發(fā)布時(shí)間：2017-12-15 23:14

  本文關(guān)鍵詞：桑枝總黃酮對(duì)肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究

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【摘要】：目的本研究通過構(gòu)建小鼠急性化學(xué)性肝損傷模型,用以研究桑枝總黃酮在體內(nèi)對(duì)肝損傷的保護(hù)作用,同時(shí)從體外實(shí)驗(yàn)角度對(duì)桑枝總黃酮在肝纖維化方面的作用進(jìn)行探討,旨在從整體和細(xì)胞水平、體內(nèi)和體外兩方面研究桑枝總黃酮抗肝損傷的作用,為其開發(fā)利用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1.分別采用CCl4、AP和D-GalN經(jīng)腹腔注射小鼠,以此來建立化學(xué)性肝損傷模型。各模型組中小鼠均分為正常對(duì)照組(NC)、模型對(duì)照組(MC)、桑枝總黃酮高劑量組(MTTF-h)、桑枝總黃酮中劑量組(MTTF-m)、桑枝總黃酮低劑量組(MTTF-1)及陽性對(duì)照組(聯(lián)苯雙酯,Dimethyl Diphenyl Bicarboxynate,DDB)。MTTF各劑量組和陽性對(duì)照組分別給予MTTF(112、56、28mg/kg)和DDB(150mg/kg),連續(xù)給藥7天,每天給藥 1 次。末次給藥 5 h 后,分別用 CCl4(0.1%)、AP(300 mg/kg)和 D-GalN(800 mg/kg)對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射,誘導(dǎo)三種急性化學(xué)性肝損傷模型。24小時(shí)后測(cè)定各型肝損傷小鼠肝臟、脾臟和胸腺指數(shù)、肝組織丙二醛(Malonyldialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase,SOD)活性,并觀察各組小鼠肝細(xì)胞損傷程度。同時(shí),測(cè)定各型急性化學(xué)性肝損傷小鼠的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic-pyruvic transaminase,ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic-oxalacetictransaminease,AST)、堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性、血清白蛋白(Serum ALBumin,ALB)含量以及總抗氧化能力(Total Antioxidam Capacity,T-AOC)。此外,以CC14為誘導(dǎo)的化學(xué)性肝損傷為例,測(cè)定肝組織Hyp和GSH含量變化,并于光鏡觀察小鼠肝損傷程度。2.體外培養(yǎng)HSC-T6細(xì)胞,將之分為MTTF干預(yù)組及DMSO對(duì)照組。藥物干預(yù)組分為5個(gè)亞組并給予不同濃度MTTF,對(duì)照組給予等體積DMSO。各組細(xì)胞經(jīng)過相應(yīng)處理后連續(xù)培養(yǎng)24 h、48 h和72 h,隨后MTT法檢測(cè)MTTF對(duì)HSC-T6細(xì)胞增殖的抑制作用及TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果1.CC14、AP、D-GalN作為誘導(dǎo)劑均能夠給小鼠的肝臟、脾臟以及胸腺造成損傷,主要表現(xiàn)為代償性腫大。不同劑量的MTTF均能夠降低化學(xué)性肝損傷導(dǎo)致的肝臟、脾臟以及胸腺腫大,其中特別以中、高劑量的作用效果最為顯著。CC14、AP、D-GalN均能夠使小鼠血清中的ALT、AST、ALP水平顯著上調(diào)(P0.05),降低ALB、T-AOC和SOD含量,同時(shí)促使肝組織中MDA含量增高(P0.05)。而當(dāng)采用中、高劑量MTTF作用于小鼠時(shí),能夠使其血清中ALT、AST、ALP含量明顯減少(P0.01),ALB和T-AOC水平顯著增高(P0.01)。中、高劑量MTTF能夠顯著降低肝組織中的MDA含量(P0.01),提高SOD的活性(P0.01)。MTTF各劑量組對(duì)于由CC14、AP、D-GalN所誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂肪變性、肝細(xì)胞腫脹壞死以及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等均具有不同程度的緩解作用,且中、高劑量MTTF在減輕上述病理癥狀方面效果更為顯著。2.MTTF在體外能夠?qū)SC-T6細(xì)胞的增殖產(chǎn)生直接抑制作用,同時(shí)該抑制作用于MTTF之間存在劑量依賴性。此外,MTTF對(duì)HSC-T6細(xì)胞中TGF-β1、Smad2和Smad3蛋白表達(dá)具有明顯的抑制作用。結(jié)論1.MTTF對(duì)于由CCl4、AP、D-GalN引起的小鼠急性化學(xué)性肝損傷具有一定預(yù)防和保護(hù)作用,其機(jī)制可能與抗氧化損傷作用有關(guān)。2.MTTF抑制肝纖維化的機(jī)制可能與其抑制肝星狀細(xì)胞增殖及抑制TGF-β1/Smad3信號(hào)途徑有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：1293782