(xì)胞72h的IC50為66μM,而2-ME的72h IC50為2.11μM。3.對HUVEC細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,化合物GHY可以顯著抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4.Western blot實(shí)驗(yàn)檢測HUVEC細(xì)胞中有關(guān)蛋白的表達(dá),包括VEGF-R、FAK、p-FAK、和SHC等�；衔颎HY處理后,VEGF-R的蛋白表達(dá)下降,相應(yīng)的SHC蛋白也減少,而FAK總蛋白不變,但FAK的活性形式p-FAK表達(dá)下調(diào),最終抑制內(nèi)皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。對蛋白表達(dá)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,與對照組比較,GHY組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5.MCF-7細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,化合物GHY可以顯著抑制腫瘤細(xì)胞的遷移,并且呈濃度依賴性,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。6.在MCF-7細(xì)胞上,Western blot實(shí)驗(yàn)檢測有關(guān)EMT標(biāo)志蛋白的表達(dá),結(jié)果顯示,化合物GHY處理后,可以上調(diào)上皮表型標(biāo)志物ZO-1和E-Cadherin蛋白的表達(dá),同時(shí)下調(diào)間充質(zhì)標(biāo)志物N-Cadherin和Vimentin蛋白的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析蛋白量的表達(dá),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。說明化合物GHY抑制MCF-7細(xì)胞遷移的機(jī)制可能通過抑制EMT過程。7.MCF-7細(xì)胞的裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,化合物GHY高劑量組可以抑制腫瘤體積和瘤重的增加,與對照組比較,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表明,化合物GHY具有較好的體內(nèi)抑制腫瘤生長的作用。8.通過生化學(xué)實(shí)驗(yàn)評價(jià)肝臟毒性以及各臟器的HE染色的病理切片結(jié)果表明,化合物GHY對ALT和ALP的值沒有顯著影響,而陽性對照5-FU組則表現(xiàn)一定的肝毒性。對AST的值,與對照組比較,有一些影響,但是都屬于正常值范圍內(nèi)。內(nèi)臟HE染色的病理表明,化合物GHY對內(nèi)臟組織無明顯可見的損害。因此,化合物GHY在體內(nèi)也不表現(xiàn)明顯毒性。結(jié)論綜上所述,2-ME衍生物GHY可以明顯的抑制體內(nèi)血管的新生,并且具有較低的細(xì)胞毒作用,GHY可以顯著的抑制HUVEC細(xì)胞的遷移,抑制HUVEC細(xì)胞的遷移的機(jī)制可能是通過抑制VEGFR通路中相關(guān)轉(zhuǎn)移蛋白的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。對于腫瘤細(xì)胞的作用方面,化合物GHY可以抑制腫瘤細(xì)胞MCF-7細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與侵襲,其機(jī)制可能是通過抑制EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。體內(nèi)試驗(yàn),GHY作用于MCF-7細(xì)胞裸鼠移植瘤,可以顯著抑制瘤組織的生長,且無明顯的毒性。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R96

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本文編號(hào)：1301839