本文關(guān)鍵詞：替格瑞洛含藥血清對(duì)人胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1的損傷作用及機(jī)制研究

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【摘要】：目的:探究藥物替格瑞洛對(duì)人胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1的損傷作用及機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)人胃黏膜上皮細(xì)胞株GES-1,抽取一例服用替格瑞洛(180mg/d)后2h的急性冠脈綜合征(ACS)病人血液標(biāo)本,將其離心后取上層血清,與高糖培養(yǎng)液DMEM混合后配置成濃度分別為5%、10%、15%、20%的替格瑞洛含藥血清,同時(shí)取該病人服用替格瑞洛前的正常血清作為對(duì)照,與人胃黏膜上皮細(xì)胞株GES-1共同培養(yǎng)24h、48h及72h,采用倒置相差顯微鏡觀(guān)察正常對(duì)照組GES-1的形態(tài)以及各個(gè)濃度藥物與GES-1細(xì)胞共同培養(yǎng)24h后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變情況、噻唑藍(lán)試劑盒(MTT)測(cè)定GES-1細(xì)胞活力及增殖情況、流式細(xì)胞儀檢測(cè)各濃度組含藥血清與GES-1共培養(yǎng)24h后細(xì)胞凋亡情況,細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)各組細(xì)胞中Occludin、ZO-1蛋白表達(dá),透射電鏡觀(guān)察對(duì)照組和15%含藥血清實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞緊密連接結(jié)構(gòu)的變化,蛋白免疫印跡法檢測(cè)對(duì)照組和各濃度藥物組細(xì)胞中目標(biāo)蛋白Occludin及ZO-1的表達(dá)。結(jié)果:倒置相差顯微鏡下觀(guān)察發(fā)現(xiàn)對(duì)照組GES-1細(xì)胞數(shù)量較多,鋪滿(mǎn)整個(gè)視野,細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,外觀(guān)呈扁平長(zhǎng)梭狀,而實(shí)驗(yàn)組GES-1細(xì)胞數(shù)目減少,細(xì)胞外形變圓或者不規(guī)則、可見(jiàn)較多凋亡細(xì)胞漂浮于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi);MTT比色法顯示替格瑞洛含藥血清對(duì)GES-1細(xì)胞的損傷隨著濃度增加而加重,各濃度組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(P0.05),而同一組細(xì)胞不同培養(yǎng)時(shí)間下的細(xì)胞增殖抑制率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表明,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率隨著藥物濃度增加而逐漸增大,各濃度組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);細(xì)胞免疫熒光法顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞Occludin、ZO-1表達(dá)降低,陽(yáng)性染色區(qū)面積減小,平均光密度值降低:透射電鏡觀(guān)察發(fā)現(xiàn)對(duì)照組GES-1細(xì)胞胞膜完整、細(xì)胞間連接結(jié)構(gòu)緊密無(wú)缺損,可見(jiàn)橋粒,而實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞間緊密連接結(jié)構(gòu)有缺損破壞,橋粒消失,細(xì)胞間隙增大;蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組緊密連接蛋白Occludin、ZO-1表達(dá)量下降。結(jié)論:替格瑞洛作用于人胃黏膜上皮細(xì)胞后可抑制其增殖并促進(jìn)其凋亡,可使緊密連接蛋白Occludin及ZO-1的表達(dá)降低,從而損傷胃黏膜屏障。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R96

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本文編號(hào)：1289420