本文關(guān)鍵詞：熊果酸和山奈酚對UVB損傷HaCaT細胞的保護作用及機制研究

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【摘要】：目的:研究十精丸中山茱萸和菟絲子的活性成分熊果酸和山奈酚對紫外線(UVB)損傷人皮膚角質(zhì)形成細胞(HaCaT)的保護作用,探討熊果酸和山奈酚對UVB損傷HaCaT細胞TNF-α、IL-6相關(guān)炎癥因子以及JNK、P-JNK、AKT、P-AKT信號通路的影響與調(diào)控機制,為十精丸防治皮膚光老化提供理論依據(jù)。方法:1.選取對數(shù)生長期HaCaT細胞,用劑量為60mJ·cm-2的UVB輻射,建立光老化HaCaT模型。2.用MTT法檢測HaCaT細胞的增殖率,篩選藥物的安全濃度與有效濃度。3.篩選濃度后用10-1mol·L~(-1)的熊果酸和10-10mol·L~(-1)的山奈酚處理光老化HaCaT細胞24h,檢測細胞中SOD活性及MDA含量;蛋白免疫印跡法(Western Blot)檢測細胞中TNF-α、IL-6、AKT、P-AKT、JNK、P-JNK等相關(guān)指標的蛋白表達量。結(jié)果:1.倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài),正常HaCaT細胞緊湊排列,邊界清晰,而光老化HaCaT細胞間隙變大,形狀不規(guī)則,邊界模糊;2.MTT結(jié)果顯示:當熊果酸濃度高于10-12mol·L~(-1)、山奈酚濃度高于l0-8mol·L~(-1)時會明顯抑制正常HaCaT的增殖(P0.01或P0.05),而在安全濃度范圍內(nèi),以濃度為10-14mol·L~(-1)的熊果酸和濃度為10-10mol·L~(-1)的山奈酚對光老化HaCaT的保護作用最明顯(P0.01)。3.與空白組相比,模型組SOD的活性顯著降低,MDA含量顯著提高(P0.01);與模型組相比,濃度為10-14mol·L~(-1)的熊果酸和濃度為10-10mol·L~(-1)的山奈酚可以明顯提高細胞內(nèi)SOD活性,降低MDA含量(P0.01);與空白組相比,模型組TNF-α和IL-6的蛋白表達量以及P-AKT/AKT和P-JNK/JNK的比值顯著升高(P0.01);與模型組相比,經(jīng)過濃度為10-14mol·L~(-1)的熊果酸和濃度為10-10mol·L~(-1)的山奈齡預處理后的光老化HaCaT細胞TNF-α和IL-6的蛋白表達量以及P-AKT/AKT和P-JNK/JNK的比值顯著降低(P0.01)。結(jié)論:熊果酸和山奈酚能夠促進光老化HaCaT細胞的增殖,提高細胞SOD活力,降低MDA含量,抑制TNF-α、IL-6炎癥因子的分泌同時下調(diào)磷酸化AKT和磷酸化JNK的表達,抑制JNK信號通路和AKT信號通路的激活,從而有效預防皮膚光老化的發(fā)生。
【學位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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